血清IL-28A在強直性脊柱炎治療前后的表達及臨床意義

焦大敏，常瓊潔，2，李 萍*

(1.吉林大學中日聯誼醫院 風濕免疫科，吉林 長春130033；2.鄭州人民醫院 風濕免疫科，河南 鄭州450053)

強直性脊柱炎(AS)是一種長期慢性炎性刺激引起的脊柱進行性關節炎。炎癥及炎癥因子反應可導致脊柱活動受限及骨骼結構的損傷[1]。白介素-28A(interleukin-28A，IL-28A)屬于Ⅲ型干擾素，通過激活細胞信號通路發揮抗病毒、抗增殖、抗腫瘤和免疫調節作用[2-4]。近年研究表明，Ⅲ型干擾素與諸多風濕性疾病[系統性紅斑狼瘡(SLE)、系統性硬化癥(SSc)和類風濕關節炎(RA)]的發病有一定的相關性[5-7]，但是IL-28A是否參與了AS的發病機制目前尚不清楚。本研究通過檢測AS患者血清IL-28A的表達水平及其與疾病活動指標的相關性，探討IL-28A在AS治療前后的變化及意義，為進一步深入了解AS發病機制、開發AS治療有效藥物提供依據。

1 對象與方法

1.1研究對象

本研究收集了2015年9月至2016年9月期間在吉林大學中日聯誼醫院風濕免疫科住院的AS患者40例，年齡21-42歲，中位數為26歲，其中男性37例，女性3例，病程6個月-8年。所有入組AS患者均符合1984年修訂的AS紐約標準[8]，排除感染、糖尿病、心力衰竭、腎功能衰竭、肝炎、肝衰竭、惡性疾病以及其他活動性炎性疾病(例如RA、克羅恩病、SLE、SSc)，入組前1個月內未使用改善病情抗風濕藥物(DMARDs)、糖皮質激素等可影響免疫系統的藥物，并且入組前均處于疾病活動期，即Bath AS疾病活動指數(BASDAI)≥4[9]或使用C-反應蛋白(CRP)的AS疾病活動評分(ASDAS-CRP)≥2.1[10]。所有患者均給予1種DMARDs(包括傳統DMARDs或生物DMARDs)聯合1種非甾體類抗炎藥物(NSAIDs)(包括塞來昔布，雙氯芬酸和依托考昔)治療，共隨訪6個月。在治療前和治療1、3和6個月后分別進行疾病活動指標采集。同時選取本院同期體檢中心40例年齡和性別匹配的健康志愿者作為健康對照組(HC)，年齡22-44歲，平均(24.8±5.7)歲，其中男性37例，女性3例。此項研究獲得吉林大學中日聯合醫院倫理委員會批準，所有受試者均簽署了知情同意書。

1.2實驗室檢查

所有受試者于開始治療前、治療后1、3和6個月4個時間點分別采集空腹血，CRP采用乳膠增強免疫比濁法測定， 紅細胞沉降率(ESR)采用魏氏法測定。低溫離心后得到的血清存于-80℃冰箱待檢，通過購買的IL-28A(GenWay Biotech，Inc，GWB-SKR146)酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測試劑盒按說明進行AS患者血清IL-28A測定。

1.3疾病活動度評分

BASDAI：由5個項目的平均分組成：A疲乏、B脊柱痛、C關節痛、D肌腱端炎、E脊柱炎癥=0.5×(晨僵程度+晨僵時間)，每個項目得分為患者近一周疾病活動的總體情況的自我評價的VAS(0-10)評分。BASDAI=0.2×(A+B+C+D+E)[9]。

ASDAS-CRP=0.122×腰背痛+0.061×晨僵持續時間+0.119×患者的總體評價+0.210×血沉的平方根+0.383×(C反應蛋白+1)的自然對數[10]。

1.4統計學方法

2 結果

2.1HC和AS患者治療前后疾病活動指標和血清IL-28A水平

如表1所示，AS患者治療前和治療后血清IL-28A水平顯著高于HC(P<0.01),且治療后血清IL-28A明顯高于治療前(P<0.01)。比較治療后1個月和3個月、1個月與6個月、3個月與6個月的結果發現， 血清IL-28A水平在治療后3個時間點間無顯著性差異(P>0.05)，表明AS患者血清IL-28A水平在治療后1個月已達穩定。同時還發現AS患者ESR、CRP在治療1個月后顯著下降(P<0.01)，之后趨于穩定，ASDAS-CRP在治療1、3個月時持續下降，6個月時趨于穩定，而BASDAI在6個月治療期間持續下降。

表1 HC和AS患者治療前后疾病活動指標和血清IL-28A水平

注：^^P<0.01，與HC比較；**P<0.01，與AS治療前比較；##P<0.01，與AS治療后1個月比較；&&P<0.01，與AS治療后3個月比較

2.2AS患者血清IL-28A水平與疾病活動指標的相關性

如表2所示， 治療前AS患者血清IL-28A水平與疾病活動指標之間無相關性(P>0.05)。治療后1個月和治療后6個月時IL-28A與ESR呈負相關(P<0.05)；治療后3個月，IL-28A與BASDAI呈負相關(P<0.05)。如圖1所示，AS患者治療后明顯升高的IL-28A水平與疾病活動度評分明顯降低的趨勢相反，提示血清IL-28A水平與AS疾病活動指標之間有一定的關聯。

表2 治療各階段AS患者血清IL-28A的水平與疾病活動指標的相關性

注：“*”表示P<0.05

**P<0.01，AS患者治療后與治療前的比較圖1 治療后血清IL-28A及BASDAI、ASDAS-CRP的變化

如表3所示，AS患者治療后的3個階段IL-28A水平變化(ΔIL-28A)和疾病活動指標變化(Δ疾病活動指標)之間沒有顯著的相關性(P>0.05)。

表3 治療各階段AS患者血清IL-28A的變化與疾病活動指標的變化的相關性

3 討論

目前的研究發現IL-28A具有抗病毒、抗增殖、抗腫瘤、免疫調節的重要作用[2-4]。然而，IL-28A在自身免疫性疾病和慢性炎癥性疾病中的作用尚不完全清楚。最近的研究發現，血清IL-28表達水平降低與過敏性哮喘的嚴重程度和病情惡化之間存在強烈的聯系，而在哮喘模型鼠的研究中發現IL-28A可以調節肺樹突狀細胞的功能，促進體內Th1細胞分化，抑制氣道中Th2細胞介導的反應，抑制過敏性氣道疾病[11]。有研究表明貝赫切特病(Behcet's disease，BD)患者外周血單個核細胞對IL-28A敏感性增加，促進了Th1細胞反應，這一過程參與BD的發生發展[12]；在SLE患者血清及活化的CD4+T細胞中發現IL-28水平較正常人明顯升高，這種表達的失調提示IL-28可能參與SLE的發病機制[13]。本研究發現活動期AS患者血清IL-28A水平顯著高于HC，這個結果與Diana Castillo-Marti'nez等在RA領域的研究結果相似，他們的研究發現活動期RA患者血清IL-28A的水平顯著高于HC[14]。本研究結果表明IL-28A在AS患者中的表達失調，提示其可能參與了AS的發病機制。

本研究監測了6個月治療期間不同時間點的疾病活動指標變化，并探究他們與患者血清IL-28A水平的關系。雖然沒有發現治療前IL-28A與疾病活動指標存在相關性的直接證據，但是本研究發現，治療后患者疾病活動指標明顯降低，而治療后AS患者血清中IL-28A水平顯著高于治療前，且治療后1個月和治療后6個月IL-28A與ESR呈負相關，治療后3個月IL-28A與BASDAI呈負相關，說明IL-28A與AS的疾病活動存在有一定的關聯。AS的發病機制與RA相似，都是由于炎癥破壞了正常的骨穩態，導致骨吸收和形成的失衡[15]。最近的研究發現，用IL-28A治療膠原誘導的關節炎(collagen-induced arthritis，CIA)小鼠，可通過抑制中性粒細胞IL-1β產生和中性粒細胞遷移來逆轉CIA小鼠疾病嚴重程度和關節損傷,并且證明IL-28A治療顯著減少了關節和腹股溝淋巴結Th17和γδT細胞IL- 17的產生，提示IL-28A具有抗炎作用[16]。這些發現與本研究在AS患者治療后血清IL-28A的水平較治療前明顯上升和治療過程中始終高于健康對照的結果相一致，提示IL-28A可能在降低疾病活動和抗炎保護機體方面發揮了重要作用。本研究結果未發現治療前IL-28A與疾病活動指標之間有任何顯著的相關性，這可能是與本研究隨訪期短、樣本量小、納入標準嚴格以及缺乏其他對照(如非活動性AS患者和其他藥物治療組作為對照)等因素有關，有待進一步的實驗去驗證。

4 結論

本研究首次確定了活動期AS患者血清IL-28A表達水平，發現IL-28A可能參與了AS的發病機制，可能為AS的治療提供新的靶點。

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