T—SPOT.TB在涂陰肺結核早期診斷中的價值研究

張雨萌　李海寧　陳偉

[摘要] 目的 觀察結核感染T細胞斑點試驗（T cell spot test of tuberculosis infection，T-SPOT.TB）對涂陰肺結核早期的診斷價值。 方法 隨機選取我院2015年4月～2017年10月收治的60例涂陰肺結核病患者以及140例非結核健康者為本次實驗研究對象，實驗對象均行結核菌素純蛋白衍生物（Purified Protein Derivative of Tuberculin，PPD）試驗檢測、T-SPOT.TB檢測和結核抗體（Tuberculosis Antibody，TB-AB）測試，比較三種檢測方式對肺結核的臨床檢出效果。 結果 60例涂陰肺結核病患者T-SPOT.TB敏感性為96.7%，T-SPOT.TB檢測敏感性明顯優于TB-AB、PPD，140例非結核健康者T-SPOT.TB特異性為97.9%，T-SPOT.TB檢測特異性明顯優于TB-AB、PPD，差異具有統計學意義（P<0.05）。 結論 T-SPOT.TB診斷涂陰肺結核的敏感性、準確性和特異性均較高，具有較高的臨床應用價值。

[關鍵詞] PPD；T-SPOT.TB；涂陰肺結核；早期診斷價值

[中圖分類號] R521 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）04-0105-03

[Abstract] Objective To investigate the value of the T cell spot test of tuberculosis infection（T-SPOT.TB） in the early diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis. Methods 60 cases of smear negative pulmonary tuberculosis and 140 non tuberculosis healthy persons were randomly selected from April 2015 to October 2017 in our hospital， the experimental subjects were tested by Purified Protein Derivative of Tuberculin（PPD） test， T-SPOT.TB detection and Tuberculosis Antibody（TB-AB） detection. The clinical detection of these three detection methods for pulmonary tuberculosis was compared. Results The sensitivity of T-SPOT.TB detection in 60 cases of smear negative pulmonary tuberculosis was 96.7%， which was significantly better than that of TB-AB and PPD test， the specificity of T-SPOT.TB detection in 140 non tuberculosis healthy subjects was 97.9%， which was significantly better than that of TB-AB and PPD， and the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion The T-SPOT.TB test has high sensitivity， accuracy and specificity in diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis， and has a high clinical value.

[Key words] PPD； T-SPOT.TB； Smear negative pulmonary tuberculosis； Early diagnosis

肺結核臨床治療的關鍵為早發現、早隔離、早治療，因此如何有效提高結核病臨床檢出率對提高肺結核疾病控制率具有重要的意義[1，2]。近些年結核病實驗診斷研究認為結核桿菌屬于胞內致病菌，機體感染結核桿菌后巨噬細胞可致使個體T淋巴細胞發生致敏反應，促使機體分泌大量淋巴因子，從而殺死結核桿菌，人體對于T淋巴細胞介導的遲發型超敏反應具有記憶作用，可致機體早期分泌靶向抗原-6kD（Early Secreting Antigentarget-6，ESAT-6）及培養濾過蛋白-10 kD（Culturefiltrate Protein-10，CFP-10）分泌γ干擾素（γ-immunifinterferon，γ-INF），從而進行T淋巴細胞介導的細胞免疫。T-SPOT.TB主要是通過定量檢測全血中結核特異性抗原ESAT-6以及CFP-10作用下釋放γ-INF的T淋巴細胞數目，從而判定個體是否為結核病[3-6]。本次研究對我院2015年4月～2017年10月收治的60例涂陰肺結核病患者以及140例非結核健康個體均給予PPD、T-SPOT.TB、TB-AB測試，探討T-SPOT.TB在涂陰肺結核早期診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2015年4月～2017年10月收治的60例涂陰肺結核病患者，患者年齡18～60歲，平均（41.2±1.2）歲。并選擇同期140例非結核健康個體，患者年齡25～40歲，平均（32.2±1.1）歲。

1.2 納入標準

我院2015年4月～2017年10月收治的60例涂陰肺結核病患者均符合2002年《臨床診療指南結核病分期》中關于涂陰肺結核病的臨床診斷標準，患者均出現長期低熱、反復咳嗽、咳痰、盜汗、身體消瘦等臨床癥狀，痰涂片抗酸染色3次均為陰性，痰培養陽性，胸部X線片或胸部CT顯示肺部有陰影，所有患者均既往接受系統抗結核治療，治療有效，年齡18～60歲。140例非結核健康個體均為我院進行常規體檢健康個體，年齡25～40歲的健康者，均既往接受卡介苗接種。本次研究實驗對象均源自我院（沈陽市胸科醫院）門診及住院患者，病源充足，本次研究經醫院倫理會以及患者家屬同意，所有參與本次研究患者均簽署相關知情協議。

1.3方法

我院2015年4月～2017年10月收治的60例涂陰肺結核病患者以及140例非結核健康個體均給予PPD、T-SPOT.TB、TB-AB測試，

1.3.1 PPD檢測 PPD注射至個體前臂，觀察72 h反應，若個體患者在72 h內局部出現紅腫硬結為陽性反應，若未出現紅腫硬結為陰性反應。

1.3.2 T-SPOT.TB檢測 本次實驗采用英國Oxford Immunotec 公司生產的T-SPOT.TB結核感染 T 細胞檢測試劑盒，以特異性抗原為刺激源，應用酶聯免疫斑點技術（enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT）診斷結核感染，采集本次實驗研究對象外周靜脈血5 mL，按照試劑盒說明進行操作，提取個體患者單個核細胞，將其加入結核特異性抗原刺激，培養顯色后在顯微鏡下計數斑點數（即γ-INF的T淋巴細胞單個核細胞數），陽性診斷標準：空白對照孔斑點數在0～5個時且（抗原A或抗原B斑點數-空白對照孔斑點數）≥6個，空白對照孔斑點數6～10個時且（抗原A或抗原B斑點數）≥2倍空白對照孔斑點數。若上述標準不符合且陽性質控對照孔正常時檢測結果為陰性。

1.3.3 TB-AB檢測 采集本次實驗研究對象外周靜脈血5 mL，離心后取血清按照TB-AB試劑盒說明進行操作，以吸光度OD值為縱坐標（Y），TB-AB標準品濃度為橫坐標（X），作曲線從而根據OD值標準曲線判讀樣品TB-AB濃度。檢測值范圍為0～8.0 IU/mL，敏感度為0.01 IU/mL。

1.4觀察指標

觀察比較60例涂陰肺結核病患者PPD、T-SPOT.TB、TB-AB測試敏感性及漏診率，敏感性=真陽性例數/（真陽性例數+假陽性例數），漏診率=假陽性/（真陽性例數+假陽性例數）。觀察比較140例非結核健康個體PPD、T-SPOT.TB、TB-AB檢測特異性及誤診率，特異性=真陰性例數/（真陰性例數+假陰性例數），誤診率=假陰性/（真陰性例數+假陰性例數）。

1.5 統計學處理

所有數據錄入計算機，利用SPSS19.0統計軟件處理數據。計數資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三種檢測方式對涂陰肺結核病的檢出情況比較

觀察比較60例涂陰肺結核病患者PPD、T-SPOT.TB、TB-AB測試敏感性以及漏診率，具體情況見表1，T-SPOT.TB檢測敏感性為96.7%，明顯優于TB-AB、PPD。T-SPOT.TB檢測漏診率為3.3%，明顯低于TB-AB、PPD。

2.2 三種檢測方式對非結核健康者的檢出情況比較

觀察比較140例非結核健康者PPD、T-SPOT.TB、TB-AB檢測特異性和誤診率，具體情況見表2，T-SPOT.TB特異性為97.9%，均明顯優于TB-AB、PPD。T-SPOT.TB誤診率為2.1%，明顯低于TB-AB、PPD。

3討論

世界衛生組織WHO調查研究顯示2013年全球約有九百萬個體死于結核病，結核病的發生是由于個體感染結核桿菌，從而導致個體患者出現咳嗽、咯血、盜汗高熱等臨床癥狀的慢性傳染性疾病[7，8]。結核病臨床治療需明確結核病類型以及病灶發展階段，早期病變及時給予藥物治療臨床治療效果好，晚期結核病個體患者在接受藥物長期大劑量聯合用藥控制結核病的同時，藥物毒性強，因此對于結核病個體患者快速檢測對其病情控制具有重要的意義[9，10]。目前我國結核病臨床診斷最常用的方法為痰涂片診斷方法，痰涂片可在數小時內快速診斷結核病，但近些年臨床研究發現肺外結核和涂陰肺結核耗時長，且不易通過細菌學確診，部分結核病患者痰菌涂片為陰性，在涂片中未能有效檢出結核桿菌，因此尋找一種更適合涂陰肺結核病個體的檢驗方法就顯得十分重要[11，12]。培養為肺結核國內外公認的金標準，培養與涂片相比可在一定程度上提高結核病陽性檢出率，但由于結核分枝桿菌生長緩慢，需液體快速培養1～2周方可得到肺結核陽性結果，其檢出速度慢，不符合臨床快速診斷的需求。

T-SPOT.TB即結核感染T細胞斑點試驗是以特異性抗原為刺激源，應用酶聯免疫斑點技術診斷結核感染的新方法[13]。因其高度的敏感性及特異性，在結核診斷方法存在諸多缺陷的今天，越來越廣泛地應用于臨床。作為一個新的診斷結核感染的免疫學方法，T-SPOT.TB檢測不受環境分枝桿菌感染以及卡介苗（BCG）接種影響，且基本不受個體患者機體免疫抑制的影響，對于HIV感染患者以及免疫抑制個體仍適用，實驗操作簡單，通過簡單的實驗室血液檢查，在24 h內即可得到準確的報告結果，由此可以看出，T-SPOT.TB檢測所需時間短，靈敏性及特異性高，不受卡介苗接種影響，臨床應用廣泛，可用于活動性肺結核、潛伏性結核、免疫抑制患者合并結核診斷。基于結核抗原特異性T細胞向病變部位集中的特點，T-SPOT.TB技術的檢測物已不僅局限于靜脈血、支氣管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、腦脊液等，也可用于對肺內及肺外結核的診斷。余亞麗等[14]臨床研究顯示對于結核病患者給予T-SPOT.TB可將個體陽性檢出率提高至90%以上。本次研究在既往臨床研究的基礎上，選取60例涂陰肺結核病患者以及140例非結核健康者為研究對象，均給予T-SPOT.TB檢測、TB-AB檢測以及PPD檢測，極大程度地提高涂陰肺結核病患者T-SPOT.TB研究敏感性及特異性[14，15]。本次實驗顯示60例涂陰肺結核病患者T-SPOT.TB敏感性為96.7%，非結核健康者T-SPOT.TB檢測特異性為97.9%，明顯優于TB-AB、PPD。

綜上所述，T-SPOT.TB診斷涂陰肺結核的敏感性、特異性較高，可降低結核病臨床診斷誤診、漏診的發生，具有較高的臨床應用價值，在現有結核診斷方法存在諸多缺陷的當下，積極開展T-SPOT.TB檢測對提高結核病檢出率和鑒別診斷水平具有重要意義。

[參考文獻]

[1] 葉秋月，許文兵，劉曉清，等. T-SPOT.TB在肺結節病與肺結核鑒別診斷中的應用價值[J]. 基礎醫學與臨床，2014，34（4）：527-530.

[2] 劉佳慶，張麗霞，秦中華，等. Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB對涂陰肺結核診斷價值的評估[J]. 臨床檢驗雜志，2016，34（10）：755-757.

[3] 施瑞潔，劉文康，范云，等. T-SPOT.TB在肺結核早期診斷中的應用研究[J]. 現代檢驗醫學雜志，2017，32（29）：60-63.

[4] 杜巖青，張立，馮爽，等. 探討T-SPOT.TB、CA125、TB-Ab在痰菌陰性肺結核診斷中的價值[J]. 中國現代醫生，2014，52（32）：43-45.

[5] 王宇，潘燕妮，梁道斌，等. T-SPOT.TB在艾滋病合并肺結核診斷中的臨床應用價值[J]. 中外醫療，2017，36（16）：32-34.

[6] 黃麗美，林健雄，彭東東，等. T-SPOT.TB在涂陰肺結核中的快速診斷價值[J]. 國際檢驗醫學雜志，2015，13（14）：1975-1976.

[7] 顧國林，周芬，郭健，等. T-SPOT.TB試驗診斷菌陽及菌陰肺結核的價值[J]. 實用醫學雜志，2015，6（9）：1535-1537.

[8] 蘇斌. T-SPOT.TB在艾滋病并肺結核診斷中的價值分析[J]. 醫學檢驗與臨床，2015，26（3）：9-10.

[9] 張兵，陸彩虹，施美新，等. 血清ADA水平和T-spot.TB聯合檢測在肺結核診斷中的應用[J]. 中外醫療，2017， 36（44）：38-40.

[10] 程利. T-SPOT.TB檢驗在活動性肺結核患者中的臨床意義[J]. 中國醫藥科學，2016，10（12）：220-222.

[11] 鄭冬梅. 外周血T-SPOT.TB對菌陰肺結核的診斷價值[J].醫學信息，2015，13（21）：395.

[12] 張雨相，熊將軍. T-SPOT.TB、痰涂片和TB-DNA在檢測肺結核診斷中的比較研究[J]. 當代醫學，2015，23（28）：55-56.

[13] 王慧，傅滿姣. T-SPOT.TB在兒童肺結核與兒童肺炎鑒別診斷中的應用價值[J]. 中國醫師雜志，2016，18（6）：941-942.

[14] 余亞麗，劉紅. T-SPOT.TB在肺結核診斷中的應用價值[J]. 中國實用醫刊，2015，42（7）：123-125.

[15] 吳玲芳，尉理梁，陶學芳，等. 對氨基水楊酸異煙肼與異煙肼對復治性肺結核結核感染T細胞斑點試驗結果的影響[J]. 中國現代醫生，2015，53（23）：78-81.

（收稿日期：2017-11-27）