研究針刺肝俞對大鼠原位肝移植急性排斥反應的影響*

丁利民 鄧麗珊 盧泳

（1江西省人民醫院 南昌 330000；2江西省殘疾文化體育管理中心 南昌 330000）

肝臟移植是解決終末期肝功能衰竭的主要有效手段，1979年環孢素A用于臨床，使器官移植進入了一個新紀元。1987年他克莫司問世，肝移植的生存率又進一步得到提高。然而移植引起的排斥反應仍然是肝移植失敗的主要原因，肝臟移植的急性排斥反應（Acute Rejection，AR）是影響受者存活率的主要因素之一。在中醫學，肝主疏泄、藏血，肝臟移植后排斥反應使肝失疏泄，致肝郁而血無所藏，進而引起體內熱、毒、瘀、濕排泄異常。肝俞屬足太陽膀胱經，為肝之背俞穴，功用疏肝利膽、理氣明目。針刺肝俞可以起到疏肝解郁、和血藏血的效果，使機體達到陰陽平衡，故能緩解肝移植排斥反應。近年來研究表明，針刺能調節機體的細胞與體液免疫功能[1]。本文旨在探討針刺肝俞能否影響大鼠肝移植急性排斥反應，為臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 80只清潔級雄性Wistar大鼠和80只SD大鼠（南昌大學動物科學部提供），體質量230～250 g，飼養溫度20℃，飼以顆粒飼料，自由飲水。華佗牌針無菌針灸針（蘇州醫療用品廠有限公司），無菌手術器械（上海醫療器械有限公司手術機械廠），他克莫司注射液（國藥準字J20150100）。

1.2 實驗方法 建立Wistar-SD大鼠原位肝移植急性排斥模型[2]后再將80只大鼠隨機分為對照組（生理鹽水組）、治療A組（針刺肝俞組）、治療B組（他克莫司組）、治療C組（針刺肝俞+他克莫司組），每組20只。治療A組針刺肝俞穴，1次/d，每次20 min；治療B組給予他克莫司，0.05 mg/（kg·d）灌胃，1次/d；治療C組給予他克莫司[0.05 mg/（kg·d）灌胃，1次/d]和針刺肝俞（1次/d，每次20 min）。大鼠肝俞穴位定位的方法參照實驗針灸學之實驗動物大白鼠實用腧穴簡表（肝俞：第9胸椎下旁開5 mm之兩旁肋間，直刺6 mm）。

1.3 研究指標 （1）觀察大鼠生存率及時間。（2）肝功能指標：肝移植術后第7天各組處死10只大鼠，采下腔靜脈血應用全自動生化分析儀（雅培C8000）測定 TBiL、DBiL、AST、ALT、ALP以及 GGT。

1.4 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件進行統計分析，計量資料以表示，采用t檢驗，計數資料采取χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 四組生存率及生存時間比較 肝移植術后第7天各組處死10只大鼠，各組計算存活期的大鼠數量，分別是對照組5只、治療A組7只、治療B組9只、治療C組9只，肝移植大鼠術后存活時間分別為對照組（7.6±1.14）d、治療 A 組（14.4±2.07）d、治療 B 組（20.1±2.26）d、治療 C 組（29.8±2.49）d。其中治療A、B、C組存活時間較對照組顯著延長（P＜0.01）；而治療B和C組大鼠的存活時間均長于治療A組（P＜0.05）；治療C組大鼠存活時間則長于B組（P＜0.05）。

2.2 四組肝功能指標比較 與對照組相比，治療各組的 TBiL、DBiL、AST、ALT、ALP 及 GGT 均顯著下降（P＜0.05）；與治療A組比較，治療B和C組的肝功能指標也顯著下降（P＜0.05）；與治療B組比較，C組的肝功能各項指標明顯下降（P＜0.05）。見表1。

表1 四組肝移植術后第7天肝功能各項指標比較

表1 四組肝移植術后第7天肝功能各項指標比較

注：與對照組比較，*P＜0.05；與治療A組比較，#P＜0.05；與治療B組比較，&P＜0.05。

分組 n TBiL（μmol/L） DBiL（μmol/L） AST（U/L） ALT（U/L） ALP（U/L） GGT（U/L）對照組治療A組治療B組治療C組10 10 10 10 120.40±55.42 105.39±48.38*98.51±41.12*#77.56±28.85*#&98.30±34.19 85.68±28.87*77.85±21.58*#50.32±9.34*#&1 112.20±162.14 742.47±129.56*459.65±87.13*#243.80±75.43*#&1 002.40±155.31 739.62±144.46*428.36±96.18*#199.56±76.85*#&150.32±54.32 108.34±49.37*95.32±40.14*#70.76±25.31*#&108.48±16.32 76.64±13.76*47.65±9.65*#18.57±7.54*#&

3 討論

器官移植是治療器官終末期病變的有效手段，但移植排斥反應仍然影響著器官移植的成功率[3]。根據移植物排斥反應發生的時間，急性排斥反應可分為早期急性排斥反應（移植3個月內）和遲發型急性排斥反應（移植3個月后）。肝臟移植的急性排斥反應主要原因是受者T淋巴細胞識別移植肝的內抗原，產生針對移植肝組織的免疫炎癥反應，最終破壞移植肝的功能。本文針對免疫反應，選擇針刺具有調整陰陽、疏通經絡功效的肝俞穴位，它可產生雙向調節作用，疏通人體氣血流暢，改善肝組織血液循環，增強肝細胞的代謝，提高機體免疫調節的能力，其中包括清除自由基、穩定鈣通道、抑制炎癥反應、改善微循環障礙、抑制凋亡等。故針刺肝俞能調整臟腑功能，達到疏肝、益氣、排毒等療效，多靶點發揮作用。

目前器官移植術后廣泛使用免疫抑制劑，雖然其預防和治療移植排斥反應的效果良好，但其選擇性和特異性較低，故使機體的免疫系統廣泛受到抑制，常常導致患者免疫低下，甚至發生腫瘤以及造血功能及肝腎功能等損傷[4]，然而針刺調節機體免疫功能屬于機體自身功能性調節，其中包括非特異性免疫應答和特異性免疫應答，以及細胞免疫、體液免疫，且調節呈雙向性，影響范圍涉及到細胞水平至分子水平[5～9]，故可有效地避免免疫抑制劑導致的嚴重副作用[10]。

本研究中單純針刺肝俞穴位治療A組肝移植術后的大鼠，其平均存活時間達（14.4±2.07）d，而對照組為（7.6±1.14）d，兩組比較具有差異性，P＜0.01；且采用他克莫司與針刺肝俞穴位聯合治療的C組，其平均存活時間長達（29.8±2.49）d，明顯延長了大鼠的存活時間，故針刺肝俞穴位可減輕他克莫司的副作用，并且能改善肝移植術后發生AR時肝功能各項指標（TBiL、DBiL、AST、ALT、ALP 及GGT），進而延長術后大鼠的平均存活時間。有研究表明針刺肝俞具有明顯的免疫調節作用，可以抑制免疫反應的發生和發展[11]。

肝移植受者術后需終生服用免疫抑制劑，雖然其可獲得較長的移植物存活時間，但其嚴重并發癥和副作用仍然是難以解決的問題。中醫除藥物治療外，針刺也是值得我們關注和發掘的治療手段，本研究反映了穴位針刺治療能夠部分替代免疫抑制劑的使用，且可減輕免疫抑制劑使用產生的毒副作用。系統地探索傳統中醫藥針刺治療方法，如篩選合適穴位、多穴位聯合刺激、刺激穴位的方法、刺激時間的長短、刺激強度的選擇以及穴位刺激結合中藥治療等都是值得深入研究和發掘的。進一步探討刺激調節免疫的機制也是亟待解決的問題。此外，多種因素影響穴位針刺產生的防衛免疫效應也有待于進一步研究[12]，針刺穴位的特異性及配伍也需要全面更客觀的闡述[13]。本研究樣本量偏少，針刺治療時間窗短，影響有限，應進一步增加樣本量，延長針刺治療時間，觀察遠期影響，針刺肝俞能否在臨床上應用還有待于更深入的研究。

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