平衡易位胚胎植入前遺傳學診斷成功1例報道

丁濤，陽彥，馬鵬鵬，趙琰，伍瓊芳，吳興武，胡毅娜

人體的體細胞染色體數目為23對，其中包括22對常染色體和1對性染色體。胚胎的染色體異常容易導致反復流產，染色體平衡易位是反復流產患者染色體異常中最為常見的一種情況，占比為62%。染色體平衡易位是指兩條染色體發生斷裂后相互交換，僅有位置的改變，沒有染色體片段的增減，在人群中的發生率為0.1%-0.2%[1]。現將我中心診斷成功1例報道如下：

1 臨床資料

患者，女，25歲，因結婚1年不孕，男方嚴重少弱精癥于2016年3月來我院輔助生殖中心擬行IVF-ET助孕治療。男方常規術前檢查中發現染色體為 46xy，t(4；11)(q31.1；p15)。 患者夫婦雙方經過充分遺傳咨詢后，要求選擇胚胎植入前遺傳學診斷 技 術 (preimplantation genetic diagnosis，PGD)助孕。患者于2016年5月采用卵泡期超長方案[2]進行降調節，于月經來潮第二日給予促性腺激素激動劑（GnRHa）3.75mg降調節，28d后查B超及血激素水平，達降調節標準，給予促性腺激素(rFSH)112.5IU進行控制性超促排卵，共Gn 10d，Gn總量1312IU，共獲卵14枚，其中MⅡ期卵子12枚。通過卵胞漿內單精子顯微注射(ICSI)法授精，授精后卵子置于瑞典vitrolife卵裂胚培養液中，在濕化37℃美國cook三氣培養箱 (5%CO2，5%O2和90%N2)中孵育至第3d。選擇受精正常卵裂胚胎行透明帶激光輔助孵化打孔，繼續培養至第5d，共形成6枚可利用囊胚， 分別為 5BB×1，5BC×3，4BC×2，均行活檢。活檢后囊胚利用玻璃化冷凍技術[3]進行冷凍保存，待檢測結果出來后擇期行胚胎復蘇移植。經活檢獲取的囊胚滋養層細胞通過Sureplex法全基因組擴增，利用擴增后產物進行高通量測序（High-Throughput Sequencing，NGS）。 在活檢的 6枚胚胎中，El、E3、E5、E6 未見染色體重復/缺失，E4 4號染色體長臂部分缺失，11號染色體短臂部分重復，E2無法判斷。檢測結果見表1。患者于2016年8月行凍胚復蘇移植周期治療，移植胚胎El后獲得臨床持續妊娠，妊娠18周時抽羊水核型分析提示胎兒為平衡易位攜帶者，與PGD結果一致，妊娠39周足月剖宮產一健康女嬰。

表1 囊胚檢測結果

2 討論

平衡易位攜帶者通常沒有明顯的表型異常，常表現為胚胎停止發育、反復流產、胎兒畸形或生育智力低下兒等。平衡易位攜帶者的生殖細胞在減數分裂中可產生18種不同類型配子[4]，包括1種正常、1種平衡易位和16種不平衡分離的配子。平衡易位攜帶者有生育表型正常子代的機會，但自然流產和生育染色體異常子代風險高達16/18，因此臨床上會建議平衡易位患者行PGD治療。PGD是在體外受精過程中，對具有遺傳風險患者的卵裂期胚胎或囊胚進行細胞活檢和遺傳學診斷，選擇正常的胚胎進行宮腔內移植，從而獲得健康的嬰兒，是輔助生殖技術的重要組成部分[5]。PGD能阻斷相關遺傳病在家系中的進一步傳遞，避免染色體病、單基因遺傳病和線粒體病患兒的出生，其對染色體易位患者的幫助尤為突出。Fischer等[6]報道，PGD前、后的自然流產率分別為88.5%和13%，妊娠率高達87%。

PGD患者在獲得妊娠后須行產前診斷以驗證PGD結果的準確性。一般選擇在妊娠中期做羊水或臍血染色體核型分析，如果產前診斷結果與PGD結果相吻合，證實此妊娠胎兒為染色體正常或平衡攜帶胎兒，可以繼續妊娠；如果產前診斷發現PGD結果有誤，此妊娠胎兒染色體異常，或者產前診斷結果發現胎兒出現新的染色體缺陷，則應選擇進一步遺傳咨詢或終止妊娠。本例患者孕18周經腹壁羊膜腔穿刺抽取羊水進行染色體核型分析，結果顯示胎兒染色體平衡易位攜帶，可繼續妊娠，并于孕39周剖宮產一女嬰。目前隨訪該嬰兒各項生長發育指標均正常，成為江西省PGD技術的首例獲益者，填補了江西省PGD技術相關領域的空白。

傳統PGD技術中，熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）能夠篩選染色體平衡的胚胎，但由于方法繁瑣，只能檢測少數幾條染色體異常而較少采用。全基因組的方法僅能檢測致畸或導致早期流產的非平衡易位，無法區分完全正常的胚胎和平衡的攜帶者胚胎。這就導致經PGD助孕后的平衡易位攜帶者的后代中，仍有可能為平衡易位攜帶者，其成年后仍將面臨反復流產或不孕不育問題。解放軍總醫院姚元慶教授和高志英教授團隊與北京貝瑞和康生物技術有限公司研發團隊合作，采用Mate-Pair測序，再通過專利技術精確判斷染色體是否存在易位的斷裂點，挑選出不包含斷裂點的正常胚胎移植到子宮中。這項基于高通量測序的新一代測序技術，不僅實現了全基因組范圍內染色體數目異常的篩查，還能檢測到染色體的結構異常，并于2016年成功誕生了全球首例應用高通量測序技術（NGS）阻斷染色體平衡易位遺傳的試管嬰兒。隨著這項新技術的成熟與推廣，可以幫助平衡易位患者不再受流產和不孕困擾，生育健康子代。

[1]王軍榮，王少敏，曲林琳.染色體易位導致反復流產6例報告分析[J].中國婦幼保健，2011，26(28)：4400-4401.

[2]胡毅娜，丁濤，趙琰.超長方案新鮮周期D5日和D6日囊胚移植結局分析[J].江西醫藥，2017，52(4)：335-337.

[3]伍瓊芳，丁濤，胡毅娜，等.1658例玻璃化凍融周期的臨床結局分析[J].江西醫藥，2014(7)：570-573.

[4]Scriven PN，Handyside AH，Ogilvie CM.Chromosome translocations：segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis[J].Prenatal Diagnosis，2015，18(13)：1437-1449.

[5]李剛，劉艷，孫瑩璞.單核苷酸多態性微陣列在胚胎植入前遺傳學診斷中的應用 [J].國際生殖健康/計劃生育雜志，2012，31(5)：351-353.

[6]Fischer J.Preimplantation genetic diagnosis (PGD)improves pregnancy outcome for translocation carriers with a history of recurrent losses[J].Fertility&Sterility，2010，94(1)：283.