miRNA在膀胱癌的凋亡通路機(jī)制及標(biāo)志物研究進(jìn)展

駱 陽，傅曉儀，孟民杰 (廣東藥科大學(xué)生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院,廣東廣州510006)

0 引言

膀胱癌為全球高發(fā)的惡性腫瘤之一［1］。根據(jù)美國“膀胱癌——癌癥統(tǒng)計(jì)資料”于2018年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù),膀胱癌將成為第六大常見腫瘤。約95%的膀胱癌為移行細(xì)胞癌,其余約5%以鱗狀細(xì)胞癌為主。

微小RNA(micro RNA,miRNA)是一種小的非編碼RNA分子(包含約22個(gè)核苷酸),主要存在于植物、動(dòng)物和一些病毒中,在RNA沉默和基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控起作用［2］。miRNA主要是通過與信使RNA(mRNA)堿基互補(bǔ)配對從而發(fā)揮分子生物學(xué)功能。miR分子可以通過以下三方面發(fā)揮作用：①miR鏈分裂成兩段從而降解靶基因mRNA,miRNA與靶基因互補(bǔ)結(jié)合；②miR與靶基因不完全互補(bǔ)結(jié)合,在不影響mRNA穩(wěn)定性的同時(shí)影響其翻譯,mRNA通過核糖體轉(zhuǎn)化成蛋白質(zhì)的效率降低；③miR與靶基因作用,使 mRNA 通過縮短 poly［A］尾而失穩(wěn)［3－4］。

許多的miRNA與癌癥相關(guān)［5］。miRNA參與細(xì)胞的增殖、凋亡等過程,在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異常。細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)受到激活機(jī)制的嚴(yán)格調(diào)控,一旦凋亡發(fā)生,必然導(dǎo)致細(xì)胞死亡［6］。所以,腫瘤研究多以細(xì)胞凋亡作為切入點(diǎn)進(jìn)行深入研究。兩種細(xì)胞凋亡激活機(jī)制是內(nèi)源性途徑(又稱線粒體途徑)和外源性途徑。內(nèi)源性途徑主要分為依賴Caspase通路和非依賴Caspase通路。細(xì)胞色素C從線粒體中釋放出來,它與凋亡蛋白酶激活因子-1(Apaf-1)和ATP結(jié)合,然后與pro-caspase-9結(jié)合,形成一種稱為凋亡體的蛋白復(fù)合物。凋亡小體將前caspase切割成caspase-9的活性形式,進(jìn)而激活效應(yīng)物 caspase-3［7］。 Bcl-2家族包括促凋亡蛋白如Bax、Bak和抗凋亡蛋白如Bcl-2、Mcl-1,在線粒體途徑中發(fā)揮重要作用。非依賴Caspase通路是通過線粒體釋放AIF(Apoptosis induce factor,凋亡誘導(dǎo)因子)而發(fā)生凋亡反應(yīng),但在細(xì)胞水平上難以檢測［8］。外源性途徑的凋亡機(jī)制主要是腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)誘導(dǎo)的模型和Fas-FasL介導(dǎo)的模型,兩者均涉及到與外部信號耦合的TNF受體家族的信號分子［9］。TNF-R1和Fas激活后,在 Bcl-2家族的促凋亡(Bax、Bid、Bak或Bad)和抗凋亡(Bcl-xL和Bcl-2)成員之間建立了平衡。這種平衡是在線粒體外膜中形成的凋亡前同聚二聚體的比例。凋亡前同型異構(gòu)體需要使線粒體膜具有滲透性,以釋放caspase激活劑?；钚孕?yīng)物caspase水解降解宿主細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)以執(zhí)行細(xì)胞死亡程序。細(xì)胞凋亡的大致過程可分為：接受凋亡信號、凋亡調(diào)控分子間的相互作用、蛋白水解酶的活化、進(jìn)入連續(xù)反應(yīng)過程。

1 miRNA在膀胱癌凋亡通路機(jī)制的研究進(jìn)展

mTOR通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的重要細(xì)胞內(nèi)信號通路。PI3K激活磷酸化并激活A(yù)KT,使其在質(zhì)膜中定位［10］。 AKT具有激活 CREB、抑制 p27、在細(xì)胞質(zhì)中定位 FoxO、激活 mTOR等下游效應(yīng),影響 p70和4EBP1 的轉(zhuǎn)錄［11－12］。 該通路被 PTEN、GSK3β、HB9等多種因子拮抗［11,13－14］。 在許多癌癥中,該通路過度活躍,因此也成為研究熱點(diǎn)之一(表1)。

1.1 PI3K/AKT/mTOR信號通路 PI3K/AKT/

表1

本凋亡通路的miRNA研究主要集中于PI3K/AKT/mTOR的上游,即 PI3K、AKT、PTEN這 3個(gè)位點(diǎn)。由于凋亡通路之間是相互交通的,下游分子可能會(huì)涉及到多條分子信號通路。下游分子的主要研究集中于p53、p21和p27。p53是研究最多且較為明確的抑癌基因,并且與細(xì)胞周期相關(guān)。p21和p27也是周期相關(guān)的分子,AKT能靶向調(diào)控p27的表達(dá)。腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡情況可用于疾病進(jìn)展的動(dòng)態(tài)監(jiān)測。細(xì)胞周期與藥物半衰期相關(guān),腫瘤用藥時(shí)間和間隔的確定可根據(jù)腫瘤細(xì)胞的周期情況進(jìn)行調(diào)整。

1.2 MAPK/ERK信號通路 又稱Ras-Raf-MEKERK通路,它將細(xì)胞表面受體的信號傳遞給細(xì)胞核內(nèi)的DNA。這一途徑包括許多蛋白質(zhì),包括MAPK(絲裂原激活蛋白酶,起初稱為ERK,細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶),此通路成分是在癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的,也成為癌癥治療的研究靶向之一(表2)［38］。

此信號通路把細(xì)胞膜表面受體信號傳遞到細(xì)胞核中,研究主要集中在上游分子MAPK和ERK中。

1.3 JAK-STAT細(xì)胞通路 JAK-STAT信號通路是一條由細(xì)胞因子刺激的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及免疫調(diào)節(jié)等許多重要的生物學(xué)過程。該通路將細(xì)胞外的化學(xué)信號傳遞到細(xì)胞核,通過轉(zhuǎn)錄過程激活基因。與其它信號通路相比,這條信號通路的傳遞過程相對簡單,它主要由三個(gè)成分組成,即酪氨酸激酶相關(guān)受體、酪氨酸激酶JAK和轉(zhuǎn)錄因子 STAT(表 3)［43］。

表2

表3

JAK-STAT細(xì)胞通路研究相對較多,因?yàn)榇送废鄬ζ渌繁容^簡單,只有JAK、STAT和酪氨酸相關(guān)受體3部分組成。JAK研究較多的是JAK1,STAT中研究較多的是STAT3。

1.4 Bcl-2家族 以其在線粒體中調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡最為著名。Bcl-2家族蛋白由促進(jìn)或抑制細(xì)胞凋亡的成員組成,通過調(diào)控線粒體外模滲透(MOMP)來控制細(xì)胞凋亡,是細(xì)胞凋亡內(nèi)通路的關(guān)鍵步驟(表4)［48］。

表4

Bcl-2家族中研究最多的是Bax和Bcl-2,miRNA對于腫瘤凋亡也主要集中研究此兩分子。其中,Bax為促凋亡分子,同為促凋亡的家族分子有Bak、Bad和Bid等。Bcl-2為抗凋亡分子,同為抗凋亡分子的還有Bcl-xL。研究中多采用Bax/Bcl-2比值來表示凋亡的情況的進(jìn)展,比值升高趨于凋亡,比值降低趨于抗凋亡。細(xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡的過程,通過Bax/Bcl-2的比值來確定腫瘤細(xì)胞的凋亡情況,可用于疾病進(jìn)程和用藥過程的動(dòng)態(tài)監(jiān)測。

2 miRNA在膀胱癌腫瘤標(biāo)志物的研究進(jìn)展

2.1 癌基因作用的miRNA 具有癌基因作用的miRNA在腫瘤發(fā)生的時(shí)候出現(xiàn)或者表達(dá)上調(diào)。其在腫瘤中表達(dá),參與編碼腫瘤形成的蛋白質(zhì),與腫瘤的生成和發(fā)展密切相關(guān)(表5)。

具有癌基因相關(guān)的miRNA大多的作用靶點(diǎn)位于凋亡相關(guān)通路。癌基因的作用主要通過調(diào)控凋亡信號通路上的分子來實(shí)現(xiàn),參與癌基因的轉(zhuǎn)錄激活,與癌癥的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)化有著密切的關(guān)系。作為具有癌基因作用的miRNA,可作為腫瘤的診斷指標(biāo)。通過動(dòng)態(tài)檢測癌基因作用的miRNA,可為用藥檢測以及疾病預(yù)后提供依據(jù)從而做出相關(guān)判斷。

2.2 抑癌基因作用的miRNA 具有抑癌作用的miRNA能夠保護(hù)細(xì)胞不受腫瘤侵襲,抑制腫瘤表達(dá),參與編碼抑制腫瘤形成的蛋白質(zhì)。當(dāng)其活性減少或消失時(shí),細(xì)胞可能發(fā)展成為腫瘤(表6)。

表5

表6

具有抑癌基因的miRNA主要通過靶向調(diào)控凋亡相關(guān)通路分子和周期相關(guān)分子進(jìn)行作用,在維持染色體穩(wěn)定性、促進(jìn)細(xì)胞分化與衰老以及調(diào)控細(xì)胞增生等過程起重要作用。具有抑癌基因的miRNA可在正常組織中存在并表達(dá),在惡性病變組織中突變或者失活,可作為腫瘤診斷的標(biāo)志物,也可作為腫瘤靶向治療手段之一。

3 結(jié)論與展望

膀胱癌目前主要是以手術(shù)切除膀胱腫瘤、化療、放療等作為治療手段,并且以影像學(xué)檢查作隨訪［73］。無論是手術(shù)還是其他治療方式,都有較大的副作用和一定的復(fù)發(fā)率。有創(chuàng)的治療方法難以獲得多數(shù)人的接受。無創(chuàng)的靶向治療需求日益增長。

miRNA在腫瘤中參與分子信號轉(zhuǎn)導(dǎo),同時(shí)也可作為腫瘤標(biāo)志物。隨著對miRNA的深入機(jī)理研究,miRNA芯片技術(shù)也成為生物信息學(xué)的前瞻性課題和新思路。miRNA高通量檢測技術(shù)一旦普及使用,將大大縮短檢測時(shí)間,并且能夠?qū)iRNA和疾病的關(guān)系進(jìn)行研究。miRNA作為癌癥治療的工具或者靶點(diǎn)都是相當(dāng)有前景的［74］。靶向治療被認(rèn)為是癌癥的最佳治療方式,它能準(zhǔn)確識別患者疾病本身及治療過程中的進(jìn)行性風(fēng)險(xiǎn)。在一些研究中發(fā)現(xiàn)特異性的miRNA作為腫瘤拮抗劑發(fā)揮作用,并直接靶向信號通路轉(zhuǎn)錄因子促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡。miRNA無論作為診斷標(biāo)志物或治療靶點(diǎn),都與目前提倡的“精準(zhǔn)治療”不謀而合。miRNA可利用其表達(dá)水平來預(yù)測預(yù)后,也可作為治療期間動(dòng)態(tài)監(jiān)測的靶標(biāo)。

雖然miRNA能作為疾病標(biāo)志物為臨床提供診治的依據(jù),但現(xiàn)階段臨床診療指南中涉及miRNA作為診斷指標(biāo)的仍然不多。目前膀胱癌的診斷依然以膀胱鏡檢查及脫落細(xì)胞學(xué)為金標(biāo)準(zhǔn)。許多疾病的發(fā)生出現(xiàn)了核酸層面的改變,但未達(dá)到細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,以至于疾病得到診斷的時(shí)候已經(jīng)發(fā)展到比較后期階段。miRNA的種類繁多,如何選擇高效的生物標(biāo)志物提高診療效率也是一個(gè)挑戰(zhàn)。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展和分子標(biāo)志物的深入研究,miRNA有望成為腫瘤早期診斷的新標(biāo)準(zhǔn)。

miRNA在腫瘤中參與多種信號分子的靶向調(diào)控,有望作為日后腫瘤靶向治療的手段之一。但目前miRNA仍處于基礎(chǔ)研究階段,對于將來用于臨床治療還有相當(dāng)長的一段距離。miRNA對于腫瘤靶向治療的技術(shù)開發(fā)也是目前的一大難題。隨著分子生物學(xué)和基因治療技術(shù)的發(fā)展,miRNA治療癌癥在將來是有可能實(shí)現(xiàn)的。