免疫熒光法在微生物快速檢驗中的應用研究

鄭州市婦幼保健院（450000）翟晶晶

免疫熒光法主要是利用抗原與抗體的生物反應與形態學理論相結合的一種檢驗技術，其具有血清學檢驗的特異性、熒光色素檢驗的敏感性以及顯微鏡檢的優點，在臨床診斷中具有較好的應用價值，在致病微生物快速檢測中具有較高的特異性和敏感性[1]。本文主要針對免疫熒光法在微生物快速檢驗中的應用價值展開分析，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月～12月100例上呼吸道感染患兒作為觀察對象，其中有男孩51例，女孩49例，年齡為2～11歲，平均為（6.5±1.6）歲，其中咽喉感染64例、鼻部感染36例。所有患兒均對本次研究知情并自愿簽署同意書。

1.2 試劑與儀器 本次研究使用的儀器為奧林巴斯 熒光顯微鏡BX51，使用的病毒熒光檢驗測試劑盒均由當地衛生部門提供，包括熒光標志抗體試劑盒、熒光標志單克隆抗體試劑盒，包括合胞病毒、腺病毒、流感病毒A及流感病毒B試劑盒。此外還有洗滌液、封閉液以及玻璃片。

1.3 方法 所有患兒均采集鼻咽分泌物進行免疫熒光法檢驗，觀察患兒感染情況。檢測方法：將采集的分泌物放置于無菌生理鹽水中，以500r/min的速率離心8min，棄上清液后使用沖洗液洗滌并混勻。重復離心直至上清液不粘稠。最后將沉淀溶解于緩沖液中，使其成為細胞懸液，之后將病原體放置于玻片中的觀察孔中，風干后使用冷丙酮固定10min。染色方法：在樣孔細胞上滴入熒光抗體20uL，并在保濕盒中培育30min。并將熒光標志單克隆抗體作為對照。將洗滌液沖洗玻片細胞數次之后再使用蒸餾水洗滌。待蒸餾水揮發之后將1滴封閉液滴入玻片樣孔中，再用顯微鏡進行觀察。

陽性判斷標準：被熒光標記的病毒特異性克隆抗體在與抗原結合之后，會形成復合物并發出綠色熒光。顯微鏡下觀察到綠色熒光為陽性，無熒光為陰性。在400倍視距觀察情況下，有≥2個熒光細胞即可判斷為陽性[2]。

1.4 統計學分析 采用SPSS16.0統計學軟件進行統計學分析，計量資料用(±s)表示，組間差異、組內差異采用t值檢驗，計數資料比較采用X2值檢驗 ，P＜0.05時為差異有統計學意義。

2 結果

100例患兒中病毒感染陽性有88例，其中感染合胞病毒42例、腺病毒23例、流感病毒A13例、流感病毒B10例，感染率分別為47.73%、26.14%、14.77%、11.36%。

3 討論

免疫熒光法主要是利用患兒的血清和免疫熒光抗體進行檢驗，對于抗原具有較高的敏感性[3][4]。近些年來，隨著臨床醫學在人工合成免疫原研究的進一步發展，發現沙門氏菌的特異性抗原的決定簇為雙糖結構，因此可以采用人工合成高純度雙糖再與蛋白質結合形成免疫原的方法，能夠制造出群特異性高的抗體，并且近些年來不斷發展的克隆技術也為其的應用提供了良好的基礎[5][6]。

本次研究利用免疫熒光法進行檢驗，觀察上呼吸道感染患兒的樣本與相對應的試劑盒進行反應，觀察其是否能夠判斷患兒的感染類型，并且在觀察中發現，100例患兒中病毒感染陽性有88例，其中感染合胞病毒42例、腺病毒23例、流感病毒A13例、流感病毒B10例，感染率分別為47.73%、26.14%、14.77%、11.36%，這說明免疫熒光法能夠有效檢查出感染病毒的類型，具有較高的安全性和可靠性。免疫熒光法能夠在短時間內依靠顯微鏡和相應的試劑盒檢測出患兒的感染類型，具有快捷、高效的優勢，可以在基層醫院中應用，從而為臨床治療提供科學依據。

綜上所述，免疫熒光法能夠快速檢測患兒感染類型，在上呼吸道感染患兒中具有較好的應用效果，為臨床治療提供相應的依據。