Cervista HR-HPV檢測 A9組陽性208例臨床分析△

莫菊玲 馮敏清 肇麗杰 胡路琴 劉小燕

(廣東省佛山市婦幼保健院 佛山 528200)

近年來，宮頸癌病因學領域的研究有了重大突破，明確了人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染是引發婦女罹患宮頸癌的重要因素。HPV亞型、CIN級別與宮頸癌病變之間存在一定的關系，不同的HPV亞型對宮頸上皮細胞的感染能力不同，而且存在較大差異，其中HPV16和HPV18是引發宮頸癌及其癌前病變的發生率最高的病毒株。如何正確識別HPV的各種亞型，特別是各亞型感染與宮頸病變進展的關系，是及早發現、及時干預宮頸癌前病變、預防宮頸癌的最有效和最經濟的手段。本文應用Cervista HPV檢測技術分析A9組高危型感染與CIN級別的關系，旨在闡明Cervista HPV檢測 A9組高危型HPV感染在宮頸癌前病變及宮頸癌篩查中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選擇2017年1月～2017年6月期間來我院婦科門診就診的細胞學檢查≥ASCUS的患者，行陰道鏡檢查，且在陰道鏡下定位活檢，對經病理檢驗確診為CIN的患者使用TCT檢測，用同一剩余樣本進行Cervista HR-HPV檢測，共篩選出符合條件A9型組陽性患者208例，對上述患者進行臨床分析。患者年齡范圍20～65歲，平均年齡為(38.25±9.15)歲，其中CINⅠ為52例，CINⅡ為78例，CINⅢ為75例，浸潤癌為3例。所有研究對象均有3年以上性生活史，無子宮切除和宮頸手術史。

1.2 方法

1.2.1TCT檢測

應用新柏氏液基細胞學檢測(TCT)技術(Hologic公司，美國)檢測宮頸細胞，診斷結果根據國際癌癥協會(NCI)推薦的TBS(2001)診斷系統分類標準進行分類，所有標本均由我院細胞病理科專業醫師進行閱片并作出診斷。

1.2.2Cervista HPV檢測

標本使用新柏氏液基細胞學檢測剩余樣本(Hologic公司)，所有Cervista HR-HPV檢測均按照儀器生產商提供的說明書中的檢測流程進行。使用Genfind DNA提取試劑盒(Hologic公司)從患者剩余的TCT宮頸樣本中進行DNA樣本提取，采用酶切信號放大技術來檢測DNA的14種高危型HPV病毒，檢測試劑中含有3組寡核苷酸探針混合物，分別為A5/A6組、A7組和A9組，3組探針共可檢測出14種HPV病毒，A5/A6型組可識別51、56、66亞型，A7型組可識別18、39、45、59、68亞型，A9型組可識別16、31、33、52、58亞型。

1.2.3陰道鏡檢查及宮頸活檢

由技術過硬、經驗豐富的宮頸專科門診醫生進行陰道鏡檢查，在陰道鏡指導下在病變部位或疑似病變部位取活檢，如果陰道鏡效果不好，則繼續行宮頸管搔刮術，所有組織標本均由本院有經驗的專業病理科醫生進行閱片并作出診斷。

1.3 統計學處理

采用SPSS17.0軟件進行統計學處理，計數資料以頻數和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05代表差異具有統計學意義。

2 結果

Cervista HPV A9型組陽性208例中年齡構成比：<30歲67例，占比32.21%；30～39歲68例，占比32.69%；40～49歲65例，占比31.25%；≥50歲10例，占比4.81%。年齡差距差異具有統計學意義(P<0.05)。49歲以內HPVA9型組感染率相近，差異無統計學意義(P>0.05)，而年齡大于50歲以上者HPV感染率明顯下降。由此提示HPV感染率與年齡相關，年齡不同，婦女體內的雌激素水平、宮頸局部的免疫功能以及個人的性生活狀況均不相同，因此HPV病毒的感染幾率、清除速率與再次感染幾率都不盡相同。

Cervista HPV A9型組陽性208例中各級別CIN在不同年齡段的分布情況：208例標本經活檢病理確診CINⅠ為52例，CINⅡ為78例,CINⅢ為75例，浸潤癌為3例，隨著年齡的增大，CINⅡ～Ⅲ及浸潤癌的發生率亦隨之增加，見表1。

表1 各級別CIN及浸潤癌發生率在不同年齡段的分布情況

3 討論

宮頸癌是婦科常見的、高發的惡性腫瘤之一，其發病率高居女性惡性腫瘤發病率的第2名，全球每年因宮頸癌致死的患者人數約有20余萬[1]。有數據顯示，2015年我國宮頸癌新發病人數為9.89萬，其中死亡人數為3.05萬[2]。而在發達國家宮頸癌的死亡率已經退出前10位，這主要得益于發達國家持續推進有組織的大規模宮頸癌篩查項目，且其宮頸癌篩查技術比較先進的[3]。而在我國，宮頸癌則居于女性生殖系統惡性腫瘤發病率與死亡率之首，且近年來顯現出明顯的年輕化、低齡化趨勢。眾多流行病學、分子生物學與基礎醫學研究已經證實高危型HPV持續感染是誘導宮頸癌發生的根本原因。因而，宮頸癌也是目前人類所患癌癥中唯一能夠明確病因的，這項發現對于宮頸癌的防治具有非常重要的意義[4]。從女性宮頸感染高危型HPV開始到宮頸癌前病變直至最終發展成為宮頸癌是一個漫長、漸變、反復的過程，通常需要經歷8～10年時間，有的甚至更長時間。而HPV病毒并非是一種不可逆的生殖道感染[5]，在這個漸變的過程中，及時發現高危因素，及早明確診斷、正確治療癌前病變，是阻止其發展為浸潤癌、降低宮頸癌發生率和死亡率的重中之重。由于HPV DNA 檢測具有高度的靈敏性和可靠性，因而可更加有效地排除低風險女性，近年來已被一些國家作為初篩手段納入國家宮頸癌篩查體系中[6]。隨著對HPV結構、性質及感染機制等基礎研究的不斷深入，各種更加簡便、高效的HPV檢測方法不斷涌現。由于年輕女性是HPV感染的高危人群，因此，中國優生科學協會陰道鏡和宮頸病理學分會(CSCCP)建議以高危HPV檢測作為初篩用于30歲以上女性[7]。本文采用的DNA酶切放大技術檢測高危型HPV是2009年獲得美國國家食品藥品監督管理局(FDA)批準的，Cervista HPV 檢測系統是全新一代可區分不同高危型組、且擁有內部質控技術的高危型HPV檢測方法，該方法基于DNA酶切放大技術(即invader技術)，一種用于檢測特定核苷酸序列的信號放大技術定性檢測14種HPV-DNA高危亞型，檢測試劑中含有3組寡核苷酸探針混合物，分別為A5/A6組、A7組和A9組，3組探針共可檢測出14種HPV病毒，A5/A6型組可識別51、56、66亞型，A7型組可識別18、39、45、59、68亞型，A9型組可識別16、31、33、52、58亞型。陳慧萍等[8]的研究顯示A9型組高危型HPV感染占所有感染人群的45.00%，并且A9型組HPV感染患者在CIN中的陽性率隨著病變程度的增加呈上升趨勢，本文分析結果亦顯示A9型組高危HPV感染發生宮頸病變(CIN2+或CIN3+)患者明顯高于CIN1, 差異有統計學意義(P<0.05)。一項多中心臨床研究表明：Cervista HPV 檢測A9組對CIN2+十分靈敏且陰性預測值十分準確，分別達到87.97%和78.3%，可見其在宮頸癌篩查中意義重大。目前，HPV16和HPV18是引發宮頸癌及其癌前病變的發生率最高的病毒株，70%左右的宮頸癌發生都與HPV16、18型感染有關[9]。但由于種族和基因的差異，對于中國人來說HPV16,31,33亞型是與CIN2+的關系最為密切病毒。上海的一項大樣本研究[10]顯示，高危型HPV感染在CINⅡ、CINⅢ以及宮頸鱗癌中的發生率分別為74.9%、70.2%和83.3%，最常見的高危型HPV型是16、58和52型。廣州金域診斷中心[11]以HPV分型檢測共51345例(其中廣東占55%)，結果亦顯示最常見的高危型HPV感染依次為52、16、58亞型，50歲以上組則是以致病性最強的16亞型為最常見。本文10例高危型HPVA9型組感染中，全部為CIN2+，2例為浸潤癌，與其結果相符。而A9組正好可識別16、31、33、52、58亞型。因此，臨床中若以高危HPV作為初篩，如檢出A9型組高危HPV陽性，應引起重視，做更進一步的隨訪和檢查，包括TCT分流檢測或陰道鏡檢查，以便及早發現高級別宮頸病變，并給于積極治療，可提高發現宮頸癌并有效降低死亡率。