陰性種豬免疫豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗抗體變化

許光勇,王朝軍,楊漢春

(1.中國農業大學動物醫學院,北京 海淀 100193;2.北京養豬育種中心,北京 海淀 100194)

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS),俗稱“豬藍耳病”,是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種臨床上以妊娠中后期母豬流產、早產,窩均產木乃伊胎、死胎和弱仔數增多,生長豬伴隨呼吸道疾病等為主要特征的病毒性傳染病[1]。自1987年PRRS首次在美國發生開始,相繼于1990年在以德國為代表的歐洲國家暴發或出現,1995年在中國出現,隨后以日本、韓國等為代表的亞洲國家也陸續報道,直至2006年PRRS在中國呈現大面積暴發與流行,使中國養豬業損失慘重,近10年來PRRS持續并長期影響中國養豬業發展[2-5]。由于國內養殖環境相對復雜,PRRS防控一般都是采取綜合措施,疫苗干預就是其中一項重要舉措,故探索PRRS活疫苗接種陰性種豬群后抗體變化規律具臨床應用價值。

1 材料與方法

1.1 試驗豬 2016年3月北京養豬育種中心新引進800頭祖代后備種豬,經疾病篩查表明PRRS抗體陰性。按豬舍內均勻分布采樣原則,挑選110～230日齡后備公、母豬各75頭進行連續追蹤前腔靜脈采集血液。鑒于肢蹄問題、自然死亡、育種規劃等原因淘汰,截止2017年12月3日,剩余公豬36頭,母豬57頭。

1.2 方法 2016年4月11日對全部后備種豬肌肉注射PRRS活疫苗(ATCC VR-2 332株)1頭份,2017年1月20日母豬二免PRRS活疫苗1頭份。

公豬于首免后3、6、10、20、27、33、39、43、59、70 周和85周前腔靜脈采血,母豬于首免后3周、6周、10周、20 周、27 周、33 周、39 周以及二免后 3、16、30、46周前腔靜脈采血,分離血清并于-20℃冰箱保存。

1.3 PRRS抗體檢測 PRRS X3抗體檢測試劑盒,美國IDEXX公司,批號J661。參照試劑盒說明書進行操作,試驗成立條件：陽性對照平均值減去陰性對照平均值必須大于或等于0.15,同時陰性對照平均值必須小于或等于0.15。結果判定：如果S/P值低于0.40,樣品判定為PRRSV抗體陰性;如果S/P值大于或等于0.40,樣品判定為PRRSV抗體陽性。S/P值=(樣本A650- 陰性對照平均值)/(陽性對照平均值 - 陰性對照平均值),CV值又稱離散度=(標準偏差/樣本平均值)×100%。

2 結果與分析

2016年4月至2017年12月試驗期間,試驗豬共采血11次,分離血清進行PRRS抗體檢測,結果見表1～4。

表1 公豬PRRS抗體統計結果

由表1可知,公豬接種PRRS減毒活疫苗,S/P平均值3周為1.51,20周為0.56,27周為0.27;PRRS抗體陽性率3周為100%,20周為61.11%,27周為22.22%;S/P平均值和抗體陽性率均隨時間逐漸降低。因此,公豬免疫20周能提供有效地抗體保護。CV值3周為40%、再逐漸升高并于39周達到峰值123%,之后維持在90% ～112%。

表2 母豬PRRS抗體統計結果

由表2可知,母豬首次接種PRRS減毒活疫苗,S/P平均值3周為1.61,39周為0.39;PRRS抗體陽性率3周為100%,20周為73.68%,27周為47.37;S/P平均值和抗體陽性率也隨時間逐漸降低。綜合S/P平均值和抗體陽性率,認為母豬首免提供有效地保護時間為20～27周。CV值3周為34%,再逐漸升高并于27周到峰值96%。間隔40周二免PRRS減毒活疫苗,S/P平均值和抗體陽性率再次升高,即二免3周升高至0.73和64.91%,隨后逐漸下降,16周降為0.31和26.32%;二免3周CV值保持在75%,之后維持在62% ～66%。所以,二免能夠提高母豬S/P平均值和抗體陽性率。

表3 公豬PRRS抗體S/P值區間分布

由表3可知,公豬接種PRRS減毒活疫苗,S/P值高于2.5僅出現于3周,比例為8.33%。20周以內S/P值在0.4～2.0比例超過60%。S/P值小于0.4所占比例隨時間逐漸升高,85周達100%。

表4 母豬PRRS抗體S/P值區間分布

由表4可知,母豬接種PRRS減毒活疫苗,首免3周、6周以及二免3周都出現了S/P值高于2.5。首免20周、27周以及二免3周S/P值在0.4～2.0比例分別為71.93%、45.61%和61.4%。S/P值小于0.4所占比例隨時間逐漸升高,二免3周有一次降低。

3 討論

S/P值一般用來評判陰性豬接種PRRS疫苗的免疫效果,陽性豬感染PRRSV程度。本試驗后備種豬(包括公豬和母豬)接種PRRS減毒活疫苗前PRRS抗體均是陰性,S/P平均值首免3周公豬和母豬分別升至1.51和1.61,與胡成玉報道的免疫VR2332株PRRS活疫苗后21天S/P平均值為1.59基本一致[6]。S/P平均值首免6周公豬和母豬已分別降至1.10和1.16,之后隨時間逐漸降低。由此可知,S/P平均值公豬和母豬均是首免3周最高,6周已下降,故初步判斷公豬和母豬的S/P平均值應該在6周之前就已經達到峰值。公豬20周和27周S/P平均值分別為0.56和0.27,母豬39周S/P平均值為0.39,說明公豬和母豬S/P平均值降至0.4的臨界值時間分別處于接種PRRS活疫苗第20～27周之間和39周。母豬間隔40周再次接種PRRS減毒活疫苗,二免3周S/P平均值升高至0.73,16周降至0.31,之后隨時間逐漸降低,故初步判斷母豬S/P平均值在二免16周之前就降到了臨界值0.4。首次接種PRRS活疫苗后,公豬和母豬S/P平均值在6周之后均呈現下降趨勢,但公豬S/P平均值始終較母豬要低,這可能是母豬比公豬對PRRS活疫苗產生的免疫應答更好。母豬二免后比公豬的S/P平均值明顯要高,說明二免PRRS活疫苗能夠有效提高豬群S/P值,本結果與施開創等報道的接種PRRS活疫苗能夠提高抗體水平結果一致[4]。

抗體陽性率是指S/P值大于或等于0.4所占的比例,能反應疫苗免疫效果,豬只感染PRRSV情況。首免10周抗體陽性率始終保持在90%以上,與曾顯成等報道的免疫豬場公豬陽性率最高為94.3%相符[7],與李明波等人報道的35日齡仔豬免疫后4周抗體陽性率為85%也有所差別[8],這些可能與采樣時間和選擇的試驗豬種類不同所導致。隨著時間抗體陽性率逐漸降低,公豬和母豬抗體陽性率分別于20周和27周降到61.11%和47.37%。母豬二免抗體陽性率會有一個上升階段,之后再次下降。由表1和表2可知,母豬抗體陽性率較公豬始終要高。

CV值又稱離散度,主要是指取值之間的差異程度,用來衡量風險大小。首免3周公豬和母豬CV值分別為40%和34%,均屬最低水平,之后隨著時間推移離散度越來越高,公豬于39周達到峰值123%,母豬于27周達到峰值96%。母豬二免后CV值處于62% ～75%,而同期公豬CV值維持在90%～112%高水平區間。若CV值以60%為臨界值,公豬和母豬均于首免20周達到臨界值,母豬二免后除3周外其他時間均處于60%附近。由此初步判斷,公豬和母豬在首免20周以內抗體整齊度較好;母豬二免后CV值較公豬低,說明二免能夠降低抗體離散度,使豬群抗體水平更加整齊。這與曾顯成等報道的接種過PRRS疫苗的豬場抗體離散度明顯低于非免疫豬場的結果一致[7],與李明波等人報道的CV值在48% ～56%有所差異[8],可能與豬場PRRSV感染背景有關,本試驗豬場生物安全較高,不存在野毒感染情況。

豬只個體S/P值區間分布能更加精確輔助判定豬群感染PRRSV程度和豬群健康管理,其中S/P值小于0.4表明PRRS抗體陰性,0.4～2.0是陽性豬場比較理想的狀態,2.0～2.5為選擇性區間,高于2.5一般判定為感染PRRSV野毒或免疫了高致病性毒株疫苗。按照豬群健康程度,0.4～2.0還可細分為0.4～1.0、1.0～1.5和1.5～2.0區間,根據企業需求可以選擇不同標準進行操作與分析。后備種豬接種PRRS減毒活疫苗后,公豬和母豬均于3周出現S/P值高于2.5的個體,但所占比例不高,并迅速下降。由表3和表4可知,首次接種PRRS活疫苗,公豬和母豬S/P值處于0.4～2.0比例都是先增后減的趨勢,均于10周達到最大。公豬S/P值小于0.4所占比例在20周和27周分別達到38.89%和77.78%,說明首免后第20～27周時間有大量的公豬抗體變為陰性,并于85周完全轉陰。母豬S/P值小于0.4所占比例在20周和27周也分別達到26.32%和52.63%,其變化規律與公豬基本相同;二免3周,母豬S/P值小于0.4所占比例再次降低至35.09%,隨后逐漸升高,說明二免能夠提高抗體陽性率。對比公豬和母豬免疫效果,母豬抗體陽性率較公豬始終要高,這與前面所提到的母豬比公豬對PRRS活疫苗的免疫應答更好是相吻合的。

本試驗結果表明,陰性種豬(公豬和母豬)接種PRRS活疫苗,20周抗體陽性率維持在60%以上,S/P平均值處于0.4以上,CV值位于60%范圍,S/P值處于0.4～2.0區間比例在60%以上,故認為陰性種豬接種PRRS活疫苗20周內免疫效果良好。