12%甲維·茚蟲威水乳劑高效液相色譜分析

王騰達，馬　超，張力卜，李佳浩，段小莉，王佰濤，徐　軍，陳　昶

（中國農業科學院 植物保護研究所，北京中保綠農科技集團有限公司，北京　100193）

1984年，美國Merk公司對阿維菌素的4"-(α-1-齊墩果糖基)-α-1-齊墩果糖上的羥基進行了衍生化處理，得到了甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（emamectin benzoate）[1]。經實驗發現其具有較好的殺蟲和殺螨活性，遂作為一種新型高效抗生素類殺蟲殺螨劑加以利用。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽，簡稱甲維鹽，以發酵產品阿維菌素B1為原料合成而得，含有B1a和B1b組分，通常B1a組分質量分數大于90%。

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽對鱗翅目害蟲幼蟲和螨類的活性極高，具有胃毒和觸殺作用。其通過增強抑制神經遞質（如谷氨酸鹽和氨基丁酸）的作用，使大量氯離子進入神經細胞，影響細胞功能，擾亂正常神經傳導，使昆蟲癱瘓死亡[2]。

茚蟲威（indoxacarb）是由美國杜邦公司在1992年開發，并于2001年登記上市的二嗪類殺蟲劑[3]。

茚蟲威的作用機制與目前各類殺蟲劑作用機制均有差異，通過阻斷鈉通道，從而導致昆蟲運動失調、停止取食、麻痹并死亡。茚蟲威具有殺幼蟲和殺卵作用，對各齡期的幼蟲都有效，具有胃毒和觸殺作用。

茚蟲威有1個手性中心，存在S型和R型2種異構體，其中僅S型異構體有殺蟲活性，但開發的產品多為R、S型混合外消旋體[4]。

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威復配，可以減緩害蟲、害螨的抗藥性發展速度，另外，茚蟲威起效慢、持效期長的特點可以和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽起效迅速、持效期短的特點形成互補，提高了防治效果[5]。

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威單劑的分析方法國內已有報道[4,6]，但兩者復配制劑的高效液相色譜分析方法尚未見報道。本方法采用梯度洗脫，同時檢測12%甲維·茚蟲威水乳劑中2種有效成分的質量分數。方法較為快速、簡便，相對于等度洗脫，縮短了出峰時間，節約了成本。

1　實驗部分

1.1　有效成分質量分數測定方法

1.1.1試劑和溶液

甲醇（色譜純）；氨水（分析純），北京試劑廠提供；水（新蒸2次蒸餾水）；甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽標樣（≥99.0%）、茚蟲威標樣（≥98.0%），中國農業大學理學院提供；12%甲維·茚蟲威水乳劑（2%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽＋10%茚蟲威），北京中保綠農科技集團有限公司生產。

1.1.2儀器

Waters E2695高效液相色譜儀；Waters 2489 UV/Visible檢測器；島津UV-1800紫外分光光度計；Waters Sunfire不銹鋼色譜柱（150 mm×4.6 mm），內裝C18填充物，粒徑5μm；過濾器，濾膜孔徑為0.45μm。1.1.3色譜操作條件

流動相A：甲醇；流動相B：0.08%氨水溶液（質量分數）。

梯度洗脫：0～6 min，80%A＋20%B（體積分數，下同）；6～8 min，80%A→92%A；8～11 min，92%A；11～13 min，92%A→80%A。流速：1.0 mL/min；進樣量：5 μL；檢測波長：240 nm；柱溫：25℃。保留時間：茚蟲威約5.4 min；甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽B1b約10.1 min，B1a約10.9 min，色譜圖見圖1、圖2。

圖1　標樣色譜圖

圖2　甲維·茚蟲威水乳劑色譜圖

1.1.4溶液配制

稱取甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽標樣約0.025 g（精確至0.000 2 g）、茚蟲威標樣0.125 g（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲15 min至標樣完全溶解，用甲醇稀釋至刻度，混勻制得標樣溶液。

稱取約含甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽0.025 g、茚蟲威0.125 g的試樣，置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲15 min至樣品完全溶解，用甲醇稀釋至刻度，混勻制得試樣溶液。

1.1.5測定

在1.1.3所述的色譜條件下，平衡色譜柱，待檢測器基線穩定后，連續進數針標樣溶液，計算各針相對響應值。待相鄰2針響應值變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.1.6計算

試樣中的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）質量分數w1（%）按式（1）進行計算。

式中：A1—標樣溶液中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）色譜峰面積的平均值；A2—試樣溶液中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）色譜峰面積的平均值；m1—甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）標樣的質量（g）；m2—試樣的質量（g）；P—標樣中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（或茚蟲威）的質量分數（%）。

1.2　S-茚蟲威的測定

1.2.1試劑和溶液

正己烷、異丙醇、乙醇（色譜純）；水（新蒸2次蒸餾水）；S-茚蟲威標樣（≥81.0%），中國農業大學理學院提供。

1.2.2儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀，具可變波長紫外檢測器；Agilent色譜工作站；色譜柱：不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm），內裝CHIRALCEL OD-H填充物，粒徑5 μm。

1.2.3色譜操作條件

檢測波長：285 nm；流動相：V（異丙醇）∶V（乙醇）∶V（正己烷）=30∶10∶60；流速：0.8 mL/min；進樣量：20 μL；柱溫：25℃。保留時間：R-茚蟲威約8.4 min，S-茚蟲威約10.9 min。典型色譜圖見圖3、圖4。

圖3　S-茚蟲威標樣液相色譜圖

圖4　試樣液相色譜圖

1.2.4溶液的配制

稱取S-茚蟲威標樣約0.010 g（精確至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，先用適量乙醇溶解，再用流動相稀釋至刻度，混勻制得標樣溶液。

稱取約含S-茚蟲威0.010 g的試樣于50 mL容量瓶中，先用乙醇溶解，再用流動相稀釋至刻度，混勻制得試樣溶液。

1.2.5測定

在1.2.3色譜條件下，平衡色譜柱，待檢測器的基線穩定后，連續進數針標樣溶液，計算各針相對響應值。待相鄰2針響應值變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

1.2.6計算

試樣中S-茚蟲威的比例K，按式（2）計算。

式中：AS—試樣溶液中S-茚蟲威峰面積的平均值；AR—試樣溶液中R-茚蟲威峰面積的平均值。

試樣中S-茚蟲威質量分數w2（%）按式（3）計算。

2　結果分析與討論

2.1　檢測波長的選擇

對甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威標樣溶液分別進行紫外掃描，獲得二者的紫外光譜圖（圖5）。在240 nm波長條件下，2種有效成分均有較強吸收，且雜質響應值小，流動相無吸收。因此，綜合考慮多種因素，最終選定240 nm作為檢測波長。

圖5　紫外吸收譜圖

2.2　流動相的選擇

在甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、茚蟲威質量分數檢測中，最初選定以甲醇＋氨水溶液（體積比80∶20）為流動相進行等度洗脫，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽出峰時間較長，且峰形不佳。經過實驗，發現以甲醇＋氨水作為流動相，采取1.1.3中的梯度洗脫程序，可以縮短甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽的出峰時間，且色譜峰峰形尖銳，可滿足分析要求。

在S-茚蟲威檢測中，采用不同體積比的異丙醇＋乙醇＋正己烷作為流動相對試樣進行分離檢測。結果發現，異丙醇、乙醇和正己烷三者體積比為30∶10∶60時，分離效果最好，出峰時間短，且色譜峰尖銳。

2.3　分析方法的線性關系

稱取一定質量的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威標樣，使用梯度稀釋的方法配制不同質量濃度的標樣溶液，在1.1.3色譜操作條件下測定相應響應值。以標樣溶液的質量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得到甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威的線性方程。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽線性方程為y=8 586.8 x-76 916，相關系數為0.999 9；S-茚蟲威線性方程為y=5 602.0 x-304 240，相關系數為0.999 5。表明方法線性關系良好（見圖6、圖7）。

2.4　分析方法的精密度

在上述色譜操作條件下，對同一12%甲維·茚蟲威水乳劑進行5次重復測定。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威的標準偏差分別為0.046和0.130，變

異系數分別為2.07%和1.20%，結果見表1。

圖6　甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽線性關系圖

圖7　S-茚蟲威線性關系圖

表1　方法精密度測定結果

2.5　分析方法的準確度

稱取5個已知質量分數的12%甲維·茚蟲威水乳劑樣品，分別加入一定量的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、S-茚蟲威標樣，分別測定其中的甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威總質量，并計算回收率，結果見表2。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和S-茚蟲威的平均回收率分別為100.34%和99.85%。

表2　方法回收率測定結果

3　結論

本文建立了同時對樣品中甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和茚蟲威進行檢測的方法，具有較高的準確度和精密度。通過梯度洗脫，節約了檢測成本，同時縮短了檢測時間，可以用于產品的質量檢測。

[1]陳鐵春,李國平,趙永輝.農藥分析手冊[M].北京:化學工業出版社,2012:105.

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[6]畢富春,吳國旭.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽高效液相色譜分析方法研究[J].現代農藥,2005,4(4):17-19.