“以俞調樞”法對Cajal間質細胞缺失模型大鼠胃腸動力學主要指標的影響

陳峭，謝勝，周曉玲，稅典奎，覃婧，侯秋科，顏春艷，劉珊，劉禮劍，覃鳳傳，劉瑩，梁夢月

本文創新點：

（1）本研究初步闡明了“以俞調樞”法可能通過調節血液中腦腸肽來達到促進胃動力的目的，為進一步拓寬該技術的臨床應用提供了科學理論依據。（2）“以俞調樞”法是通過何種途徑調節腦腸肽的變化，仍有待進一步深入研究。

“以俞調樞”法是指以足太陽膀胱經背俞指針療法調理臟腑氣機升降之樞紐的中醫外治療法［1］，該療法能夠明顯改善患者胃腸道動力，對胃食管反流病［2］、功能性消化不良［3］、腸易激綜合征［4］、慢傳輸型便秘［5］等胃腸動力障礙相關性疾病均具有良好的臨床療效。“以俞調樞”法是如何影響胃腸道動力學的改變呢。本研究擬通過觀察“以俞調樞”法干預Cajal間質細胞（ICC）缺失模型大鼠后其胃腸動力學主要指標的變化情況，探索該療法改善胃腸動力學可能的作用機制，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 2016年1—12月，選取清潔級SD大鼠120只，體質量（200±20）g，雌雄各半。SD大鼠由廣西醫科大學動物實驗中心提供（動物許可證號SCXK桂2014-0002），普通飼料適應性喂養2周。

1.2 試劑儀器與主要試劑 抗干細胞因子受體單克隆抗體（Anti-Mouse CD117 Purified）、烏拉坦，胃動素、胃泌素、血管活性腸肽、生長抑素放射免疫藥盒、抑肽酶、乙二胺四乙酸二鈉等（由南京東極生物科技有限公司提供）。

1.3 營養性半固體糊的制備 取羧甲基纖維素鈉10 g溶于蒸餾水250 ml中，加入奶粉16 g、糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，攪拌均勻，配制成約300 g的黑色半固體糊狀物300 ml，冰箱4 ℃冷藏，用時恢復至室溫。

1.4 實驗方法

1.4.1 動物分組及干預方法 將SD大鼠隨機分為造模組60只和空白組60只。造模組再隨機分為模型對照亞組30只和模型治療亞組30只，空白組再隨機分為空白對照亞組30只和空白治療亞組30只。

空白對照亞組，每日固定22 min，不實施背俞指針治療，連續14 d；空白治療亞組，每日固定22 min，并實施背俞指針治療，連續14 d；模型對照亞組，每日固定22 min，不實施背俞指針治療，連續14 d；模型治療亞組，每日固定22 min，并實施背俞指針治療，連續14 d。

1.4.2 造模及給藥

1.4.2.1 ICC缺失模型大鼠的制備 造模組參照JANSSEN等［6］方法制備ICC缺失模型，經腹腔隔天注射抗c-Kit單克隆抗體（ACK2）100 μg，共5次。期間觀察大鼠的精神活動、飲食情況、糞便性質和體質量改變等。同時，根據《實驗針灸學實驗指導》［7］的要求，采用8%硫化鈉溶液對大鼠背部督脈和腹部任脈循行路線進行脫毛處理（寬度2.5～3.5 cm）。

1.4.2.2 取穴和指針方法 選取雙側足太陽膀胱經肺俞、心俞、膈俞、肝俞、脾俞及腎俞（穴位的定位根據中國針灸學會實驗針灸研究會指定的動物針灸穴位圖譜［8］）進行治療：以拇指指腹在每個穴位按照先點按1 min，后按揉2 min的手法操作，3 min/穴，共18 min，實際操作時間約22 min（包含操作過程中大鼠逃避而未能實施操作時間約4 min）。相同穴位按由左至右順序，不同穴位按由下而上順序。推拿手法參數測定儀進行監測，推拿手法參數：刺激量以大鼠無掙扎為度，根據以往經驗，按揉垂直力度3.5～4.5 N，點壓垂直力度5～7 N。操作頻率為120～160次/min，1次/d，療程為2周。

1.5 觀察指標及測定標準

1.5.1 胃內殘留率及小腸推進率的測定 取材前給予大鼠黑色半固體糊狀物10 ml/kg灌胃處理，30 min后用20%烏拉坦10 ml/kg腹腔麻醉。開腹，結扎胃賁門和幽門，取胃，用濾紙吸干后稱全重，然后沿胃大彎剪開胃體，洗去胃內容物后擦干，稱凈重。胃全重與胃凈重之差即為胃內殘留物質量，以胃內殘留物與所灌黑色半固體糊狀物質量的百分比為胃內殘留率。同時迅速取出小腸，輕輕剝離后直鋪于白紙上，測量幽門至回盲腸部全長及幽門至黑色半固體糊狀物前沿的距離。以幽門至黑色半固體糊狀物前沿的距離與幽門至回盲部全長的百分比為小腸推進率。

1.5.2 胃動素、胃泌素、血管活性腸肽和生長抑素的測定將治療前后各組大鼠血漿、血清標本在測定前混勻，4 ℃1 500 r/min離心15 min，離心半徑12 cm，取上清液采用放射免疫分析法按說明書在每個測定管中依次加入不同稀釋濃度的對照品、待測樣品及抗體，4 ℃溫育24～48 h，加入125I標記的相應抗原，繼續4 ℃溫育24～48 h后，每管加免疫沉淀劑0.5～0.6 ml，充分混勻，室溫放置20 min后，4 ℃ 3 500 r/min離心20 min，離心半徑12 cm，吸棄上清液，測定各沉淀管的放射性計數，并分別按胃動素、胃泌素、血管活性腸肽、生長抑素酶聯免疫試劑盒的計算方法求出相應待測血漿、血清樣本的樣本值。

1.6 統計學方法 應用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析。計量資料以（x ±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠胃內殘留率和小腸推進率比較 4組大鼠胃內殘留率和小腸推進率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。模型對照亞組大鼠胃內殘留率高于空白對照亞組，小腸推進率低于空白對照亞組，差異有統計學意義（P＜0.05）；模型治療亞組大鼠胃內殘留率、小腸推進率與空白對照亞組、空白治療亞組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；模型治療亞組大鼠胃內殘留率低于模型對照亞組，小腸推進率高于模型對照亞組，差異有統計學意義（P＜0.05，見表1）。

2.2 各組大鼠胃動素、胃泌素比較 4組大鼠胃動素、胃泌素比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。模型對照亞組大鼠胃動素、胃泌素低于空白對照亞組、模型治療亞組，差異有統計學意義（P＜0.05）；空白對照亞組、空白治療亞組大鼠胃動素、胃泌素與模型治療亞組比較，差異無統計學意義（P＞0.05，見表2）。

2.3 各組大鼠血管活性腸肽、生長抑素比較 4各組大鼠血管活性腸肽、生長抑素比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。模型對照亞組大鼠血管活性腸肽、生長抑素高于空白對照亞組、模型治療亞組大鼠，差異有統計學意義（P＜0.05）；空白對照亞組、空白治療亞組大鼠血管活性腸肽、生長抑素與模型治療亞組比較，差異無統計學意義（P＞0.05，見表3）。

3 討論

胃腸動力障礙主要是指各種病因引起胃腸道平滑肌細胞運動功能發生障礙的病理過程，常見于胃食管反流病、功能性消化不良、腸易激綜合征、慢傳輸型便秘等胃腸動力性疾病，也可見于其他系統疾病如糖尿病胃輕癱、急性重癥胰腺炎及術后炎性腸麻痹等［6］。研究發現，隨著生活節奏的加快、人們精神壓力的加大，胃腸動力障礙相關性疾病的發病率劇增，且造成相當高的醫療費用，已成為現代社會中一個主要的醫療保健問題［9］。臨床中有60%～80%的消化道疾病患者最終被確診為胃腸動力障礙相關性疾病［10］。而當前在發達國家每年平均用于研發促胃腸動力藥物的耗資高達數十億美元，已有甲氧氯普胺、多潘立酮、西沙比利、莫沙比利、格拉司瓊、替加色羅及伊托必利等藥物相繼應用于臨床［11-12］。但臨床使用表明，這些促胃腸動力西藥的療效尚欠理想，并且還存在中樞神經系統、血液循環系統及其他不良反應［12］。而我國目前還沒有開發出理想且具有自主知識產權的胃腸動力藥物。因此，探索一種行之有效的改善胃腸動力的治療方案具有重大的社會意義和經濟學價值。

表1 各組大鼠胃內殘留率和小腸推進率比較（x±s，%）Table 1 Comparison of the incidence of gastric residue and small intestinal motility rate between the 4 subgroups of rats

表2 各組大鼠胃動素、胃泌素比較（x±s，pg/ml）Table 2 Comparison of the mean motilin level and gastrin between the 4 subgroups of rats

表3 各組大鼠血管活性腸肽、生長抑素比較（x±s，pg/ml）Table 3 Comparison of the mean plasma vasoactive peptide level and stmatostatin between the 4 subgroups of rats

“以俞調樞”法治療胃腸動力障礙有巨大的療效優勢，目前該療法已在全國150余家醫療機構推廣應用，于2009年被推薦為國家級適宜技術推廣項目，先后獲得2009年度柳州市科技進步獎一等獎，2010年度廣西醫藥衛生適宜技術推廣獎二等獎，2010年度廣西科技進步三等獎。

背俞穴為臟腑之氣轉輸于背腰部并流注于全身的樞紐區域［13］，與五臟六腑有著直接的聯系，故以指針刺激背俞穴能直接調整臟腑功能的盛衰［14］。而胃腸動力障礙相關性疾病多以胃脘痛、胃痞、反酸、便秘等為主要表現，氣機升降功能失調為其主要病機。肺為氣之主，腎為氣之根，脾胃為氣機升降的樞紐，肝主疏泄、條暢氣機，五臟六腑同氣機的正常運行均密切相關。經絡是氣機升降出入的通路，五臟六腑之氣通過十二經脈相互溝通，共同維系人體氣機正常的運行［15］。而督脈為陽脈之海，任脈為陰脈之海，唯有任督二脈在走行上與十二經脈相互交通，共同參與了十二經脈的全身氣血循行。督升任降，任督二脈的經氣運行調和，環周有序，升降有常，這正是脾胃等臟腑氣機正常運行的基礎［15］。因此，任督二脈經氣升降交通不利可能是導致臟腑氣機升降失衡的根本原因，并最終導致胃腸道平滑肌運動功能的障礙，而“以俞調樞”法能夠通過改善任督二脈經氣的運行，進而起到改善胃腸動力的作用。

現代神經胃腸病學研究也表明，胃腸運動受大腦支配和腸神經系統共同支配調控［16］。在生理情況下，胃腸激素（主要是指腦腸肽）可通過中樞神經系統及胃腸平滑肌細胞系統共同調節胃腸的運動。根據不同腦腸肽成分對胃腸道平滑肌細胞的收縮或舒張效應的不同，可將其分為興奮性腦腸肽和抑制性腦腸肽［17-19］。其中，起興奮作用的主要腦腸肽為胃動素、胃泌素，起抑制作用的主要腦腸肽為生長抑素、血管活性腸肽［20］。本研究表明，ICC缺失模型大鼠可以復制胃腸動力低下的大鼠模型，影響大鼠的胃腸動力，表現為胃內殘留率增加和小腸推進率下降，與相關研究結果一致［21-22］。而“以俞調樞”法能夠使ICC缺失模型大鼠胃內殘留率顯著降低，小腸推進率顯著升高，進一步研究表明，ICC缺失模型大鼠胃動素、胃泌素顯著下降，血管活性腸肽和生長抑素顯著升高，而采用“以俞調樞”法干預后，其胃動素、胃泌素顯著升高，血管活性腸肽和生長抑素顯著降低。因此，可以推論：“以俞調樞”法能夠提供增加胃腸動力低下大鼠血液中的胃動素、胃泌素，同時又可以降低其血液中生長抑素、血管活性腸肽，從而達到改善胃腸動力的作用。

綜上所述，“以俞調樞”法具有顯著改善胃動力的作用，其機制可能是通過調節血液中腦腸肽來達到促胃腸動力的目的，為進一步拓寬該技術的臨床應用提供了科學的理論依據。至于“以俞調樞”法是通過何種途徑調節腦腸肽的變化，仍有待進一步深入研究。

作者貢獻：陳峭進行了文章的構思與設計，撰寫論文；謝勝、稅典奎進行科研技術指導和文章的可行性分析；覃婧、侯秋科、顏春艷、劉珊、劉禮劍進行資料收集與數據整理及統計學分析；覃鳳傳、劉瑩、梁夢月進行動物實驗操作與指標的檢測；周曉玲進行了論文的修訂與英文的修訂及文章的質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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