藥用植物到手香水提液鎮咳祛痰作用研究

王玲，管淑玉，梁穎

(1.廣東食品藥品職業學院，廣東 廣州 510520；2.廣東藥科大學，廣東 廣州 510006)

到手香(ColeusamboinicusLour.)，別名左手香、印度薄荷，得此名因用手觸摸該植物葉片后，手指間會留下濃烈的香氣。到手香為唇形科鞘蕊花屬植物，原產于印度和東南亞；廣泛分布于南部非洲、南美洲，在國外作為一種香料，同時作為藥用植物和殺蟲劑、殺菌劑應用，該植物在廣東潮汕地區民間偶有種植，當地人用它來治療喉痛與咳嗽。聯合國糧農組織1999年農業服務公告137號公布的《用作谷物殺蟲劑的香料與藥用植物》中列舉了世界上100余種具有殺蟲與殺菌活性的植物和植物精油，到手香列入其中[1]，國內的中藥典籍和植物志、植物名錄均未收錄。到手香繁殖采用扦插法，春秋季為適宜期，生長迅速，全草功效為清涼、消炎、祛風、解毒。當前未查到有報道到手香水提液的鎮咳祛痰作用，而在廣東潮汕地區人們將到手香生鮮嫩葉洗凈后口銜用來治咳嗽，因此對到手香水提液進行鎮咳祛痰藥效學研究很有意義。本文對到手香水提液進行鎮咳祛痰作用研究，為到手香進一步的開發利用提供有力的理論基礎和科學依據。

1 實驗材料

1.1 藥材 到手香：引種于廣東省陽江市陽西縣中山大學(原中山醫科大學)藥材基地，在中山大學南校區校內繁殖，由中山大學測試中心夏鋒高級工程師與生命科學院葉創興教授共同鑒定為到手香。濃氨水(廣州化學試劑廠，批號20150612)，美沙芬片(廣州光華藥業股份有限公司，批號T23004)，苯酚紅(廣州化學試劑廠生產，批號150904)，痰咳凈(廣州羊城藥業股份有限公司生產，批號150315)。

1.2 實驗動物 NIH小鼠，普通級標準，由廣東省衛生廳動物實驗中心提供，合格證號：粵檢證字第2015A022號。

2 實驗方法

2.1 到手香水提液的制備 取到手香植物地上部分，晾干，剪碎，精密稱取碎葉適量， 加入10倍量蒸餾水浸泡2 h，90～100 ℃回流提取6 h，冷卻，雙層紗布過濾，清洗3次濾渣并過濾，合并濾液。重復以上操作，多次提取，合并多次提取所得濾液，用布氏漏斗抽濾，得到的濾液為到手香稀溶液。于70 ℃溫度、-0.08 MPa壓力、60 r·min-1的條件下，對到手香稀溶液進行減壓蒸餾濃縮[2]，得到到手香濃溶液。精密量取適量濃溶液，用蒸餾水稀釋后為到手香水提液，制成濃度為0.3、0.6、1.2 kg·L-1的高、中、低三個劑量溶液，供鎮咳祛痰實驗用。

2.2 到手香水提液鎮咳作用試驗(對氨水引起小鼠咳嗽的影響)設計[3-6]

2.2.1 試驗設計 采用改進的引咳實驗裝置，在恒壓條件(壓力為101 kPa)下對小鼠進行氨引咳。因為小鼠性別變化會影響實驗進行中的梯度，因此本實驗采用雄性動物進行實驗。

2.2.2 動物分組 選擇健康，體質量在18.0～22.0 g的NIH小鼠共75只，并按照體質量進行排序分層，再采用層內單純隨機法分成5組，每組15只小鼠。設為：陰性對照組(生理鹽水)、陽性對照組(美沙芬溶液，給藥劑量為0.03 g·kg-1)、到手香水提液高、中、低三個劑量組。并根據初試驗測試結果按倍量法設定給藥劑量為24、12、6 g·kg-1。

2.2.3 試驗方法 小鼠灌胃給藥(0.4 mL/20 g)1 h后，將小鼠放入密閉玻璃缸中，依據序貫法原則按預定的時間噴入濃氨水氣霧，噴霧結束后立即取出小鼠，觀察1 min內是否有咳嗽反應。咳嗽判斷方法:若1 min內出現3次及以上典型咳嗽動作(腹肌收縮或縮胸，同時張大嘴，有時可有咳聲)者，算作“有咳嗽”。否則算作“無咳嗽”。以停止接觸氨水刺激之后1 min內咳嗽次數不小于3次判為陽性，若個別動物在實驗過程中出現死亡或休克亦判為咳嗽陽性。其首次咳嗽時間以及2 min內咳嗽次數同時作為科學數據作其它處理。

2.2.4 數據處理 用序貫法(上下法)求出引起半數小鼠咳嗽的噴霧時間(EDT50)。計算R值，若R值大于130%，即表明藥物具有止咳作用。若R值大于150%，即表明藥物有顯著的止咳作用。計算公式：EDT50=log-1c/n[式中n為動物數，c為rx值的總和，r為每劑量組的動物數，x為劑量(即噴霧時間)的對數]。R=給藥組的EDT50/對照組的EDT50×100%。

2.3 到手香水提液祛痰作用試驗(對小鼠氣管酚紅排泄量的影響)設計[4-7]

2.3.1 酚紅標準曲線的繪制 精密稱取一定量的酚紅，用5%碳酸氫鈉溶解，配成每1 mL含12.5 ng的溶液，然后順次進行倍比稀釋成每毫升含酚紅6.250 0、3.125 0、1.562 5、0.781 3、0.390 6、0.195 3、0.097 7、0.048 8 ng的溶液，用分光光度計于546 nm波長測定其光密度(OD值)，計算回歸方程：酚紅含量=OD值×7.626 6-0.055 4，r=0.995 6，繪制標準曲線。

2.3.2 試驗方法 取健康NIH小鼠50只，按照體質量進行排序，采用隨機區組分組法分成5組，每組10只小鼠，設為：陰性對照組(生理鹽水)、陽性對照組(0.01 kg·L-1痰咳凈溶液，給藥劑量為0.2 g·kg-1)、到手香水提液高、中、低劑量組，根據初試驗測試結果按倍量法設定給藥劑量為24、12、6 g·kg-1。小鼠禁食不禁水12 h后，灌胃0.4 mL/20 g，30 min后經腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液0.2 mL/20 g，30 min后采用斷頸椎法處死小鼠，剪下小鼠氣管，放入預先盛有1.5 mL的5% NaHCO3溶液試管中，超聲5 min，促使氣管段中的酚紅釋放出來。將各試管中溶液于分光光度計546 nm處測OD值。將各試管含氣管段放置過夜，24 h后重測OD值。

2.3.3 數據處理 根據酚紅含量和動物體質量計算出校正酚紅含量，用SPSS11.0統計軟件進行方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。計算公式：校正酚紅含量= 酚紅含量(ng)/小鼠體質量(kg)；化痰率(%)= 給藥組校正酚紅含量/空白對照組校正酚紅含量×100%。

2.4 統計學方法 采用SPSS17.0進行數據統計分析。觀測指標中的酚紅含量等為計量資料，比較采用單因素方差分析+兩兩比較LSD-t檢驗。化痰率等為計數資料，比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 到手香水提液鎮咳作用試驗(對氨水引起小鼠咳嗽的影響) 本實驗中陽性對照藥物美沙芬的鎮咳效果R=133.63%，即鎮咳效果為有效，說明本實驗條件結果可靠。樣品組的R>130%，說明到手香水提液對氨水誘導的小鼠咳嗽有明顯的鎮咳作用，具體數據見表1。

表1 到手香水提液對小鼠鎮咳藥理實驗結果

注：“—”表示此項無數據。

表2 到手香水提液對小鼠祛痰藥理實驗結果

注：與陰性對照組比較，aP<0.05。

3.2 到手香水提液祛痰試驗(對小鼠氣管酚紅排泄量的影響) 本實驗中陽性對照藥物痰咳凈的祛痰率為291.30%，與陰性對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)，說明本實驗條件結果可靠。實驗結果表明，到手香水提液使小鼠氣管酚紅排泄量增加，有明顯的祛痰作用,具體數據見表2。

4 討論

氨水具有強烈的刺激性嗅味，用空壓機將濃氨水通過霧化器霧化噴入動物容器內，小鼠吸入后，刺激呼吸道感受器，即可引發反射性咳嗽。凡能抑制咳嗽中樞或降低呼吸道感受器敏感性的藥物均有鎮咳作用[8]，即能抑制氨水引起的咳嗽。本實驗中到手香水提液高中低劑量組均具有明顯的鎮咳作用，而到手香水提液鎮咳藥理作用機制是屬于中樞性還是屬于外周性，有待進一步實驗研究。動物呼吸道分泌量增多，有利于附著呼吸道黏膜的濃痰變稀，從氣管壁脫落，起到祛痰作用。小鼠腹腔注射酚紅生理鹽水后，酚紅會隨呼吸道分泌液排出，酚紅排泌量的多少可以反映出呼吸道分泌液的量。本實驗中到手香水提液能增加小鼠氣管酚紅排泌量，有利于附著氣管黏膜的濃痰變稀，從氣管壁脫落，起到祛痰作用。到手香水提液含有蛋白質、氨基酸、皂苷、鞣質、糖及其苷類、酚類和有機酸等化學成分[9]；其中鎮咳祛痰作用的有效成分及其作用機制尚待進一步實驗研究和探討。因為有些藥用植物具有鎮咳祛痰作用，同時也具有平喘作用，筆者曾進行豚鼠離體氣管平滑肌收縮的影響實驗、2%乙酰膽堿和0.1%組織胺混合液噴霧致喘豚鼠的影響實驗[10]，對到手香水提液平喘作用進行研究，結果顯示到手香水提液對噴霧致喘豚鼠的引喘潛伏期、對豚鼠離體氣管平滑肌收縮均沒有顯著抑制作用。本實驗中到手香水提液有明顯鎮咳祛痰作用，為進一步藥效學研究及合理開發利用到手香提供了理論基礎和科學依據。

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