影響凝血4項檢測結果異常原因的研究

陳 勇，凌 建，徐 容，李 倩

(四川省綿陽市人民醫院檢驗科 621000)

凝血4項檢測廣泛用于出血性疾病的輔助診斷、口服抗凝藥的監測及術前篩查凝血性疾病等，是臨床極為重要的檢查手段及重要的實驗室檢測指標。包括凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(Fib)，其結果的準確性和可靠性直接影響臨床疾病的診斷和治療，以及醫患關系。由于凝血在實驗室檢測具有一定的特殊性，檢測不是對某一種特定物質的分析，而是對一系列酶促反應終點的監測，所以檢測結果受(如凝血標本采集量、離心時間、存儲、標本是否溶血等)諸多因素的影響[1]。分析凝血4項檢測結果的異常因素，具有提高檢測結果的準確性、可靠性和提高治療正確性的重要意義?，F探討各種影響凝血4項檢測結果的因素，為常規臨床檢驗工作更好地控制不良因素，建立該實驗室質量控制標準而提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機選取859例于2016年1-12月在該院體檢中心進行的健康體檢者作為研究對象，凝血功能經臨床檢測均正常。采用美國BD(碧迪)公司生產的真空凝血采血管(109mmol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝)，由專職護士進行空腹(禁食8 h以上)平靜狀態下，采集靜脈外周血2.0 mL。

1.2儀器與試劑 日本希斯美康(Sysmex)公司生產的CA550全自動血凝儀，試劑均為原裝進口配套試劑，檢測前試劑預熱15～20 min。離心儀器為北京時代北利離心機公司生產的DT5-3型低速自動平衡離心機。均嚴格按照試劑盒說明書，以及CA550離心機的標準進行操作。

1.3方法 對5組標本進行凝血4項檢測：(1)采血量小于2.0 mL(采血量不足)的標本57例，采血量大于2.0 mL(采血量過量)的標本64例，以及為該部分對象重新采集2.0 mL靜脈血的121例標本。(2)3 000 r/min離心，離心時間為5、10、15 min的標本分別為62、60、63例。(3)60例標本充分混勻后，用一次性塑料吸管吸出約1 mL至潔凈塑料試管中，得到2份相同的血液標本，第1份3 000 r/min離心15 min，第2份4 000 r/min離心5 min。(4)室溫(20～25 ℃)環境下儲存1、2、4 h的標本分別為57、53、50例，4 ℃環境下儲存1、2、4 h的標本分別為56、58、53例，在各自儲存時間達到后及時檢測，以及隨機選取的55例標本。(5)56例肉眼觀察血漿為淺紅色顏色的溶血標本，與55例肉眼觀察血漿顏色正常的未溶血標本。

2 結 果

2.1不同采集量對凝血4項檢測的結果比較 采血量小于2.0 mL的標本和大于2.0 mL的標本檢測PT、APTT、TT均明顯長于重新采血合格的標本(P<0.05)，但Fib檢測結果短于重新采血合格的標本(P<0.05)。見表1、2。

表1 采血量不足對凝血4項檢測的結果比較

表2 采血量過量對凝血4項檢測的結果比較

2.2不同離心時間對凝血4項檢測的結果比較 標本經3 000 r/min離心5、10、15 min后，PT、APTT、TT、Fib檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同離心時間對凝血4項檢測的結果比較

2.3不同條件下制備的乏血小板血漿的凝血4項檢測結果比較 標本經3 000 r/min離心15 min與經4 000 r/min離心5 min所制備的乏血小板血漿的檢測結果比較，PT、APTT、TT、Fib的檢測結果差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 不同條件下制備的乏血小板血漿的凝血4項檢測結果比較

2.4不同儲存時間對凝血4項檢測的結果比較

2.4.1室溫環境下儲存1、2、4 h檢測結果比較 標本在室溫(20～25 ℃)環境下儲存1 h 后檢測凝血4項結果與立即送檢標本比較，差異無統計學意義(P>0.05)；儲存4 h后APTT檢測結果顯著長于2 h標本(P<0.05)，但TT明顯短于2 h標本(P<0.05)；PT和Fib檢測結果與儲存2 h標本比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 室溫下儲存不同時間對凝血4項檢測的結果比較

2.4.24 ℃環境下在不同時間檢測的結果比較 標本在4 ℃環境下儲存1、2、4 h后檢測凝血4項結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，立即送檢與儲存不同時間后的檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表6。

表6 4 ℃環境下儲存不同時間對凝血4項檢測的結果比較

2.5溶血和未溶血標本對凝血4項檢測的結果比較 溶血標本的PT和APTT檢測結果明顯短于未溶血標本(P<0.05)；溶血標本的TT檢測結果明顯長于未溶血標本(P<0.05)；溶血標本的Fib檢測結果與未溶血標本比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表7。

表7 溶血與未溶血標本對凝血4項檢測的結果比較

3 討 論

凝血的標本采集和前期處理過程均直接影響實驗結果，且是凝血4項檢測結果準確性和可靠性的質量控制關鍵。ISO15189《醫學實驗室質量和能力的專項要求》闡明，準確、可靠的檢測結果來源于分析前、分析中、分析后的質量控制[2]。臨床實驗室質量控制一般由檢驗科完成，但由于影響因素多、控制難度大容易出現問題，其已成為醫院質量控制管理中的薄弱環節。有學者對急診檢驗誤差發生的種類和發生率進行統計分析，發現約60%的檢驗誤差發生在檢驗前，護理人員對標本采集和運送是分析前質量控制的第1個重要環節。本研究對859例臨床標本進行分析，結果顯示有177例標本出現異常，其中采血量比例不當121例，占68.36%；離心致標本溶血56例，占31.64%。本研究采血量異常結果表明，采血量小于2.0 mL的標本和采血量大于2.0 mL的標本檢測PT、APTT、TT結果均明顯長于重新采血合格的標本(P<0.05)，Fib檢測結果短于重新采血合格的標本(P<0.05)。說明采血量不足或過量都會影響凝血4項檢測結果的準確性，與王茂彩等[3]報道相符。

凝血4項檢測采用血漿作為標本，所以采集后的標本須經離心處理，《全國臨床檢驗操作規程(第4版)》要求，須采用“低速離心”，即3 000 r/min離心15 min后分離血漿標本，并立即檢測[4]。本研究采用增加離心速度減少離心時間(4 000 r/min離心5 min)來制備乏血小板血漿，2種離心條件得到的乏血小板血漿，其凝血4項檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)與王貞等[5]研究結果有差異。本研究結果證實，可采用4 000 r/min離心5 min替代3 000 r/min離心15 min制備乏血小板血漿，縮短標本處理時間，可更快地向臨床提供準確的凝血檢驗報告，尤其是緊急手術患者的凝血檢查。

叢玉隆等[6]認為，血液離體即開始變化，隨存放方式和時間的不同，凝血因子逐漸消耗而導致檢驗結果不同。美國臨床和實驗室標準協會(CLSI)推薦血液標本應在室溫(20～25 ℃)保存條件下2 h內完成檢測，4 ℃保存4 h內完成，若4 h內未能完成檢測，應將血漿標本置低溫保存(―70～―20 ℃)。檢測前將血漿于37 ℃下快速融化即可。本研究結果顯示，標本經5、10、15 min后不同離心時間檢測PT、APTT、TT、Fib結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，與有關研究一致[7-9]。本研究結果顯示，標本在室溫(20～25 ℃)環境下儲存1 h 后檢測凝血4項結果與立即送檢比較，差異無統計學意義(P>0.05)；標本儲存4 h后檢測APTT顯著長于儲存2 h標本(P<0.05)，TT明顯短于儲存2 h標本(P<0.05)；PT和Fib檢測結果與儲存2 h標本比較，差異無統計學意義(P>0.05)。標本在4 ℃環境下儲存1、2、4 h后檢測凝血4項結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，立即送檢與儲存不同時間后標本檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，提示標本在室溫(20～25 ℃)條件下隨儲存時間延長，對凝血因子的促凝活性有一定影響，而4 ℃環境下儲存4 h后，檢測凝血4項結果無影響。

標本發生溶血是臨床生化檢驗較常見的影響因素，也是凝血4項檢測結果最常見的影響因素之一[10]。溶血是由于采血或離心操作不當等因素使紅細胞破裂造成血紅蛋白溢出，成熟紅細胞破裂后釋放出血小板第Ⅲ因子相似凝血活性的磷脂，進而影響凝血4項檢測結果的準確性[11]。本研究結果表明，溶血標本檢測PT和APTT結果明顯短

于未溶血標本(P<0.05)；溶血標本檢測TT結果明顯長于未溶血標本(P<0.05)；溶血標本檢測Fib結果與未溶血標本比較，差異無統計學意義(P>0.05)，提示標本溶血可致PT和APTT縮短，TT延長，從而導致凝血4項檢測結果的異常。因此，在標本采集或離心處理過程中應加強標準化操作，避免標本溶血發生。

綜上所述，實驗室外在因素對實驗的準確性十分重要，抗凝比例不合適、室溫時間儲存過長、標本溶血與否等都是導致檢測結果不準確性的主要因素[12]。因此，檢驗科在開展凝血實驗時，應建立該實驗室的標準操作程序，遵循《血漿凝固實驗血液標本的采集及處理指南(WS/T 359-2011)》標準，對凝血標本從采集量、離心、儲存至送檢過程等環節的控制；加強對相關人員的培訓、提高其責任心、規范操作流程，均可保證凝血4項檢測結果的準確性，為臨床提供正確依據。

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