NRF2 啟動子區-617G/T多態性與膠質瘤易感性的關聯

王春輝，胡國忠，劉 穎，谷潔冰，唐 棟，李松濤*

(1.吉林省人民醫院 神經外科,吉林 長春130021；2.吉林大學中日聯誼醫院 a藥劑科;b神經內一科)

膠質瘤是我國最常見的神經上皮細胞腫瘤[1]。由于呈浸潤性生長，與正常腦組織無明顯界限，難以完全切除，因此極易復發，預后較差。膠質瘤的發病與多種因素有關，包括環境暴露和遺傳因素[2,3]。人類核因子E2相關因子2(NRF2)是一類重要的轉錄因子，通過與抗氧化反應元件(ARE)結合，不僅具有細胞解毒、抗炎和抗氧化作用，而且在化學藥物預防腫瘤中起著正反兩方面調控作用。膠質瘤中NRF2呈差異性表達[4,5]，NRF2啟動子區-617bp的單核苷酸多態性(SNP)rs6721961T等位基因與NRF2蛋白低表達有關[6]。查閱文獻，未見該SNP位點rs6721961與膠質瘤相關性的研究報道。本研究運用病例-對照研究探討rs6721961多態性與我國東北地區膠質瘤的關系，以期為膠質瘤的個體化治療提供依據。

1 材料與方法

1.1研究對象

研究對象分為兩組：膠質瘤組和正常對照組。樣本分別來源于我院神經外科和健康體檢中心，相同時期收集，均為漢族個體。

膠質瘤組：經臨床病理確診為膠質瘤患者共156例，平均年齡45.8±16.0歲，中位年齡46歲，其中男性90例，女性66例。星形細胞瘤和多形性膠質母細胞瘤各59例，室管膜瘤19例，混合性膠質瘤7例，中樞細胞瘤6例，少突膠質細胞瘤6例。按照1997年世界衛生組織中樞神經系統腫瘤分級標準：Ⅰ-Ⅱ級89例，Ⅲ-Ⅳ級67例。

正常對照組：經我院體檢中心體檢健康樣本共185例，平均年齡44.5±12.5歲，中位年齡44歲，其中男性100例，女性85例。正常對照組和膠質瘤組年齡和性別分布差異無統計學意義。正常對照組無神經系統和心血管系統疾病，否認腫瘤家族史。

1.2NRF2rs6721961基因分型

采集外周靜脈血2 ml，置于乙二胺四乙酸二鈉抗凝管中。DNA 提取試劑盒(天根生物技術有限公司，北京)提取DNA，按照說明書操作。運用Taqman基因分型技術對NRF2 rs6721961進行分型。PCR反應總體積10.0 μl，含2 × 通用PCR Master mix 5.0 μl，探針0.5 μl，DNA模板20 ng，無菌去離子水補足體積10.0 μl。7500 Fast實時熒光定量PCR 儀、2 ×通用PCR Master mix 和探針均購自美國ABI 公司。PCR 反應條件：95.0 ℃ 10 min，95.0 ℃ 15 s,60.0 ℃ 1 min，40 個循環。

1.3統計學處理

運用SPSS13.0軟件進行統計處理。采用t檢驗比較膠質瘤組和對照組年齡差異，采用χ2檢驗分析Hardy-Weinberg平衡、兩組間性別差異及NRF2 rs6721961基因型分布，并計算優勢比(OR)和95%可信區間(CI)以評價腦膠質瘤的發病風險。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

兩組樣本NRF2 rs6721961基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡定律(膠質瘤組：χ2=0.004，P=0.95；對照組：χ2=2.26，P=0.13)。病例組和對照組中均檢測到三種NRF2 rs6721961基因型：GG、GT和TT。這三種基因型在對照組中的頻率分別為48.6%、45.4%和5.9%，而在膠質瘤組中分別為39.7%、46.8%和13.5%。經卡方檢驗，攜帶TT基因型者患膠質瘤的風險是攜帶GG基因型者的2.77倍(χ2=6.59，P=0.01)。G和T等位基因在對照組中頻率分別為71.4%和28.6%，而在膠質瘤組中的頻率分別為63.1%和36.9%，經卡方檢驗，攜帶T等位基因者患膠質瘤的風險是攜帶G等位基因者的1.45倍(χ2=5.21，P=0.02)(表1)。根據性別、年齡和病理分級進行分層分析，結果顯示，以上因素與NRF2 rs6721961多態性無關聯(表2)。

表1 NRF2 rs6721961多態性與膠質瘤的相關性 [n(%)]

表2 NRF2 rs6721961多態性與膠質瘤臨床特征的相關性 [n(%)]

3 討論

核因子NRF2是一種重要的抗氧化轉錄調節因子，在包括膠質瘤的多種腫瘤中差異性表達[4,5]，通過多條信號通路參與腫瘤細胞增殖、侵襲、遷移和對多種化療藥物耐藥[7-9]。

NRF2位于人類第2號染色體長臂3區1帶，由NFE2L2編碼。2007年，Marzec等[10]分析了NRF2啟動子區的SNP功能，發現轉錄起始位點上游-617bp的rs6721961多態性影響了NRF2的表達，減弱了ARE介導的基因轉錄。由于rs6721961是一個功能性多態位點，因此，多項遺傳易感性研究調查了其與多種腫瘤的相關性。Okano等[11]報道攜帶rs6721961TT基因型的日本非吸煙女性人群更容易患肺腺癌，并且具有更長的生存期。Hartikainen等[6]報道攜帶rs6721961 TT基因型的芬蘭人群患乳腺癌的風險增加了4.656倍。本研究運用病例-對照研究調查了rs6721961多態性與膠質瘤的相關性，發現攜帶TT基因型的我國東北人群患膠質瘤的風險增加了2.77倍。推測可能機制是rs6721961T等位基因減弱了NRF2與DNA結合蛋白的親和力，降低了NRF2的轉錄，致使NRF2表達下降，促進膠質瘤的發生。然而，Reszka等[12]則報道rs6721961多態性與波蘭人群膀胱癌的發病無關。造成以上不一致結果的可能原因是：其一、不同類型腫瘤可能存在不同的易感基因；其二、不同種族rs6721961 GG基因型分布不同，在波蘭正常人群中的頻率為77.5%[12]，而在本研究人群中的頻率為48.6%。其三、腫瘤是多因素共同作用的結果，入選樣本的抽樣誤差及不同環境暴露均可導致不一致的結果。因此，有必要開展不同種族的遺傳多態性研究，深入探討rs6721961多態性及基因-環境交互作用與不同種族膠質瘤的相關性，為膠質瘤的易感基因篩選及個體化治療提供理論依據。

總之，本研究初步發現，NRF2啟動子區rs6721961多態性是我國東北地區膠質瘤的易感因素。然而，其與膠質瘤進展、復發、預后的預測價值及確切的調控機制有待進一步研究。

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