鄒綺明,張玲

(廣西中醫(yī)藥大學附屬瑞康醫(yī)院，南寧530011)

miRNA是一類廣泛存在于真核細胞中的單鏈小分子RNA，不能直接參與轉錄、翻譯編碼蛋白質，通過靶向mRNA的3′端非翻譯區(qū)(UTR)，達到降解mRNA或抑制其正常的轉錄、翻譯[1]。越來越多研究發(fā)現(xiàn)，失調的miRNA參與多種疾病發(fā)生發(fā)展[2]。從血清到組織，miRNA在慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者體內的表達均存在差異；細胞株、動物等實驗證實miRNA在HBV感染相關疾病的不同階段，同一種miRNA可發(fā)揮不同作用，不同的miRNA差異表達還可表現(xiàn)協(xié)同或拮抗作用，預示異常表達的miRNA與HBV-HCC的發(fā)生發(fā)展、侵襲、轉移和凋亡有重要聯(lián)系[3]。現(xiàn)就miRNA在乙肝相關性肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究進展綜述如下。

1　 miRNA在HBV復制過程中的作用

隨著有效抗病毒療法的出現(xiàn)，HBV復制可完全被抑制，但我國絕大部分肝癌患者有HBV感染史,目前認為HBV復制，尤其是持續(xù)高HBV-DNA可加速疾病進程，甚至直接誘發(fā)HBV感染相關肝癌發(fā)生[4]。鮑春旸[5]利用生物芯片技術在HBV細胞模型中發(fā)現(xiàn)29個miRNA與HBV復制呈負相關，并用生物信息學軟件預測其靶基因驗證出4個miRNA能靶向調控HBV基因，如miR-15b可能通過與S基因﹙P基因﹚的編碼區(qū)結合并抑制其表達，抑制病毒復制；miR-192與HBV編碼的蛋白(HBx)通過肝特異轉錄因子HNF-1α結合位點結合后，不但促進自身表達，同時抑制抑癌基因RB1的表達。雖然目前發(fā)現(xiàn)的miRNA能對HBV復制起到消極作用，似乎對抗HBV較為有利，但仍有患者能進展為肝癌，與HBV使調節(jié)宿主基因表達相關的miRNA處于失衡狀態(tài)、利于維持HBV-DNA高水平復制相關[6]。

miR-122被認為是一種肝臟的特異性miRNA，上調miR-122不但能抑制抗HBV的酶HO-1，抑制HBV感染[7]；還能下調細胞周期蛋白G1(Cyclin G1)，誘導細胞凋亡和抑制增殖，上調p53蛋白與HBV復制的增強子元件特異性結合，抑制HBV DNA增殖[8]。陳素玲等[9]發(fā)現(xiàn)血清miR-122表達量在中度及重度CHB患者明顯升高，但在非活動性HBV攜帶者、肝硬化、肝癌患者血清中往往處于低下水平，并未在HBV感染史中長期保持高表達以抵抗病毒復制。其次，miRNA還以負反饋調節(jié)形式限制HBV自身復制。miR-155是炎癥和腫瘤發(fā)展過程中的重要調節(jié)因子，在HBV慢性感染細胞模型HepG2.2.15中，miR-155過度表達抑制細胞因子信號轉導抑制因子1(SOCS1)，負反饋性阻斷IL-10等相關通路，抑制HBsAg、HBeAg及HBV蛋白表達[10]。HBV這種限制自身病毒復制行為，尤其是在慢性化演變中，可能通過在人類先天抗病毒防御系統(tǒng)中發(fā)揮作用，借此避免因過度復制而被免疫系統(tǒng)攻擊，從而利于病毒持續(xù)復制、增加致癌性，可能是病毒進化、腫瘤細胞逃逸中的一種機制。

2　 miRNA干擾宿主抗病毒免疫系統(tǒng)應答中的作用

肝臟是機體的免疫特惠器官，但在HBV感染慢性過程中，宿主免疫功能失調，使抗病毒藥物應答不充分，易向慢性炎癥損傷改變，病毒、腫瘤細胞逃避免疫系統(tǒng)的識別和攻擊，最終進展為肝癌。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA分子差異表達與HBV感染后免疫耐受和病毒清除密切相關，被認為是HBV感染后免疫應答的調節(jié)因子[11]。在人體，能對病毒感染的細胞、腫瘤細胞產(chǎn)生快速應答的主要是NK細胞。而CHB和HCC患者的NK細胞功能往往處于下調狀態(tài)，Xu等[12]進一步研究發(fā)現(xiàn)過表達的miR-146a通過下調細胞因子受體信號蛋白1(STAT1)表達，使NK細胞的殺傷活性及分泌細胞因子的能力受抑，當促進STAT1表達后，可恢復部分患者的NK細胞功能，過度表達miR-146a對CHB患者的固有免疫發(fā)揮負向調控作用。Wang 等[13]還發(fā)現(xiàn)miR-146a通過靶向 STAT1還參與抗病毒細胞因子及CD4+和CD8+T細胞的產(chǎn)生，介導T細胞功能受損，影響獲得性免疫形成。HLA-G是一類非經(jīng)典的MHC-Ⅰ類分子，幾乎能作用于所有免疫反應相關的細胞亞群，能在腫瘤、病毒感染細胞中表達并介導逃避機體免疫反應。Bian等[14]發(fā)現(xiàn)在HBV感染后miR-152低表達參與了人白細胞抗原-G(HLA-G)表達上調，高表達HLA-G使NK細胞對HBV、癌細胞殺傷活性降低，在肝癌腫瘤細胞逃避免疫清除中發(fā)揮重要作用。

3　 miRNA在肝硬化發(fā)生發(fā)展中的作用

肝星狀細胞(HSC)能被肝損傷相關的炎癥反應激活，大量增殖分化，并分泌細胞外基質(ECM)，而過量的ECM又可以加重肝臟損傷，如此反復引起惡性循環(huán)，最終引起肝纖維化(HF)。miRNA不但參與乙肝慢性化進程，還參與HSC的激活，并促進ECM積累，與肝纖維化(HF)的發(fā)生密切相關[15]。轉化生長因子β1(TGF-β1)不僅是活化HSC的主要信號轉導通路，而且被激活的HSC促使 TGF-β1的分泌，促進ECM合成并抑制其降解，在肝硬化的形成中發(fā)揮核心作用[16]；TGF-β1作為一種多功能因子，還能與HNF4A相互作用，誘導上皮細胞-間充質轉化(EMT)發(fā)生，使細胞間附著能力喪失，介導腫瘤轉移機制[17]。鄧國孫[18]在CCl4誘導小鼠的HF細胞模型中，發(fā)現(xiàn)miRNA-10a直接調控TGF-β1/Smads信號轉導通路促進肝纖維化，間接參與HCC發(fā)生。此外， miRNA還參與調控ECM形成，加速肝硬化進程。基質金屬蛋白酶(MMP)作為ECM的主要降解物，由于在肝硬化進程中常被TGF-β抑制，使ECM合成與降解平衡失調[19]。李耕[20]發(fā)現(xiàn)升高的miR-155與MMP-9靶向結合降低其表達，調節(jié)ECM，協(xié)同TGF-β誘導HF進程。陳征等[21]發(fā)現(xiàn)，miR-375可使大鼠肝星狀細胞(HSC-T6) 中蛋白激酶 B(PKB)、丙酮酸脫氫酶激酶-1(PDK1)含量明顯下降，細胞停滯于G0/G1期的比例升高，抑制HSC的增殖，負性調控HF進程。

4　 miRNA對肝癌生物學行為的影響

miRNAs可通過調控多個癌基因和抑癌基因的表達，影響細胞再生增殖、凋亡、分化等生物學功能，參與肝癌的發(fā)生發(fā)展[22]。原癌蛋白c-myc在多種組織和細胞中均有表達，其功能的異常與多種腫瘤的發(fā)生和預后密切相關，其可被細胞外調節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)通路所激活，使HSC誘導出現(xiàn)EMT及肝癌增殖等惡性化生物學行為[23]。謝聰?shù)萚24]成功構建has-miR-146a真核過表達載體pmR-146a，并將has-miR-146a的前體基因片段轉染乙肝相關肝癌株HepG2.2.15，得出has-miR-146a可以下調c-myc表達，抑制肝癌細胞增殖。miR-375可通過調控MAPK、Wnt、AKT、p53、PDK1等多個靶基因，發(fā)揮抑癌基因的作用。研究發(fā)現(xiàn)，miR-375在乙肝相關性肝癌患者腫瘤組織中的表達低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義，腫瘤組織中低水平的miR-375表達，與血清高AFP水平、晚期肝癌病情進展及肝癌細胞低分化程度具有顯著相關性，反映低表達的miR-375未能影響HBV復制，在HCC中未能通過靶向多個致癌基因發(fā)揮腫瘤抑制作用，并影響晚期肝癌患者的預后[25]。

HBx是病毒反式作用因子，被人們公認為能影響宿主基因表達，干擾信號轉導、細胞凋亡和細胞周期調控等過程，介導腫瘤的發(fā)生，當中機制可能與HBx可影響部分miRNA表達譜，使相應抑癌基因失活或癌基因活化相關[26]。miR-132在HBV相關的肝癌組織中表達明顯低于癌旁正常組織，且miR-132與HBx呈負相關，進一步研究發(fā)現(xiàn)，HBx可誘導miR-132啟動子甲基化，降低miR-132表達，使miR-132未能促進抑癌基因PTEN表達，達到激活Akt/mTOR信號通路發(fā)揮抑制肝癌細胞增殖和誘導凋亡作用[27]。miR-16家族被認為是一類抑癌基因，可靶向調控細胞周期蛋白CCND1、c-myc表達，使細胞停留于G1期，在HepG2、SK-HEP-1及Huh7肝癌細胞模型中miR-16均表現(xiàn)為低表達狀態(tài)[28]。

5miRNA與肝癌遺傳易感性的相關性

單核苷酸多態(tài)性(SNP)是遺傳變異中最常見的類型，位于miRNA種子區(qū)的SNP可發(fā)生于初級miRNAs(primary miRNAs)、前體miRNAs(precursormiRNAs) 及miRNAs的生成過程中，引起的miRNA結構異常或失去調控靶基因能力，不能正常發(fā)揮原有功能。Alqahtani等研究發(fā)現(xiàn)miR-149 rs2292832、miR-30a rs1358379、miR-196a2 rs11614913等多種miRNAs SNPs與HBV-HCC發(fā)生發(fā)展密切相關[29]。李蕓等[30]研究發(fā)現(xiàn)，miR-146a G>C(rs2910164)與中國原發(fā)性肝癌患者的遺傳易感性密切相關,攜帶G等位的個體有更高的發(fā)病風險。

綜上所述，在HBV誘導的致癌過程中，涉及到細胞周期活動、細胞凋亡、原癌基因、抑癌基因、免疫系統(tǒng)等方面調控異常。miRNA是具有重要調控作用的小分子RNA。目前研究已發(fā)現(xiàn)一系列能調控HBV感染→HL→HCC發(fā)生發(fā)展相關miRNA，為乙肝相關肝癌診斷、治療提供了新思路。

參考文獻：

[1] Gregory RI, Chendrimada TP, Shiekhattar R. MicroRNA Protocols[M]. Totowa: Humana Press, 2006:33.

[2] Melo CA, Melo SA. Non-coding RNAs and Cancer[M] . New York:Springer Press, 2014:5-24.

[3]Xie KL, Zhang YG, Liu J, et al. MicroRNAs associated with HBV infection and HBV-related HCC[J]. Theranostics, 2014,4(12):1176.

[4] 吳孟超,湯釗猷,葉勝龍,等.HBV/HCV相關性肝細胞癌抗病毒治療專家共識[J].中華肝臟病雜志,2013,33(2):76-81.

[5] 鮑春旸.HBV復制相關miRNA表達譜的分析及miR-192的生物學功能研究[D].中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院,2011.

[6] Wang Y, Jiang L, Ji X, et al. Hepatitis B Viral RNA Directly Mediates Down-regulation of the Tumor Suppressor MicroRNA miR-15a/miR-16-1 in Hepatocytes[J]. J Biol Chem, 2013,288(25):18484-18493.

[7] Qiu L, Fan H, Jin W, et al. R-122-induced down-regulation of HO-1 negatively affects miR-122-mediated suppression of HBV. Biochem Biophys Res Commun[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2010,398(4):771-777.

[8] 莊鵬,曾慧瓊,王湘郴,等.miR-122在乙肝相關性肝癌發(fā)病機制中的作用[J].熱帶醫(yī)學雜志,2015,15(6):724-727,863.

[9] 陳素玲,李芳,柴海云,等.微小RNA-122在HBV感染慢性肝臟疾病中的表達及其臨床意義[J].中華實驗和臨床感染病雜志(電子版),2015,9(6):68-72.

[10] Qayum AA, Paranjape A, Abebayehu D, et al. IL-10-Induced miR-155 Targets SOCS1 To Enhance IgE-Mediated Mast Cell Function[J]. J Immunol, 2016,196(11):4457.

[11] 邢同京,徐洪濤,余文慶,等.微小RNA在不同時期慢性乙型肝炎病毒感染者的異常表達譜及其臨床意義[J].中華傳染病雜志,2013,31(10):586-592.

[12] Xu D, Han Q, Hou Z, et al. miR-146a negatively regulates NK cell functions via STAT1 signaling[J]. Cell Mol Immunol, 2016,14(8):712.

[13] Wang S, Zhang X, Ju Y, et al. MicroRNA-146a feedback suppresses T cell immune function by targeting Stat1 in patients with chronic hepatitis B[J]. J Immunol, 2013,191(1):293.

[14] Bian X, Si Y, Zhang M, et al. Down-expression of miR-152 lead to impaired anti-tumor effect of NK via upregulation of HLA-G[J]. Tumour Biol, 2016,37(3):3749-3756.

[15] Chen R, Wu JC, Liu T, et al. MicroRNA profile analysis in the liver fibrotic tissues of chronic hepatitis B patients[J]. J Dig Dis, 2017,18(2):115-124.

[16] 付玲珠,鄭婷,張永生.TGF-β/Smad信號轉導通路與肝纖維化研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學,2014,19(10):1189-1195.

[17] 李杰克,方冠,葉偉康,等.TGF-β、HNF-4α在原發(fā)性肝癌中的表達及臨床意義[J].肝膽胰外科雜志,2017,29(3):224-228.

[18] 鄧國孫,李鎮(zhèn)伽.miRNA-10a對小鼠肝纖維化細胞增殖及TGFβ1/Smads信號轉導通路表達的影響[J].海軍醫(yī)學雜志,2017,38(3):222-225.

[19] 戈宏焱,張仕華.基質金屬蛋白酶與肝纖維化關系的研究進展[J].臨床肝膽病志,2017,33(3):563-566.

[20] 李耕.miRNA-155靶向調控MMP-9對肝纖維化的作用及機制[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2017,14(8):1090-1091.

[21] 陳征,劉曉峰,麻樹霖. microRNA-375在肝纖維化中的作用及其調控信號通路的研究[J].國際消化病雜志,2016,36(6):355-359.

[22] Xie KL, Zhang YG, Liu J, et al. MicroRNAs Associated With HBV Infection And HBV-related HCC[J]. Theranostics, 2014,4(12):1176.

[23] 俞今晶,來純云.c-Myc在腫瘤中的表達及功能[J].國際腫瘤學雜志,2017,44(4):278-280.

[24] 謝聰,任廣立,許蔓春,等. miR-146a在HepG2.2.15細胞中對c-Myc基因表達影響的研究[J].重慶醫(yī)學,2017,46(17):2030-2033.

[25] Na Z, Wu J, Xiang W, et al. Low-level expression of microRNA-375 predicts poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J]. Tumor Biology, 2016,37(2):2145-2152.

[26] 申曉賀,衛(wèi)志遠,倪兵,等.HBV病毒X蛋白誘導肝細胞miRNA表達譜變化的研究[J].免疫學雜志,2016,32(3):185-191.

[27] Wei X, Tan C, Tang C, et al. Epigenetic repression of miR-132 expression by the hepatitis B virus x protein in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma[J]. Cell Signal, 2013,25(5):1037-1043.

[28] 伍剛,鄭波,黃銳,等.HBx下調miR-16家族表達促進肝癌細胞惡性轉化[J].中國普外基礎與臨床雜志,2017,24(4):412-419.

[29] Alqahtani AA, Alanazi MR, Nazir N, et al. Association of Single Nucleotide Polymorphisms in MicroRNAs with Susceptibility to Hepatitis B Virus Infection and HBV-related Liver Complications: A Study in a Saudi Arabian Population[J]. J Viral Hepat, 2017,24(12):1132-1142.

[30] 李蕓,李兵勝,張衛(wèi)芳,等.miR-146a G>C基因多態(tài)性與中國原發(fā)性肝癌患者遺傳易感性的Meta分析[J].中國臨床藥理學與治療學,2017,22(7):779-786.