羊冷凍精液的制作與應用技術研究

孟根巴根那

（內蒙古呼倫貝爾市鄂溫克族自治旗紅花爾基鎮畜牧獸醫站，呼倫貝爾 021100）

0 引言

羊人工授精技術是畜牧業生產中家畜繁育改良的一種技術含量較高的生物技術。推廣羊冷配人工授精技術能大幅度提高優秀種公羊的利用效率，方便羊品種改良，減少種公羊的購買量，節約成本。同時在進行人工授精作業前，由于種公羊的精液是經過優良的選擇，冷凍精液的精液質量高于普通種公羊，因此通過應用冷配受精技術，能極大提高改良效果，縮短改良周期。羊冷凍精液的制作是整個人工授精技術的關鍵環節，目前應用羊冷凍精液較為先進的國家主要有法國、英國、俄羅斯，這3個國家的羊冷配受胎率普遍在60%以上[1]。我國從20世紀70年代開始應用冷配人工授精技術，但是受胎率一直維持在60%以下，與常溫羊人工授精技術配種存在一定差距。大量實踐經驗表明，羊冷凍精液受胎率低不僅是因為精液解凍后活性受到影響，同時還受到整個精子細胞頂體完整性和細胞結構完整性的影響，而這部分的影響主要取決于羊冷凍精液的制作技術是否過關。

1 材料與方法

1.1 材料

研究選擇的公羊主要為道賽特種公羊7頭、薩福克種公羊8頭。選擇的儀器設備主要有電子天平、攪拌器、蒸餾水、電烤箱、高壓滅菌器、顯微鏡、恒溫板密度儀、恒溫水浴鍋、細管分裝一體機、冷凍儀、冰箱、消毒柜、精子圖像分析儀。研究共配置了4種保護液的配方，配方一是由檸檬酸鈉、乳糖、卵黃、甘油、青霉素、鏈霉素組成，使用量分別為1.5 g、6 g、20 mL、5 mL、10萬國際單位、10萬國際單位；配方二是由檸檬酸鈉、乳糖、卵黃、甘油、青霉素、鏈霉素組成，使用量分別為4 g、3.6 g、13 mL、5 mL、10萬國際單位、10萬國際單位；配方三是由檸檬酸鈉、乳糖、卵黃、三基、甘油、青霉素、鏈霉素組成，使用量分別為4 g、4 g、13 mL、0.08 g、5 mL、10萬國際單位、10萬國際單位；配方四為脫脂奶粉、甘油、檸檬酸鈉、葡萄糖、青霉素、鏈霉素，使用量分別為2.4 g、6 mL、1.8 g、3 g、10萬國際單位、10萬國際單位。

1.2 方法

采精期間要按照繁殖時期的飼養配方進行科學飼喂。確保種公羊飼料營養價值全面，身體膘情適宜。在采精前，應該對各個器械設備進行嚴格的衛生消毒，確保采精過程中不會導致各種致病菌感染，提高采精質量。同時還應該做好采精室的衛生消毒工作，認真清掃，然后使用消毒藥劑，全面噴灑消毒。在采精作業前，使用清水對臺羊的后區進行全面沖洗，擦洗干凈后，選擇使用1%的高錳酸鉀溶液進行全面消毒。同時還應該做好采精種公羊剝皮和腹部的衛生消毒，這樣能減少精液中微生物的數量[2]。同時采精前可以適當對種公羊采精部位的羊毛進行修剪。按照常規人工授精方法，假陰道采集新鮮精液。采集精液時，一定要保持室內清潔、衛生、干燥、安靜，假陰道內的溫度控制在41 ℃左右。采精時要確保各個采精部件之間連接完好，假陰道內部潤滑良好。采精結束后，使用消毒過的衛生紙或紗布包裹住采精瓶，并將采精瓶外層擦拭干凈，帶回實驗室鏡檢稀釋。

1.3 精液品質鑒定

精液采集完畢后，帶回實驗室觀察精液顏色，正常的精液顏色呈現云紋狀白色，氣味正常，pH值為6.4～6.8，每次射精量在0.8 mL以上，每毫升的精子密度保持在20億個以上，頂體完整率為40%，精子畸形率為14%。凡是夾雜著血液、毛發和其他污染物的精液，不能用于精液稀釋和配種。

1.4 精液稀釋和冷凍

采集到的精液進行鑒定，合格后按照要求，將其劃分為四等。在稀釋前，應該確保配制好的稀釋液經過水浴巴氏消毒。通常采用上午人工采精，精液稀釋，機械壓裝管，中午精液平衡，下午冷凍[3]。平衡時間通常控制為4～5 h。精液稀釋完畢后可進行分裝，將稀釋好的精液放置在細管自動分裝機內分裝，每個細管容量為0.25 mL。細管制作完畢后，對氣管進行冷凍處理，冷凍結束后，抽取2%的比例進行解凍后的質量檢驗，確保凍精符合標準。

1.5 冷凍精液解凍和輸精

精液解凍采用水浴法，使用鑷子從液氮罐中取出吸管凍精，放入40 ℃的溫水中，解凍15 s。細管凍精解凍完畢后，放入輸精槍內，采用內窺鏡輸精到經過發情鑒定的母羊子宮頸口內。在母羊的整個情期使用2次輸精法，能極大提高母羊的受胎率。

2 結果

2.1 不同稀釋液對精液品質的影響

試驗結果顯示，配方三有利于提高凍精的成活率，多次解凍后，凍精的成活率普遍在45%以上，與其他3種稀釋液相比，存在較大差異性，見表1。

表1 不同稀釋液對精液品質的影響 單位：%

2.2 冷凍精液對母羊受胎率的影響

研究共選擇了100頭經過發情鑒定的母羊，采用人工授精的方式，進行2次輸精作業。輸精前按照隨機原則，將其劃分為5個組別，前4組分別使用上述4種稀釋液配制的冷凍精液進行人工授精；第5組作為對照組，采用新鮮精液人工授精技術進行授精作業。試驗結果顯示，前4組的母羊受胎率普遍在60%以上，對照組的受胎率較為接近。本次研究制備的冷凍精液受胎效果接近和達到了常溫條件下的授精水平，見表2。

表2 冷凍精液對母羊受胎率的影響

3 結論

通過本次冷凍精液的制作發現，該項工作是一項技術要求很高的系統性工作，冷凍精液的質量與操作過程的各個環節緊密相連，其中對稀釋液的選擇尤為重要。此外，在進行冷凍精液制作時，為加快羊冷配改良效果，采用試驗研究和推廣相結合的方法[4]。在轄區范圍內的多個鄉鎮開展了羊冷配改良，構建了完善的改良體系，使技術在廣大基層地區得到了進一步的推廣和應用。