食品檢測(cè)中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的應(yīng)用

◎ 梁玉博

（信陽(yáng)市食品安全監(jiān)督所，河南 信陽(yáng) 464000）

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是基于免疫酶特點(diǎn)的免疫測(cè)定方法，其在使用過(guò)程中具有敏感度高、方便快捷、準(zhǔn)確度高等優(yōu)良特點(diǎn)。在單克隆抗體技術(shù)發(fā)展過(guò)程中，免疫試劑盒測(cè)試技術(shù)逐漸呈現(xiàn)了商業(yè)化的特點(diǎn)。食品問(wèn)題不僅與人體健康息息相關(guān)，而且對(duì)國(guó)計(jì)民生具有一定的影響，受到了政府及相關(guān)專業(yè)人士的極大關(guān)注。因此，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用具有非常重要的意義。

1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)流程

1.1 樣品預(yù)處理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在檢測(cè)過(guò)程中，一般需要一定的樣品預(yù)處理。預(yù)處理可能會(huì)在不同程度上破壞食品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，為了避免過(guò)程分析物質(zhì)提取出現(xiàn)問(wèn)題，可采用100%的水、甲醇、丁醇混合物物質(zhì)，按75∶25∶5的比例提取物質(zhì)。在特殊情況下，也可以采用超臨界萃取技術(shù)利用液相甲醇改性過(guò)的二氧化碳，結(jié)合三元混合溶劑的應(yīng)用，最大程度地降低酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)前期分析物質(zhì)處理的損失。

1.2 抗原合成及抗體選擇

在小分子物質(zhì)檢測(cè)過(guò)程中，由于其自身缺乏免疫抗原的特點(diǎn)，需要應(yīng)用免疫原性載體蛋白。對(duì)于半抗原改性環(huán)節(jié)，可綜合考慮偶聯(lián)比、位點(diǎn)、偶聯(lián)劑等因素，選擇相應(yīng)的偶聯(lián)載體蛋白結(jié)合位點(diǎn)，然后在相應(yīng)催化劑的作用下合成完全抗體。而在抗體選擇環(huán)節(jié)可根據(jù)具體檢測(cè)項(xiàng)目，結(jié)合效價(jià)、穩(wěn)定性、交叉反應(yīng)等因素，確定相應(yīng)的抗體偶合物。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法選擇

在食品安全檢測(cè)過(guò)程中，不同的檢測(cè)項(xiàng)目所需的檢測(cè)方法也有所區(qū)別，如直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法、間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)、抗原抗體復(fù)合物免疫法等。結(jié)合相應(yīng)食品檢測(cè)物質(zhì)濃度特點(diǎn)，可優(yōu)先選擇靈敏度最高的檢測(cè)方面，便于提高整體檢測(cè)效率。

2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在食品物質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 食品毒害物質(zhì)檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在食品毒害物質(zhì)中具有良好的應(yīng)用。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在食品毒害物質(zhì)檢測(cè)中主要用于黃曲霉毒素、SPF雞的檢測(cè)，隨后又逐漸出現(xiàn)了河豚毒素、玉米烯酮等毒素的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)[1]。在實(shí)際病毒害物質(zhì)檢測(cè)過(guò)程中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)主要有直接法、競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法等，其中直接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)具有簡(jiǎn)單、便捷且檢測(cè)限度低的優(yōu)點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中較廣泛。如利用直接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)可以對(duì)食品中致癌物質(zhì)丙烯酰胺進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)限達(dá)到65.70 μg/kg，可達(dá)到優(yōu)良的檢測(cè)靈敏度。

2.2 食品藥物殘留檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在食品藥物殘留中的檢測(cè)主要針對(duì)農(nóng)藥殘留，商品檢測(cè)試劑盒可對(duì)蔬菜、食品及其周邊環(huán)境中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行有效檢測(cè)。目前，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)針對(duì)殺菌劑、除草劑、殺蟲劑等常見藥物殘留具有良好的檢測(cè)效果。現(xiàn)階段常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)主要是利用相應(yīng)的免疫血清制作水、蔬菜、土壤等常見食品藥物殘留物質(zhì)試劑盒，如利用兔抗氨芐西林鈉血清可進(jìn)行乳制品中的氨芐西林鈉的檢測(cè)；用甲萘威免疫血清可利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)甲萘威殘留。在具體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)食品藥物殘留檢測(cè)過(guò)程中，主要是通過(guò)簡(jiǎn)單的前期試劑盒處理，進(jìn)行批量食品樣品的檢測(cè)，通過(guò)相應(yīng)抗體的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試驗(yàn)，可在檢測(cè)食品中的新霉素、慶大霉素、卡那霉素等殘留物質(zhì)檢測(cè)，還可以將相應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)殘留的實(shí)施方法進(jìn)行相關(guān)區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)的制定，從而進(jìn)一步提高區(qū)域內(nèi)食品安全檢測(cè)的準(zhǔn)確率，為區(qū)域內(nèi)藥物殘留檢測(cè)限度的有效降低提供合理的依據(jù)。

2.3 食品過(guò)敏原檢測(cè)

在食品過(guò)敏反應(yīng)中，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)主要用于魚類食品的過(guò)敏檢測(cè)。在實(shí)際應(yīng)用中，可采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)魚類過(guò)敏原進(jìn)行合理檢測(cè)，如將兔的抗鱈魚小清蛋白抗體多克隆產(chǎn)物作為捕獲劑，對(duì)多種魚類過(guò)敏原進(jìn)行有效檢測(cè)[2]。使用兔的抗鱈魚小清蛋白回收率可達(dá)到68%以上，且最低檢測(cè)限度為0.01 mg/kg，對(duì)于食品中過(guò)敏魚蛋白的控制具有良好的效果。此外，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)還可由于食品中芥末過(guò)敏原的檢測(cè)，其主要利用兔的多克隆抗芥末血清作為檢測(cè)試劑，在堿性磷酸酶的催化下，檢測(cè)回收率可達(dá)95%以上，為食品監(jiān)管機(jī)構(gòu)監(jiān)管職權(quán)的有效實(shí)施提供了良好的保障。現(xiàn)階段，我國(guó)市場(chǎng)中對(duì)于食品中過(guò)敏原的檢測(cè)，主要采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)試盒。

2.4 食品微生物檢測(cè)

微生物污染是現(xiàn)階段我國(guó)食品的主要安全威脅之一，常規(guī)的微生物學(xué)檢驗(yàn)檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)且整體環(huán)節(jié)較復(fù)雜，對(duì)于整體食品微生物的有效檢測(cè)造成了不利的影響，而通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)微生物檢測(cè)可以通過(guò)單克隆抗體的制備，有效檢測(cè)食品中的大腸桿菌、沙門氏菌、鐮刀菌等有害微生物?，F(xiàn)階段，直接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)針對(duì)沙門氏菌等微生物的最低檢測(cè)限度可達(dá)到500 CFU/g，且整體檢測(cè)時(shí)間可在22.0 h以內(nèi)。此外，在社會(huì)發(fā)展過(guò)程中轉(zhuǎn)基因食品也成為我國(guó)食品安全的主要威脅因素，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)可對(duì)轉(zhuǎn)基因食品中的CP4的蛋白質(zhì)進(jìn)行快速檢測(cè)，而酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒的推出，進(jìn)一步推動(dòng)了轉(zhuǎn)基因酶聯(lián)免疫檢測(cè)工作的進(jìn)程。

3 結(jié)語(yǔ)

以往的食品檢測(cè)方法具有工序繁瑣、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的弊端，并無(wú)法在大批量食品檢測(cè)中發(fā)揮良好的效益。而酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)通過(guò)相關(guān)免疫試劑盒的應(yīng)用，具有簡(jiǎn)單、快捷、準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)階段經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)已加大了先進(jìn)檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用，且進(jìn)行了綠色貿(mào)易壁壘的設(shè)置，對(duì)于我國(guó)檢測(cè)基礎(chǔ)造成了一定的沖擊。因此，我國(guó)應(yīng)結(jié)合現(xiàn)階段發(fā)展情況，加大高靈敏度食品檢測(cè)技術(shù)的研制，結(jié)合藥物殘留等衛(wèi)生指標(biāo)的細(xì)化制定，為我國(guó)食品行業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展提供保障。

[1]徐 鎮(zhèn) 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品檢測(cè)領(lǐng)域中的應(yīng)用進(jìn)展[J].食品安全導(dǎo)刊，2017（27）：122.

[2]秦蕾影，陳 昊，項(xiàng)水蘭，等.酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用研究[J].農(nóng)業(yè)科技與信息，2016（32）：41-42.