沉水樟芝降血糖作用的初步藥效學研究

王 瑾，陳耀金，王 宮

（福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003）

牛樟芝是一種原產(chǎn)于我國臺灣省的珍稀藥用菌。研究證實，其具有降血糖、解毒保肝、抗腫瘤、補腎強心、益胃整腸、強化免疫、鎮(zhèn)痛抗菌等多種作用［1-4］。牛樟樹作為自然界中樟芝的唯一宿主，只分布在臺灣地區(qū)，數(shù)量極為稀少，加上野生牛樟芝生長緩慢，資源嚴重短缺，價格十分昂貴。其高昂的價格嚴重制約了樟芝這種具有極大藥用價值的菌類的應用和開發(fā)。我們利用福建地區(qū)資源豐富的沉水樟樹來作為樟芝的新宿主，培育出沉水樟芝。本實驗進行沉水樟芝降血糖的初步藥效學研究，旨在為沉水樟芝資源的進一步開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 清潔級昆明種小鼠，雌雄兼用，體重16～20 g，由福建中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號：SGXK（閩）2004-0001。

1.2 實驗藥品與試劑 二甲雙胍（深圳中聯(lián)制藥有限公司，批號：201511299）；四氧嘧啶（德國 Fluka）；胰島素注射液（Lilly France S.A.S，批號：20150 906），葡萄糖（AR 級，批號：F20150811）；葡萄糖測定試劑盒（上海榮勝生物技術有限公司，批號：2016 0206）；游離脂肪酸測試盒（南京建成生物工程研究所，批號：20160331）；沉水樟芝（福建永安，人工培育）。

1.3 實驗儀器 可見紫外分光光度儀（島津公司，UV25 01PC）；電子天平（BP211D，塞多利斯）；穩(wěn)步快速血糖儀（強生公司）；冷凍干燥儀（Savant ModulyoD，美國熱電）。

2 實驗方法

2.1 沉水樟芝藥液的制備 取沉水樟芝適量，加入10倍量水，煎煮提取2次，每次1 h，合并兩次濾液，濃縮，即得沉水樟芝藥液（含生藥量0.4 g／mL），置于冰箱，備用。

2.2 2型糖尿病模型的建立 取60只小鼠禁食12 h，稱重，10只做正常對照，其余小鼠灌胃脂肪乳10 d，10 d后禁食12 h，腹腔注射四氧嘧啶200 mg／kg。給藥72 h后，測空腹血糖，以空腹血糖值≥10 mmol／L者納入實驗范圍，即2型糖尿病模型成立。

2.3 分組及給藥 取2型糖尿病小鼠40只，分為模型組、陽性對照組、低劑量組和高劑量組各10只。 低劑量組、高劑量組分別予 4 g／kg、16 g／kg沉水樟芝藥液灌胃，陽性對照組予0.25 g／kg二甲雙胍藥液灌胃，對照組及模型組予等量生理鹽水灌胃。每周重稱1次，調整灌胃量，共灌胃干預30 d。

2.4 觀察指標 ① 分別于灌胃給藥15 d、30 d后，禁食12 h，割尾靜脈取血，測定4組小鼠血清葡萄糖（Glu）和游離脂肪酸（NEFA）含量。② 糖耐量實驗：灌胃30 d后，將各組小鼠禁食12 h，灌胃葡萄糖 0.2 g／kg，分別測定灌胃前、灌胃后 0.5 h、1 h、2 h血糖值，觀察各組血糖變化，計算曲線下面積，曲線下面積越大，說明糖耐量越差，糖尿病越嚴重。

2.5 統(tǒng)計學方法 采用PEMS3.1 for Windows軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料符合正態(tài)分布以（）表示，采用t檢驗。

3 實驗結果

3.1 6組小鼠干預后Glu和NEFA含量比較 見表1。

表1 6組小鼠干預后Glu和NEFA含量比較（）mmol／L

表1 6組小鼠干預后Glu和NEFA含量比較（）mmol／L

注：與對照組比較，1） P＜0.01，2） P＜0.05；與模型組比較，3） P＜0.01，4） P＜0.05。

組 別對照組模型組二甲雙胍組低劑量組高劑量組n 10 10 10 10 10 Glu NEFA灌胃后15 d 5.89±0.88 24.38±0.652）16.97±1.502）4）12.66±1.722）4）11.58±0.792）4）灌胃后30 d 5.50±0.77 12.00±3.321）10.95±2.672）3）8.77±2.342）4）8.45±0.072）3）灌胃后15 d 2.72±0.40 3.98±0.372）3.40±0.242）3）2.67±0.104）2.34±0.094）灌胃后30 d 2.62±0.51 3.98±0.332）3.26±0.233）2.87±0.394）2.34±0.094）

3.2 4組小鼠糖耐量水平比較 見表2。

表2 4組小鼠糖耐量水平比較（）

表2 4組小鼠糖耐量水平比較（）

注：與對照組比較，1） P＜0.01，2） P＜0.05；與模型組比較，3） P＜0.01，4） P＜0.05。

組 別對照組模型組二甲雙胍組低劑量組高劑量組n 10 10 10 10 10 0 h 5.50±0.77 12.10±3.32 10.95±2.67 8.77±2.34 8.45±0.07糖耐量實驗后血清 Glu／（mmol／L）0.5 h 7.58±1.08 26.50±1.83 26.90±1.27 24.28±3.46 25.10±1.69 1 h 6.50±0.16 26.30±2.12 16.50±0.35 16.60±3.30 16.45±2.47 2 h 5.86±0.83 16.00±0.35 9.30±0.14 9.17±1.79 8.35±1.34曲線下面積AUC 12.70±0.65 44.01±1.501）33.20±0.981）3）31.36±5.481）3）31.18±3.372）4）

4 討論

沉水樟芝低、高劑量組均有降低糖尿病小鼠血糖、脂肪酸和提高糖耐受作用，高劑量組效果更為明顯，說明沉水樟芝具有較好降低2型糖尿病小鼠血糖和改善糖尿病小鼠身體機能的作用，并有一定的量效關系。

在造模型過程中，我們應用脂肪乳灌胃和四氧嘧啶所誘導對非胰島素依賴型糖尿病模型，其中灌胃脂肪乳10 d后造成胰島素抵抗，再通過注射四氧嘧啶，導致胰腺代償性分泌胰島素障礙。在四氧嘧啶劑量選擇中200 mg／kg的劑量。此造模方法最接近于2型糖尿病患者的發(fā)病機理，具有很好的類比性。

葡萄糖、游離脂肪酸、糖耐量均是反映糖尿病情況的重要指標，其中正常血清中NEFA含量極微，饑餓、運動及情緒激動可以升高，在甲狀腺機能亢進、注射腎上腺素或去甲腎上腺素及生長激素后可升高。任何疾病影響血中激素水平者，均對游離脂肪酸有影響。未治療糖尿病中血清游離脂肪酸可達1.5 mmol／L。所以，血清中NEFA含量越大，證明其糖尿病越嚴重。實驗測定了各時間段各組小鼠空腹血糖值、游離脂肪酸值、糖耐量，顯示灌胃沉水樟小鼠的血糖值、游離脂肪酸含量、糖耐量的曲線下面積均顯著小于模型組小鼠。其中灌胃1 g／kg與4 g／kg沉水樟芝無顯著差異，顯示此兩劑量藥效相似。

由于沉水樟芝具有較豐富的使用價值和顯著的降血糖效果，而且純天然，安全、無毒副作用，無疑對廣大糖尿病患者是一個極大的福音，可開辟臨床防治糖尿病及其并發(fā)癥新途徑，提高糖尿病的治療水平，因而具有廣闊的前景。有關糖尿病有效成分研究和降血糖的作用機理，還需進一步探討和研究。

［1］ 張遠騰，李曉波.牛樟芝化學成分及其藥理作用研究進展［J］.中草藥，2016，47（6）：1034-1042.

［2］ 韓金龍，趙培城，劉士旺.樟芝藥理學作用研究進展［J］.食用菌學報，2014，21（1）：76-82.

［3］ 陸震鳴，敖宗華，陶文沂，等.樟芝菌粉對乙醇誘導的大鼠急性肝損傷的保護作用［J］.中草藥，2007，38（3）：420-422.

［4］ CHEN Y J，THANG M W，CHAN Y T，et al.Global assessment of Antrodia cinnamomea-induced microRNA alterations in hepatocarcinoma cells ［J］.PLoS One，2013，8（12）：e82751.