胃腸胰腺神經內分泌腫瘤中血管表皮生長因子的表達與淋巴結轉移的關系及意義

樂 靜 趙 濤 劉愛林

胃腸胰神經內分泌腫瘤(gastroenteropancreafic neuroendocrine neoplasm,GEP-NEN)發病率由1973年的1.09/10萬增長到2004年的5.25/10萬，患病率在消化系惡性腫瘤中占第2位，僅次于大腸癌[1-2]。診斷時多數為轉移性晚期NENs，在治療方式上，主要有手術、藥物、介入、靶向等[3]。血管表皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作為一種能誘導受體酪氨酸激酶Flt4細胞內酪氨酸殘基磷酸化的因子，于1996 年被分離純化[4]。在成人某些組織中，檢測發現VEGF 是淋巴管內皮細胞標記物，參與了淋巴管的發育過程[5]。本研究通過檢測胃腸胰腺NENs中VEGF、淋巴管密度(LVD)水平的變化，分析其與淋巴結轉移的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2016年1月在我院住院通過病理診斷為GEP-NEN的60例患者作為試驗研究對象，男性30例、女性30例，年齡30～70歲，平均年齡(52.5±4.8)歲，包括淋巴結轉移患者38例、淋巴結未轉移患者22例。淋巴結是否轉移患者在性別、年齡等方面無明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 實驗試劑及器材

VEGF ELISA試劑盒，VEGF封閉液+一抗，兔抗鼠免疫組化二抗試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)；離心機(上海飛鴿)；顯微鏡(日本Olympus)；酶標儀(英國TECNA)；脫水機(日本TIYODA)；切片機(德國Leica)；計算機圖像分析系統(美國惠普)。

1.3 免疫組織化學法檢測組織中VEGF、淋巴管密度(LVD)的表達

福爾馬林固定、脫水、透明；包埋、切片；熱修復；過氧化氫阻斷；正常山羊血清封閉；加一抗(濃度1∶100)50 μl靜置1 h；加二抗(濃度1∶100)50 μl 靜置10 min；顯色、終止；復染、分化；封片。

1.4 判斷標準

VEGF陽性結果判定以細胞核不染色，胞膜或胞質出現棕黃色顆粒為陽性，染色細胞數陰性(-)：≤10%；弱陽性(+)：10%～25%；陽性(++)：26%～50%；強陽性(+++)：>50%。

LVD的判定及計數：在腫瘤區域內，未成腔但內皮細胞胞質含棕黃色顆粒或者已成腔但內皮細胞呈單層形態不規則均為淋巴管。

1.5 數據處理

采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據處理，以(均數±標準差)表示，計數資料用χ2檢驗，計量資料用t檢驗，多因素用Logistic回歸模型，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 入組GEP-NEN患者VEGF表達及與淋巴結轉移的關系

對入組GEP-NEN患者VEGF的表達進行檢測，結果發現，淋巴結轉移組VEGF陽性率為55.26%(21/38)，淋巴結未轉移組VEGF陽性率為13.64%(3/22)，差異有統計學意義(χ2=4.789,P=0.035)。

2.2 入組GEP-NEN患者LVD的表達及與淋巴結轉移的關系

對入組GEP-NEN患者LVD的表達及與淋巴結轉移的關系進行分析，結果發現，淋巴結轉移組的LVD均值達(0.83±0.14)，較淋巴結未轉移組(0.23±0.11)明顯升高，差異有統計學意義(t=6.163,P=0.038)。

2.3 入組GEP-NEN患者VEGF表達與LVD的關系

對入組GEP-NEN患者VEGF表達與LVD的關系進行分析，結果發現，VEGF陽性表達者的LVD為(1.33±0.15)，較VEGF陰性者的(0.43±0.11)顯著升高，差異有統計學意義(t=7.987,P=0.022)；VEGF的表達與LVD呈正相關(γ=0.36,P=0.012)。

3 討論

胃腸NET源于胃腸道組織，胰腺NET源于胰島細胞[6]，患者可出現包括疼痛、惡心、嘔吐、貧血等一系列非特異癥狀[7]。VEGF參與了胚胎時期淋巴管的形成及發育過程，并在機體處于病理狀態調節淋巴管的生成，能夠增加淋巴管壁的通透性，促進新生淋巴管的形成，促進惡性腫瘤淋巴轉移的發生[8]。在本研究中，選取GEP-NEN患者，檢測其VEGF的表達，分析其與患者淋巴結轉移的關系。

在本研究中，首先對入組的GEP-NEN患者是否出現淋巴結轉移分為2組，淋巴結轉移組出現VEGF陽性20例，占55.26%；淋巴結未轉移組VEGF陽性4例，占13.64%。進一步對入組GEP-NEN患者的LVD進行檢測，結果發現，出現淋巴結轉移的GEP-NEN患者其LVD均值較未出現淋巴結轉移的患者明顯升高。這提示，對于出現淋巴結轉移的GEP-NEN患者，其VEGF表達陽性率顯著升高，LVD值明顯升高。VEGF在機體多種不同類型的惡性腫瘤均有表達，如肺癌、胃癌、結腸癌等，在這其中，VEGF-C由于能夠特異性地作用于淋巴管內皮細胞，又稱之為淋巴管內皮細胞生長因子[9]。既往曾有研究發現，VEGF與惡性腫瘤發生淋巴結轉移，以及新生淋巴管的生成過程關系密切[10]。

本研究分析VEGF表達與LVD的關系發現，對于VEGF陽性表達的GEP-NEN患者，其LVD均值較VEGF陰性表達的GEP-NEN患者顯著升高，VEGF的表達與LVD呈正相關。VEGF-C結合其特異性的受體，促進酪氨酸激酶發生磷酸化，激活細胞信號傳導通路，促進淋巴管內皮細胞的分化、增殖、遷移，抑制細胞發生凋亡，刺激新生淋巴管的形成。

綜上所述，對于出現淋巴結轉移的胃腸胰腺神經內分泌腫瘤患者，其VEGF表達陽性率升高，LVD值明顯升高，VEGF的表達與LVD呈正相關。二者之間的具體作用機制仍需進一步基礎研究證實，但VEGF可能成為判斷胃腸胰腺神經內分泌腫瘤預后的新指標。

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