一葉萩組培快繁技術

王愛毅，王建萍，王 翔，路兆軍，李保進

(1.龍口市環保局，山東 龍口 265700； 2.煙臺市農業科學研究院，山東 煙臺 264000； 3.煙臺市林業科學研究所，山東 煙臺 264000)

一葉萩(Flueggeasuffruticosa(Pall.)Baill.)又名葉底珠、懶漢菜等，是大戟科白飯樹屬落葉灌木或小喬木。除西北尚未發現外，全國各省區均有分布，蒙古、俄羅斯、日本、朝鮮等地也有分布[1-2]。一葉萩繁殖能力強，觀賞價值高，抗寒抗旱，生長迅速，是荒山綠化和園林綠化的優良樹種之一[3]；其嫩枝、葉及花富含一葉萩堿(securinine)和二氫一葉堿等多種生物堿，可入藥，有活血舒筋、健脾益腎等功效[4]。富含的一葉萩堿，可治面部神經麻痹、嗜睡癥等癥。臨床試驗表明，一葉萩堿有較好的抗腫瘤活性，在臨床上有重要作用[5]。一葉萩幼嫩莖葉可以食用，營養價值高、口感好，是一種集藥用和食用于一身的新型野生蔬菜，近幾年已受到人們的重視，極具開發潛力[6]。

一葉萩通常采用播種和分株繁育，但存在育苗周期長、母株分離數量少等現實問題，不能滿足規模化育苗需求，限制了其推廣應用。組織快繁則具有繁殖速度快、繁殖系數高、保存親本優良性狀等諸多優點，可有效解決目前存在的突出問題，實現優質苗木的規模化生產需要。本試驗通過對一葉萩的組培快繁技術進行研究，探索出最佳初代、繼代、生根培養基以及移栽基質，旨在為一葉萩的規模化生產提供技術參考。

1 材料與方法

以一葉萩莖尖和莖段為供試材料。取春季一年生新梢，去掉葉片，在自來水下沖洗1 h，然后在超凈工作臺上先用75%酒精浸泡40 s，然后用0.1%升汞浸泡9～10 min，最后用無菌水沖洗4～6次。在超凈工作臺上將消毒好的莖尖用解剖針仔細的將幼葉剝去，接種到預先配制好的培養基上，莖段剪成1～2 cm的小段接種到培養基上，基本培養基為MS培養基，蔗糖30 g·L-1，瓊脂7.0～7.3 g·L-1，pH值為5.8，光照強度1 500～2 000 lx，光照時間為14 h·d-1，培養溫度(25±1)℃，空氣相對濕度為40%～70%。

初代外植體培養30 d左右，待分化成苗后，轉到增殖培養基上。在1/2MS增殖培養基中形成一定數量的試管苗，剪取高約1.5 cm以上的健壯幼苗轉移到生根培養基上，當生出3～4條1 cm左右的新根時，即可煉苗移栽。在自然光下馴化煉苗1周，然后進行透氣鍛煉，每天噴清水2～3次，3 d后取出幼苗，洗凈根部的培養基進行移栽。

2 結果與分析

2.1 莖段生長

由表1可以看出，濃度較高的6-BA與不同濃度的IBA組合，萌芽率較高，但生長細弱，有玻璃化現象，葉片表現畸形；IBA濃度較高時，與不同濃度的6-BA搭配萌芽率均不是很高。由此可見，高濃度IBA不利于一葉萩莖尖分化；較低濃度的6-BA與較高濃度的IBA搭配時，萌芽率均比較高；綜合萌芽率與芽的生長情況來看，最佳培養基是6-BA 0.50 mg·L-1+IBA 0.20 mg·L-1，萌芽率為96%，且長勢健壯；最差培養基為6-BA 1.00 mg·L-1+IBA 0.30 mg·L-1，雖然萌芽率較高，為71%，但芽生長細弱，且玻璃化現象嚴重。

2.2 莖尖生長

由表2可以看出，在不同濃度的培養基上，莖尖萌芽率與莖段表現出相似的規律，高濃度的6-BA芽生長細弱，有玻璃化現象；IBA濃度較高時莖尖萌芽率均比較低；最佳培養基也是6-BA 0.50 mg·L-1+IBA 0.20 mg·L-1；但是在同樣濃度的培養基中，莖尖萌芽率明顯低于莖段萌芽率，莖段最高萌芽率為96%，而莖尖最高萌芽率為57%，且最低萌芽率僅有21%，因此可以得出一葉萩莖段比莖尖更適于組織培養。

表1 不同培養基對一葉萩莖段生長的影響

表2 不同培養基對一葉萩莖尖生長的影響

2.3 增殖生長

由表3可以看出，GA3對一葉萩增殖生長影響較大，相同濃度的6-BA和IBA，添加GA3與不添加GA3增殖系數差距明顯；GA3濃度相同的條件下，IAA濃度越高增殖系數越高；IAA濃度相同的條件下，6-BA濃度越高，增殖系數越高，雖然叢生芽多，但是生長細弱，且葉片顏色發黃，不適合進行增殖培養；當培養為6-BA 0.5 mg·L-1+IAA 0.2 mg·L-1+GA30.1 mg·L-1時，雖然增殖系數不是最高，但是生長健壯，葉片顏色綠色，因此認為是最佳增殖培養基。

2.4 生根

由表4可以看出，是否添加NAA均能生根，但較低濃度的NAA能更好的促進生根。當NAA濃度為0.10 mg·L-1時生根率最高，為88%，且平均根長最長，為1.7 cm；濃度繼續增加，生根率和根長均下降。當濃度為0.30 mg·L-1時，生根率僅為27%，平均根長只有0.1 cm，可見高濃度的NAA抑制一葉萩生根。

表3 不同培養基對一葉萩增殖生長的影響

表4 不同培養基對一葉萩生根的影響

2.5 煉苗與移栽

由表5可知，以蛭石為基質成活率最高，為90%；蛭石+草炭土基質次之，為87%；沙+蛭石基質成活率也較高，為77%；草炭土成活率最低，僅為17%，且易爛根，這可能是由于透氣性差的緣故；在沙中成活率也較低，僅有25%，這可能是與沙保水性差有關。

表5 不同基質對一葉萩試管苗移栽的影響

3 小結與討論

3.1 初代培養

黃烈健等[7]認為，外植體的選擇要考慮不同樹種的生理特點、遺傳因素等方面，不同樹種最佳外植體不同，與外植體的發生途徑有關。本試驗在相同濃度激素配比的情況下，一葉萩初代培養莖段和莖尖成活率分別為96%和57%，表明一葉萩最適宜進行組織培養的外植體為莖段。

形成一個完整植株要經歷誘導期、增殖期、分化期、壯苗生根期等幾個時期，其生長過程主要受培養基和培養條件等因素的共同影響，其中激素的種類和濃度是至關重要的[8]。初代培養表明，一葉萩最佳初代培養基為6-BA 0.50 mg·L-1+IBA 0.20 mg·L-1，較高濃度的6-BA能促進不定芽生成，但濃度高易引起玻璃化現象，這與周瑞金等[9]在對棗樹離體葉片再生植株的研究結果相同；關于6-BA、IBA使用效果的比較，報道不盡一致，只有適當的細胞分裂素和生長素及其適宜的濃度配比才能獲得較高的不定芽再生效果，而本試驗中較高濃度的IBA則不利于不定芽的生成。

3.2 繼代培養

一葉萩最佳增殖培養基為MS+6-BA 0.50 mg·L-1+IAA 0.20 mg·L-1+GA30.10 mg·L-1。研究發現，6-BA對愈傷組織和芽的增殖效果比其他細胞分裂素的效果要好[10]，本試驗增殖培養中6-BA濃度越高，增殖能力越強；但濃度過高，造成叢生芽比較細弱。本試驗中是否添加GA3差距明顯，這與王建萍等[11]認為赤霉素能促進櫻桃砧木吉塞拉不定芽及葉片的形成結果一致。

3.3 生根與移栽

生根培養結果表明，最佳生根培養基為1/2MS+NAA 0.10 mg·L-1。不添加NAA也有根系生成，但效果相對添加NAA來說要差一些，這與劉鮮艷[12]在梨的研究中結果一致，但NAA濃度太高，對生根有抑制作用。移栽時采用蛭石作為基質成活率最高，在蛭石+草炭土中成活率也較高，采用草炭土、沙作為基質時成活率都比較差，因此試管苗移栽時須保證基質的透氣性，否則易爛根，同時也要保證基質的保水性，否則容易干枯死亡。

[1] 李秉滔. 中國植物志：第44卷，第1分冊[M]. 北京：科學出版社，1994.

[2] 劉家宜. 天津植物志[M]. 天津：天津科學技術出版社，2004.

[3] 魏遠，沈廣爽，張楠，等. 一葉萩大孢子發生和雌配子體發育[J]. 植物研究, 2014，34(2)：177-181.

[4] 徐興友，趙永光，孟憲東，等.葉底珠種子形態與組分研究[J]. 種子, 2007，26(4)：18-20.

[5] ZHANG W，LI J Y，LAN P，et al. Chemical synthesis and biological activities ofSecurinegaalkaloids[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，2011，20：203-217.

[6] 馬玉心. 新型野生蔬菜：葉底珠[J]. 北方園藝，2003(4)：6-8.

[7] 黃烈健，王鴻. 林木植物組織培養及存在問題的研究進展[J]. 林業科學研究，2016，29(3)：464-470.

[8] 范樹網，李應安，邱璐，等. 蝴蝶蘭原球莖誘導因素初探[J]. 安徽農業科學，2009，37(3)：976-978.

[9] 周瑞金，劉孟軍. 棗離體葉片高效再生植株的研究[J]. 園藝學報，2006，33(3)：625-628.

[10] DANTU P K，BHOJWANI S S．In vitro porpagation and corm fomration in Gladiolus[J]．Gartenbau Wissenseh Mften，1987，52：90-93.

[11] 王建萍，李公存，沙玉芬，等. 櫻桃砧木吉塞拉7號莖尖快繁技術研究[J]. 浙江農業科學，2017，58(6)：917-919.

[12] 劉鮮艷. 梨葉片再生苗生根研究[J]. 陜西農業科學，2010(5)：44-46.