應用高通量測序技術研究新疆產區葡萄果實、葉片及果園土壤微生物多樣性

魏玉潔，鄒 彎，馬文瑞，閆寅卓，武 運,*，薛 潔,*

（1.新疆農業大學食品科學與藥學學院，新疆 烏魯木齊 830000；2.中國食品發酵工業研究院，北京 100015）

葡萄酒的風格不僅取決于釀酒葡萄品種、釀造工藝，而且與發酵過程中微生物的代謝息息相關。新西蘭科學家研究表明，決定葡萄酒獨特風味的化合物中，大約有一半來自微生物的代謝過程。在自然發酵過程中，葡萄酒中的微生物主要來源釀酒葡萄、葡萄園、釀造設備、酒廠車間環境等[1-4]，這些微生物在發酵過程中會隨著葡萄果粒和釀造工序進入發酵罐參與發酵過程，因此對葡萄酒的品質形成有一定影響。

釀酒葡萄在生長過程中，受葡萄園土壤類型、地理地形、光照、降水量、晝夜溫差等自然因素的影響，附著在葡萄原料表皮中的微生物種類存在顯著差異[5]。目前世界上許多葡萄酒產地的本土微生物菌群已經被廣泛研究，如西班牙、意大利、法國、美國、澳大利亞等。我國葡萄栽培區域廣闊，葡萄適栽區的生態地理條件復雜多樣，勢必蘊藏著豐富的釀酒微生物菌資源。但遺憾的是除釀酒葡萄自然發酵液中酵母多樣性的分析引起研究人員的極大關注外[6-9]，對于葡萄表面微生物資源和葡萄園中微生物的生態研究一直未得到應有的重視，其多樣性研究在我國尚屬空白。

本研究利用高通量測序技術分析新疆產區3 個不同地區葡萄園中釀酒葡萄、土壤以及葡萄葉片中微生物的組成，揭示同種生態系統中地生微生物群落和附生微生物群落之間、不同生態系統微生物群落之間的生態聯系及交互作用，為新疆產區釀酒微生物資源庫的建設以及優良微生物的篩選提供基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實驗樣品來自中國新疆天山北麓釀酒葡萄產區中的A、B和C 3 個葡萄園中的釀酒葡萄（G）、葡萄葉片（L）和葡萄園土壤（S），分別于2015年9月采樣，每種樣品采集3 份，樣品具體如表1所示。

表1 實驗樣品Table 1 Experimental samples

瓊脂糖 西班牙Biowest Agarose公司；NGS-ITS1 copy1 Barcode1-70、NGS-16s V4 copy1 Barcode1-70生工生物工程（上海）股份有限公司；Gold View I核酸染料 北京中生瑞泰科技有限公司；DL 2000 Marker美國Axygen公司；所有提取用無機、有機溶劑均為國產分析純。

1.2 儀器與設備

Illumina Misq測序平臺 國家級酒類品質與安全國際聯合研究中心；電子天平 瑞士梅特勒-托利多公司；立式電熱壓力蒸汽滅菌鍋 上海申安醫療器械廠；2-16N高速微量離心機 湖南恒諾儀器設備有限公司；渦旋振蕩器 美國Scientific Industries公司；Mini-beater組織研磨器 美國Biospec公司；BioSpec-nano核酸蛋白檢測儀 德國Eppendorf公司；BG-Power 600電泳儀鄭州南北儀器設備有限公司；Biosystems Model溫度梯度聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction，PCR）儀、Tanon 1600凝膠成像儀 美國伯樂公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品采集

土壤采樣方法：去除葡萄地表面的植物等殘體，用土鏟垂直切開土壤，在土壤深度20 cm處取樣，每個取樣點取樣約0.5 kg[10]。

葡萄葉片、葡萄采樣方法：以一株葡萄樹的上、中、下3 個部位采樣，用剪刀剪下葡萄葉片和葡萄串[11]。

1.3.2 樣品細菌和真菌的分離

1.3.2.1 土壤細菌和真菌的分離

將塊狀土壤輕輕破碎為粉末狀，稱取0.4 g土壤樣品和0.5 g研磨珠于滅菌的2 mL離心管中。

1.3.2.2 葡萄及葡萄葉片細菌和真菌的分離[12-14]

1）稱取葡萄皮、葉片（無果肉、無果梗）各4 g，加入到滅菌的50 mL離心管L1中，加6 mL TENP緩沖液（50 mmol/L Tris，20 mmol/L EDTA，100 mmol/L NaCl，1% PVP，pH 10.0），渦旋振蕩10 min；2）配平，3 000×g離心5 min，將上清液轉移至一個新的50 mL離心管L2中；3）再吸取6 mL TENP緩沖液到離心管L1中，渦旋振蕩5 min，配平，3 000×g離心5 min，將上清液轉移至離心管L2中；4）重復步驟3）；5）吸取6 mL磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）到離心管L1中，渦旋振蕩5 min，配平，3 000×g離心5 min，將上清液轉移至離心管L2中；6）將離心管L2配平，9 000×g離心10 min，棄上清液，留下的沉淀即為所需樣品，如需放置則-20 ℃保存。

1.3.3 DNA的粗提

土壤中微生物原基因組DNA的提取采用Mag-Bind Soil DNA Kit Protocol試劑盒（OMEGA）；葡萄表面、葡萄葉片微生物原基因組DNA的提取采用Fast DNA SPIN Kit for Soil試劑盒（MP）。

1.3.4 樣品分析

由中國食品發酵工業研究院國家級酒類品質與安全國際聯合研究中心應用Illumina Misq測序平臺進行分析。

1.3.4.1 樣品PCR[15-16]

真菌ITS ITS1區域擴增通用引物：ITS 1F（5’-CTTGGTCATTTAGAGGAGTAA-3’）；ITS 1R（5’-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3’）。PCR（50 μL）擴增體系：dNTP Mixture 4 μL，10×PCR Buffer（Mg2+plus）5 μL，正向和反向引物各1 μL，模板DNA 5 μL，Ex Taq酶0.25 μL，ddH2O補足至50 μL，充分混勻。PCR擴增程序：98 ℃預變性3 min；98 ℃變性45 s，53 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，反應35 個循環；72 ℃延伸8 min。-20 ℃保存。

細菌16S rDNA V4擴增通用引物：16S 515F（5’-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3’）；16S 806R（5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）。PCR（50 μL）擴增體系：dNTP Mixture 4 μL，10×PCR Buffer（Mg2+plus） 5 μL，正向和反向引物各1 μL，模板DNA 5 μL，Ex Taq酶0.25 μL，ddH2O補足至50 μL，充分混勻。PCR擴增程序：95 ℃預變性3 min；95 ℃變性45 s，50 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，反應35 個循環；72 ℃延伸5 min。-20 ℃保存。

1.3.4.2 PCR產物瓊脂糖凝膠電泳分析

采用DL2000 Marker、1%的瓊脂糖凝膠，110 V恒壓對PCR產物進行電泳35 min，凝膠成像儀觀察電泳結果。

1.3.5 高通量測序[17-23]

使用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒對真菌、細菌的PCR擴增產物進行切膠回收。采用Life Qubit 3.0對純化后的PCR產物進行濃度定量，構建真菌ITS ITS1、細菌16S rDNA V4區域文庫。將樣品（文庫）逐步稀釋到4 nm，按1∶1加入氫氧化鈉室溫變性5 min，加入HT1 Buffer預冷，選8 ppm進行高通量上機測序。

1.3.6 原始測序數據統計

下機后，采用雙峰（pair-end）測序法舍棄原始數據中的低質量序列（保證50 個連續堿基的平均質量大于Q30）。用Flash軟件，過濾對接上的序列（連續相同的堿基個數小于6，模糊堿基個數小于1），設計無法對接的序列，得到最終用于OTU（operational taxonomic unit）分析的序列。

1.3.7 OTU列表生成

采用Qiime軟件，將相似度達97%以上的序列歸為一個操作分類單元即OTU；聚類所有序列（Ucl法），參照RDP（Ribosomal Database Project）數據庫，采用貝葉斯算法注釋每個分類中的OTU代表序列，得到每個OTU的分類學信息。

1.3.8 微生物群落結構及多樣性分析

對OTU數據進行整理，在微生物分類為屬的水平上對各個樣本中的真菌、細菌進行物種豐度柱形圖統計，確定優勢菌屬；通過主坐標分析圖及聚類圖分析樣本間相似度；通過維恩圖觀察A、B、C 3 個葡萄園中樣本間所包含的相同菌屬，以此來綜合分析各個樣本中微生物群落的多樣性。

2 結果與分析

2.1 實驗樣品中微生物群落多樣性結果

高通量測序結果表明，本研究27 個樣品中共檢測出了272 種不同屬的真核微生物，屬于Ascomycota、Basidiomycota、Chytridiomycota、Zygomycota和Un—s-Fungal sp 38 CC 06_28這5 個菌門；檢測出了317 種原核微生物，屬于Actinobacteria、Bacteroidetes、Crenarchaeota、Firmicutes、Nitrospirae、Planctomycetes、Proteobacteria和Verrucomicrobia這8 個菌門。含量較多的前15 種菌屬如表2、3所示。

表2 3 個不同地區土壤、葡萄和葉片中屬水平真菌微生物數量Table 2 Fungal quantities at family level in soil, as well as on grapes and leaves

表2顯示了樣品的真菌群落構成及大小，從不同的葡萄園來看，B地區檢測出的真菌數量最多，其次為C地區、A地區；從樣品種類來看，土壤所檢測出的真菌數量是最高的，其次是葡萄葉片，最后是葡萄表面。表3顯示了樣品的細菌群落構成及大小，從不同的葡萄園來看，A地區檢測出的細菌數量最多，其次為B地區、C地區；從樣品種類來看，同真菌檢測結果相同，土壤所檢測出的細菌數量是最高的，其次是葡萄葉片，最后是葡萄表面。

表3 3 個不同地區土壤、葡萄和葉片中屬水平細菌微生物數量Table 3 Bacterial quantities at family level in soil, as well as on grapes and leaves

2.2 微生物豐度分析

圖1 真菌群落屬水平相對豐度Fig. 1 Relative abundance of fungi at genus level

由于樣品中所檢測出的微生物種類繁多，許多物種含量十分少，不能明顯地與含量多的物種表示在同一個圖中，所以以物種的豐度大于1%作為劃分依據，分別選擇了排名前14的真菌、細菌優勢菌屬，以相對豐度為縱坐標，繪制柱形圖。圖1顯示出相對豐度值高于1%的14 種真菌菌屬，其中，Erysiphe在A、C地區土壤中含量很低甚至未檢出，Sordaria和Tetracladium在A地區葡萄葉片中含量很低甚至未檢出，Tetracladium在A地區葡萄、Geomyces在C地區葉片中含量很低甚至未檢出。在土壤樣品中Saccharomyces最為豐富，其次是Sordaria、Tetracladium和Geomyces；在葡萄中，Aureobasidium是最豐富的，其次為Cryptococcus、Aspergillus和Pleosporales；葡萄葉片中最豐富的也是Aureobasidium，其次為Sporospora。

Saccharomyces、Aureobasidium、Sporospora和Aspergillus雖然豐度有所不同，但出現在所有樣品中。Saccharomyces、Sordaria和Tetracladium大量存在于土壤樣品中，而在葡萄表面尤其是葉片中含量十分少。Aureobasidium大量存在于葡萄表面，其次為葉片，在土壤中含量卻十分少。Pleosporales、Penicillium、Cryptococcus、Dothideales、Alternaria和Scleroderma也出現在所有樣品中，但豐度較小。值得注意的是，Erysiphe在B地區葡萄葉片中大量存在，幾乎接近于菌屬總和的50%。

圖2 細菌群落屬水平相對豐度Fig. 2 Relative abundance of bacteria at genus level

圖2 顯示，在27組樣品中，其他未檢出菌屬所占比例較大，只有Arthrobacter、Sphingomonas、Steroidobacter、Pseudomonas和Acinetobacter 5 種細菌菌屬存在于所有土壤、葉片和葡萄中，其他菌屬尤其是Oenococcus含量很低甚至未檢出。土壤中細菌檢出量明顯大于葉片，葡萄表面所檢出的細菌最少。

土壤中豐度最大的菌屬為Kaistobacter，其次為Arthrobacter、Skermanella；葡萄和葉片中Pseudomonas豐度相對較大，其次為Sphingomonas和Adhaeribacter。Flavisolibacter在A地區葡萄中、Adhaeribacter在B地區葡萄中未檢出。所有樣品中雖然檢出有醋酸桿菌，但其含量均很低，沒有進入前14 種優勢菌屬范圍。

2.3 樣品中所含OTU數目分析

圖3 真菌群落維恩圖Fig. 3 Venn diagram of fungal communities

采用Qiime軟件，得到每個OTU的分類學信息，通過R軟件，繪制維恩圖。由圖3a看出，3 個葡萄園的土壤樣品中分別含有真菌種類150、156、126、141、142、137、131、146 個和143 個，其中共有的菌種種類有94 個；由圖3b看出，葡萄果實樣品中分別含有真菌種類91、98、80、118、104、103、97、110 個和106 個，共有的真菌種類有69 個；由圖3c看出，葡萄葉片樣品中分別含有真菌種類79、80、77、99、73、90、87、101 個和89 個，共有的真菌種類58 個。3 個地區葡萄園土壤中所含的相同真菌種類較多，而葡萄葉片中較少。

圖4 細菌群落維恩圖Fig. 4 Venn diagram of bacterial communities

由圖4a可看出，3個葡萄園的土壤樣品中分別含有細菌種類1 070、1 083、1 087、1 090、1 065、1 077、1 083、1 057個和1 058 個，共有的細菌種類1 009 個；由圖4b看出，葡萄樣品中分別含有的細菌種類51、54、40、68、57、56、59、63 個和56 個，有32 種細菌在所有葡萄樣品中均含有；由圖4c看出，葡萄葉片中分別含有細菌種類82、126、103、86、84、104、101、83 個和92 個，共有的細菌種類47 個。從細菌OTU數目分析，不同地區土壤中相同微生物比較多，而葡萄葉片和葡萄果實相對較少。

2.4 不同樣品中微生物群落的比較分析

圖5 真菌群落主成分分析（a）和UPGMA聚類分析（b）圖Fig. 5 Principal coordinate analysis of fungal communities (a) and UPGMA cluster analysis (b) of the fungal microbiota

用R語言分析3 個葡萄園樣品的真菌群落，不同樣品分別用不同的點來表示，進行主成分分析及聚類分析。圖5a中，當PC1為63.28%，PC2為20.92%時，從樣品種類來看，葡萄葉片和葡萄果實中的真菌群落相似性較高，相比之下，土壤與葉片、葡萄的距離較遠，相似性較低。從樣品采集地點來看，3 個葡萄園中土壤的相似性較高，B葡萄園中的葉片微生物與A、C地區有清晰的劃分，而A、C地區的釀酒葡萄雖然與B地區之間有一定的距離，但差異較小。

為了比較不同地區樣品間微生物種類的差異，本研究將所有樣品真菌群落進行聚類分析（圖5b），結果表明，在遺傳距離為0.05處時，土壤樣品與葡萄葉片、釀酒葡萄產生了分支，同時，3 個葡萄園中的土壤也各成一個分支，差異明顯。葡萄葉片與葡萄差異較小，B葡萄園的葡萄葉片在0.1遺傳距離處與A、C葡萄園產生分支，各葡萄園中的葡萄無明顯差異。

圖6 細菌群落主成分分析（a）和UPGMA聚類分析（b）圖Fig. 6 Principal coordinate analysis of bacterial communities (a) and UPGMA cluster analysis (b) of the bacterial microbiota

與真菌群落相同，用SPSS分析3 個葡萄園樣品的細菌群落。圖6a顯示，當PC1為70.61%，PC2為15.50%時，從樣品種類來看，葡萄葉片和葡萄中的真菌群落相似性十分高，相比之下，土壤與葉片、葡萄的距離較遠，相似性較低。從樣品采集地點來看，3 個葡萄園中土壤的相似性較高，其中A和B葡萄園更為相似，C葡萄園中的微生物與A、B地區存在差異；A、B葡萄園的葉片和葡萄聚集在一起，無明顯的差異，而C葡萄園相對于A、B葡萄園來說，有明顯的區別，存在差異。

將所有樣品的細菌群落進行聚類分析（圖6b），結果與主成分分析結果基本一致。在遺傳距離為0.05處時，所有的土壤樣品就與葡萄葉片、葡萄產生了分支，但3 個葡萄園中土壤的劃分不是十分清晰，C與A、B葡萄園不在同一條分支上，而A和B葡萄園交互在一起，無明顯差異。B、C葡萄園中的葉片和葡萄均各自產生一條分支，有明確的區別，只有A葡萄園中的葉片和葡萄無明顯差異。

3 討 論

近年來，對于葡萄酒微生物的研究已不只局限于釀酒葡萄漿果，而是逐漸擴大到了葡萄葉片、葡萄樹皮、葡萄園土壤乃至更大的生態系統，許多研究都表明與葡萄酒相關的真菌和細菌微生物會附生在葡萄樹的各個部位上，如葡萄汁、葡萄酒、葡萄葉片、樹皮、樹根、土壤等[24-26]。

Renouf等[27]研究表明，土壤中的優勢真菌菌屬為Saccharomyces、Sordaria、Tetracladium和Geomyces，葡萄和葡萄葉片中的優勢真菌菌屬為Aureobasidium、Sporospora、Cryptococcus和Dothideales，此外，本研究還檢測到了其他真菌菌屬如Aspergillus、Pleosporales、Penicillium、Erysisphe、Alternaria和Scleroderma；Pinto[28]和Stevanato[29]等研究表明，Ascomycota和Basidiomycot是土壤、葡萄和葡萄葉片中主要的真菌微生物（門水平），本研究通過檢測不僅得到了Ascomycota和Basidiomycot，還得到了Chytridiomycota，Un—s-fungal sp CC 06_28和Zygomycota。需要注意的是，已有研究[30-32]指出，葡萄樹白粉病對葡萄傷害非常大，使葡萄幼果易開裂腐敗，該病由Erysisphe引發，但目前可以有效預防，本研究在B地區的葡萄葉片上檢測出了大量的Erysisphe，建議B地區需要盡快進行防治；已有研究[33-35]指出，赭曲霉素可以致人死亡，它主要由Aspergillus產生，是全球葡萄酒都存在的問題，有些權威機構建立了2 μg/L的最大限量，雖然如此，但它存在于葡萄和葡萄酒中的可能性風險卻不高；Lachenmeier等[36]指出，霉菌是一種絲狀真菌，大量存在于葡萄表面，能夠侵染葡萄的莖、葉、花、果實等，造成果實減產，影響果實品質，它在儲酒橡木桶內外、葡萄酒瓶木塞處很容易生長繁殖，當濃度達到十億分之一或萬億分之一時就能明顯的聞出，產生令人不愉快的霉味，部分霉菌的次級代謝產物還有致癌趨勢，損害人體健康。

Hirano[37]、Park[38]等研究表明，土壤中的優勢細菌菌屬為Kaistobacter、Arthrobacter、Skermanella和Sphingomonas，葡萄和葡萄葉片中的優勢細菌菌屬為Pseudomonas、Acinetobacter和Kaistobacter，此外，本研究還檢測到了其他細菌菌屬如Steroidobacter、Rubrobacter、Flavisolibacter、Pontibacter、Nitrospira、Rhodoplanes和Adhaeribacter；Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes和Actinobacteria為土壤、葡萄和葡萄葉片中主要的細菌微生物（門水平），本研究通過檢測不僅得到了Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes和Actinobacteria，還得到了Crenarchaeota、Nitrospirae、Planctomycetes和Verrucomicrobia；李翠霞[39]通過對Oenococcus的分離鑒定得出，Oenococcus在葡萄酒乳酸發酵階段數量迅速增長成為優勢菌屬，并大量存在于葡萄酒中，本研究也證明了Oenococcus并非土壤、葡萄、葡萄葉片中的優勢菌。

眾所周知，酵母菌是葡萄酒釀造的靈魂，直接決定了葡萄酒的風味及感官品質。目前葡萄酒相關酵母菌種類繁多，分屬于24 個屬的120 種，幾乎遍及酵母菌的主要屬種，主要有Saccharomyces、Pichia、Candida、Hanseniaspora、Schizosaccharomyces、Dekkera、Metschnikowia、Issatchenkia、Saccharomycodes、Zygosaccharomyces 10 個屬的酵母，其中最具代表性的為酵母屬。本研究檢測到的Saccharomyces，可以將葡萄漿果中的糖轉化成乙醇、CO2及其他代謝產物，在葡萄汁發酵過程中生成并釋放多種香氣物質，同時還對葡萄果實表面的細菌有一定的生物抑制作用[40-41]，一些非釀酒酵母經過恰當利用控制，還可有效提高葡萄酒風味及復雜性[42-44]。在真菌微生物中，受貴腐霉菌侵染的葡萄所釀造的貴腐葡萄酒，風味與其他葡萄酒迥然不同，口味獨特，是一種少見的高檔酒[45]。

與真菌相比，除了部分乳酸菌外，大多數細菌微生物對于葡萄酒來說都是有害菌，會在不同程度上對葡萄酒的品質造成影響，例如檢測到的Proteobacteria，醋酸菌是葡萄酒釀造中典型的有害菌[46]，它能夠將乙醇轉化成乙酸，導致葡萄酒酸敗甚至變質。因此，在釀造過程的各個階段都應該盡可能避免或減少細菌侵染，并且跟蹤監測葡萄酒中的微生物狀況，以確保葡萄酒的良好品質。葡萄酒相關細菌主要為乳酸菌和醋酸菌，乳酸菌有酒球菌屬（Oenococcus）、乳桿菌屬（Latobacillus）、明串珠菌屬（Leuconostoc）、片球菌屬（Pediococcus），其中酒類酒球菌（Oenococcusoeni）是進行蘋果酸-乳酸發酵（malate fermentation，MLF）的主要菌種，部分短乳桿菌、植物乳桿菌也可以引發蘋乳發酵[47-48]，本研究檢測到的Firmicutes，發生MLF后可以有效的降低葡萄酒酸度，避免葡萄酒在裝瓶、貯存期間發生二次發酵，增加葡萄酒的微生物學穩定性，乳酸菌的代謝可以改變葡萄酒中醛類、酯類等呈香物質和氨基酸、有機酸、維生素等微量元素的成分及含量，從而影響葡萄酒的感官品質[49-50]。

傳統培養方法結合PCR如限制片段長度多態性分析、隨機擴增多態性分析技術及一些非培養方法如變性梯度凝膠電泳、實時熒光PCR技術和熒光原位雜交技術存在費力、耗時、結果可靠性差等缺陷[51-53]，本研究利用高通量測序技術通量高、產生數據量大、測序周期短、準確率高以及成本低等在微生物多樣性研究中具有的優越性，將該技術運用于葡萄酒微生物多樣性分析，研究表明，良好的環境有利于大多數微生物的生長，影響著土壤、葡萄、葡萄葉片中微生物群落多樣性。從樣品種類來說，土壤比葡萄、葡萄葉片中的真菌和細菌種類多、數量多，早期研究表明，葡萄園土壤可以說是一個天然的微生物菌庫[54]，它提供著微生物生長所需要的營養，如碳源（氨基酸、有機酸和碳水化合物）、氮源和生長因子等[55]，其本身的理化性質如質地、礦物成分、有機質等，直接影響著微生物的生長和分布，而施肥、耕作、種植等不同葡萄園管理方式及重金屬、有機污染物、工廠廢棄物等外部因素又可能會影響土壤的物理化學性質，從而改變微生物群落的組成和分布[56-62]。從樣品所在地區來說，A、B地區冬季嚴寒、干燥，夏季酷熱，C地區氣候條件相對較溫和，冬季寒冷，夏季炎熱，3 個葡萄園日照充裕，晝夜溫差大，降水量少，病蟲害少，均為種植釀酒葡萄的優質產區。但C地區微生物多樣性低于A、B地區，其原因主要在于C地區的氣候條件，春季及早夏的大風、沙塵天氣，嚴重影響著微生物的生長[63-64]。

本研究通過檢測分析新疆A、B、C 3 個地區葡萄園土壤、葡萄和葡萄葉片中的微生物種類、數量及分布，對新疆地區葡萄酒相關微生物群落多樣性有了一定的了解，為揭示新疆地區葡萄酒相關微生物多樣性、建立葡萄酒微生物種質資源庫、篩選優良品種、提高葡萄酒品質等方面提供了理論支持。

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