4種常用水產藥物對錦鯉幼魚的急性毒性

楊志強，李瀟軒，馬行空，霍春林，梁政遠

（1.江蘇省淡水水產研究所，江蘇 南京 210017；2.無錫瑞順水產養殖科技有限公司，江蘇 無錫 214000）

錦鯉Cyprinus carpio是鯉突變品系經多代人工選育與定向培育成的觀賞魚類。錦鯉體態優雅、高貴，泳姿瀟灑、習性溫和、斑紋華麗、色彩絢麗、身軀雄健，被譽為“會游泳的藝術品”、“水中活寶石”等[1]。近年來，中國錦鯉市場發展迅速，很多地區將其列為水產養殖結構調整的首選對象，整個行業的消費和投資市場受到廣泛重視，成為未來休閑漁業、觀光農業的主導產品之一。我國錦鯉養殖業已有一定規模，但在集約化精養、蓄養的條件下，養殖密度大，養殖操作不當，水環境變化諸多，病害發生日趨嚴重，制約了養殖產量與規模的提升。

錦鯉魚種易出現寄生蟲、霉菌、細菌等疾病，引起大面積死亡[2]。其病害防治中藥物治療是最經濟、最有效的方法[3]。水產藥物實踐得知：養殖魚類品種、規格和生長階段不同，所用藥物的安全濃度也不同[4]。用藥不當或濃度超標都可能會帶來養殖魚類中毒[5]。為此，本試驗通過研究水產養殖中廣泛用于防治魚類苗種疾病的殺蟲劑—硫酸銅與硫酸亞鐵合劑（5∶2）、甲醛、敵百蟲和聚維酮碘對錦鯉幼魚的急性毒性，探討試驗藥物對錦鯉幼魚的安全濃度，為預防和治療錦鯉苗種疾病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用魚體長（12.5±1.0）cm，體質量（25.0±2.0）g，體表完好，游動正常，健康活潑，無傷、病、殘。試驗開始前在適宜條件下暫養1周，暫養期間水溫23.0～25.0℃，pH7.8～8.2，溶解氧濃度 ＞4.5mg·L-1，光照250～1 350lx。每天中午12點左右投喂1次。試驗開始前1d停止投喂。

試驗用藥物硫酸銅與硫酸亞鐵合劑（5∶2）、敵百蟲、聚維酮碘和甲醛的規格及生產廠家等見表1。其中硫酸銅與硫酸亞鐵均為分析純。

1.2 方法

2017年5月1日—5月27日，試驗在室內80cm×50cm×40cm的白色透明玻璃缸中進行。每缸放錦鯉幼魚50尾和一個長約30cm的微孔增氧管。一個試驗周期為4d。試驗用水為經48h曝氣的自來水，pH在7.8～8.2之間，硬度為200mg·L-1（以CaCO3計），溶解氧濃度 ＞4.5 mg·L-1，光照 250～1 350 lx，水溫 23.0～25.0℃。

試驗采用靜態急性毒性試驗法。在預試驗中，根據常用魚病防治用量進行調整，觀察錦鯉幼魚的活動，記錄存活狀況，得出正式試驗藥物區間。試驗設置6個濃度組以及1個對照組，每組3個重復，濃度梯度按照等對數間距設置，具體試驗藥物濃度見表2～表5。

表1 4種試驗藥物的規格與成分Tab.1 The specification and composition of four test drugs

表2 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚急性毒性試驗結果Tab.2 Toxicity of copper sulfate and ferrous sulfate mixture to koi carp fingerlings

依據相關要求與標準配置試驗液母液，逐步稀釋獲得設定藥液濃度，不同濃度藥液中放入試驗魚。每24h更換試驗藥液一次。試驗開始后進行連續觀察，記錄24h、48h、96h時錦鯉幼魚的存活情況，及時撈出死亡個體。以試驗魚失去活力、對外界刺激無反應為死亡標準[6]。

1.3 數據處理

不同時間段錦鯉幼魚的半致死濃度（median lethal concentration，LC50）按以下公式計算 ：lgLC50=XK-a∑（Pi+Pi+1），SC=B×0.3/（C/B）2。其中，LC50為半致死濃度，XK為最大劑量的對數，a為相鄰劑量比值的對數，Pi、Pi+1為各劑量組的死亡率，SC為安全濃度，B和C分別為48h和24h的LC50。數據分析使用R 3.0.2軟件。

2 結果與分析

2.1 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚的急性毒性

由表2可知，當硫酸銅與硫酸亞鐵合劑濃度為12.59mg·L-1（最高濃度）時，1h后錦鯉幼魚即開始急躁不安，4h后出現明顯中毒癥狀并開始大量死亡，24h的死亡率達98%；濃度為1.58mg·L-1（最低濃度）時，96h死亡率為0；濃度為2.40mg·L-（1較低濃度）時，約56h才出現死亡，96h死亡率為15.2%；濃度為8.32mg·L-（1較高濃度）時死亡率顯著上升。硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚24h和48h的半致死濃度為6.75mg·L-1和5.12mg·L-1，安全濃度為0.88mg·L-1，這與斑點叉尾Ictalurus punctatus的安全濃度 0.854mg·L-1、常用濃度 0.7mg·L-1[7]相差不大。因此，硫酸銅與硫酸亞鐵合劑可作為防治錦鯉苗種病害的藥物使用。結果顯示，重金屬離子主要通過富集作用對生物產生毒害效應，當重金屬離子在生物體內累積到一定濃度后會抑制生命體的正常生理生化過程。

2.2 甲醛對錦鯉幼魚的急性毒性

由表3可知，甲醛濃度為100.0mg·L-1（最高濃度）時，24h的死亡率達100%；濃度為10.00mg·L-1和15.85mg·L-1（較低濃度）時，96h的死亡率為0；濃度為25.12mg·L-1（中等濃度）時，32h出現死亡現象。甲醛對錦鯉幼魚的24h和48h半致死濃度分別為 78.77mg·L-1和 49.52mg·L-1，安全濃度為 5.87mg·L-1，這比小口脂鯉Prochilodus scrofa的安全濃度18.20mg·L-1[8]和黃顙魚 Pelteobagrus fulvidraco 苗種的安全濃度 15.48mg·L-1、現常用濃度 15～20mg·L-1[7]要低，其原因可能是試驗魚規格偏小，耐受力較低。

2.3 敵百蟲對錦鯉幼魚的急性毒性

由表4可知，敵百蟲濃度為10.00mg·L-1（最高濃度）時，24h的死亡率達100%；濃度為1.0mg·L-1（最低濃度）時，96h死亡率為0；濃度為2.51mg·L-1（較低濃度）時，12h才出現死亡，96h的死亡率仍較低。當敵百蟲濃度為6.31mg·L-1（較高濃度）時，死亡率顯著上升。敵百蟲對錦鯉幼魚的24h半致死濃度為 5.95mg·L-1，48h 半致死濃度為 4.28mg·L-1，安全濃度為 0.67mg·L-1，低于黃琪琰[9]和王武等[10]推薦的治療甲殼綱寄生蟲和吸蟲的潑灑濃度，其原因可能為試驗魚規格、品種有所差異，或水溫、計算方法、鹽度等存在差異。

2.4 聚維酮碘對錦鯉幼魚的急性毒性

由表5可知，聚維酮碘濃度為281.84mg·L-1（最高濃度）時，24h的死亡率達100%；濃度為15.85mg·L-1（最低濃度）時，96h死亡率為0；濃度為28.18mg·L-1（較低濃度）時，42h才出現死亡，96h的死亡率仍較低。當聚維酮碘濃度為158.49mg·L-1（較高濃度）時死亡率顯著上升。聚維酮碘對錦鯉幼魚24h和 48h的半致死濃度為 96.39mg·L-1和70.88mg·L-1，安全濃度為 11.49mg·L-1。

表3 甲醛對錦鯉幼魚急性毒性試驗結果Tab.3 Toxicity of formaldehyde to koi carp fingerlings

表4 敵百蟲對錦鯉幼魚急性毒性試驗結果Tab.4 Toxicity of trichlorfon to koi carp fingerlings

表5 聚維酮碘對錦鯉幼魚急性毒性試驗結果Tab.5 Toxicity of povidone iodine to koi carp fingerlings

3 討論

3.1 硫酸銅與硫酸亞鐵合劑對錦鯉幼魚的毒性影響

在水產養殖中，多選用硫酸銅與硫酸亞鐵合劑治療一些寄生蟲疾病。該合劑對刺激隱核蟲Cryptocaryon irritans、小瓜蟲Ichthyophthirius multifiliis等原蟲動物引起的疾病有很好的治療效果。其滅殺寄生蟲的作用機理上主要是寄生蟲內蛋白質與銅離子相結合，生成蛋白鹽，活性蛋白質逐漸變性、最后喪失活性，寄生蟲繼而死亡。而硫酸亞鐵主要起輔助藥物的作用，通常用來輔助硫酸銅滅殺一些比較難以滅殺的寄生蟲[11]。錦鯉幼魚的硫酸銅與硫酸亞鐵合劑急性中毒的癥狀為魚體加深變黑，粘液增多，瀕死之前，部分魚不斷躍出水面，藥物濃度越高，其外部癥狀越突出，中毒魚在短時間內死亡。在潑灑硫酸銅時，需特別關注水質條件，依據實際需要與條件來適當增減用藥量。如水質較肥，可適當增加用量，反之，則需要適度降低用藥量。隨著水溫的升高，硫酸銅的毒性增加明顯，因此在夏季水溫較高時，禁止在錦鯉幼魚養殖池塘中潑灑硫酸銅，以防錦鯉幼魚中毒死亡。

3.2 甲醛對錦鯉幼魚毒性影響

甲醛具明顯的滅殺病毒、芽孢、寄生蟲和細菌等效果，廣泛應用在水產養殖中，常規用量多在10～30mg·L-1范圍內[12]。錦鯉幼魚甲醛急性中毒表現為：不安亂竄，浮頭，身體側翻失去平衡，最后死亡。

3.3 敵百蟲對錦鯉幼魚的毒性影響

敵百蟲屬于膽堿酯酶抑制劑，通過對膽堿酯酶活性點磷酸化，降低膽堿酯酶活性，使甲殼類、昆蟲類等神經機能停止而死亡[13]。敵百蟲多用于治療養殖魚類體外寄生甲殼類與體內寄生蠕蟲，具低毒、殘留少、殘留時間長等優勢[9]。敵百蟲中毒后錦鯉幼魚的癥狀是：對外界刺激反應明顯減弱，在水中游動時無序翻滾，尾部高頻率擺動。錦鯉幼魚身體出現明顯彎曲，死前基本喪失了平衡力，最后慢慢沉于水底。用藥時，需綜合關注實際條件，分析養殖魚類品種、水溫、溶氧等因素，合理界定藥物濃度；需要觀察養殖魚類的活動狀況。在弱堿性條件下（pH8～10），敵百蟲僅需半小時就可形成殘毒性更大的敵敵畏，因此配藥時不僅需要考慮劑量，還需要在潑灑前測定水體pH，以防人為失誤引起養殖魚類中毒。

3.4 聚維酮碘對錦鯉幼魚的毒性影響

聚維酮碘為廣譜、高效消毒殺菌劑，對病毒、細菌、真菌及霉菌孢子都有較強的滅殺作用，防治水產動物爛鰓、癤瘡、腐皮等細菌性疾病的效果很好[14,15]，可直接使菌體內的蛋白質變性、沉淀，致使病原微生物死亡。有研究報道，水中有機物含量明顯影響碘的效應，有機物濃度增加，碘的殺菌效果呈下降趨勢[16-18]。當前市售的聚維酮碘大多沒有詳細的使用說明。水產養殖作業中通常是憑經驗使用聚維酮碘，沒有明確的水產用安全濃度，有著相當高的不確定性。綜合相關實踐分析，在水產苗種繁育過程中聚維酮碘用量一般控制在2～5mg·L-1范圍內。本試驗得出的錦鯉幼魚的安全濃度大于這一范圍，因此在實際生產中，需綜合考慮水溫、水質、錦鯉幼魚狀態等來界定其用量。聚維酮碘在弱酸性環境中低濃度時穩定性好，所釋放的有效碘濃度增加，殺菌效果更優。溫度是影響聚維酮碘殺菌效果最關鍵的因素之一，當溫度為30～40℃時，聚維酮碘殺菌效果明顯增加。聚維酮碘與金屬離子發生化合反應的概率較大，會影響其正常效用。

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