葡萄木屑與杏鮑菇廢菌渣組合對黑靈芝生長的影響

陸榮生 劉曉星 韓美麗 王迎潔 梁志強(qiáng) 藍(lán)彩霞

摘要：為開發(fā)黑靈芝（Ganoderma atrum J. D.Zhao，L. W. Hsu et X. Q. Zhang）栽培新原料，進(jìn)行了葡萄（Vitis L.）木屑與杏鮑菇[Pleurotus eryngii （DC.ex.Fr.） Quel.]廢菌渣組合對黑靈芝生長的影響試驗(yàn)。結(jié)果表明，葡萄木屑富含纖維素與木質(zhì)素，杏鮑菇廢菌渣含較高的無氮浸出物與粗蛋白，二者合理組合對黑靈芝生長具有一定的促進(jìn)作用。葡萄木屑與棉子殼以60∶20及50∶30比例（W/W）組合的培養(yǎng)料處理可使菌絲生長速度分別達(dá)到88、92 mm/d，生物轉(zhuǎn)化率分別達(dá)到58.9%、63.1%，顯著高于對照；在葡萄木屑與棉子殼以60∶20比例配比組成的培養(yǎng)料基礎(chǔ)上，添加250～300 g/kg的杏鮑菇廢菌渣，黑靈芝菌絲生長速度可達(dá)到101～104 mm/d，菌絲長滿菌袋所用時(shí)間比對照縮短14-16 d，生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)79.6%～82.3%。

關(guān)鍵詞：黑靈芝（Ganoderma atrum J. D.Zhao，L. W. Hsu et X. Q. Zhang）；栽培；葡萄（Vitis L.）木屑；杏鮑菇[Pleurotus eryngii （DC.ex.Fr.） Quel.]廢菌渣

中圖分類號：S567.3+1.8 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2018）04-0082-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.04.021

The Influences of Grape Sawdust and Pleurotus eryngii Waste Residue on Growth

of Ganoderma atrum

LU Rong-sheng1，LIU Xiao-xing2，HAN Mei-li1，WANG Ying-jie3，LIANG Zhi-qiang1，LAN Cai-xia1

（1.Microbiology Research Institute， Guangxi Academy of Agricultural Sciences，Nanning 530007，China；2.Guangxi Gaofeng State-Owned Forest Farm，Nanning 530007，China；3.Guilin Baicaoyuan Agricultural Science and Technology Co. Ltd.，Guilin 542000，Guangxi，China）

Abstract： To develop raw materials for cultivation of Ganoderma atrum J. D.Zhao， L. W. Hsu et X. Q. Zhang， the grape（Vitis L.） sawdust and Pleurotus eryngii （DC.ex.Fr.） Quel. waste residue was used. The results showed that the grape sawdust is rich in cellulose and lignin； while P. eryngii waste residue contains high nitrogen free extract and crude protein； reasonable combination of P. eryngii waste residue and grape sawdust has a certain role in promoting the growth of G. atrum. On medium containing grape sawdust and cotton seed shell（60∶20 and 50∶30， W/W），88 and 92 mm/d of mycelial growth rate， and 58.9% and 63.1% of biological conversion rate were achieved， respectively， significantly higher than the control. When 200 to 300 g/kg P. eryngii waste residue was added in medium containing 60 grape sawdust and 20 cottonseed shell， the mycelium growth rate could be 101 to 104 mm/d； time for mycelia to fulfill the bag could be shortened by 14 to 16 d； and biological conversion rate could reach to 79.6% to 82.3%.

Key words： Ganoderma atrum J. D.Zhao， L. W. Hsu et X. Q. Zhang； cultivation； grape（Vitis L.） sawdust； Pleurotus eryngii （DC.ex.Fr.） Quel. waste residue

近年來各地的葡萄（Vitis L.）種植業(yè)發(fā)展迅速，華南地區(qū)還出現(xiàn)了雙季葡萄生產(chǎn)模式，使葡萄在春季、夏季及冬季3次修剪后產(chǎn)生了大量廢棄枝條[1]，這些廢枝條僅少量做成肥料，多數(shù)被燒掉，不僅造成資源浪費(fèi)，也造成環(huán)境污染。前人研究發(fā)現(xiàn)，葡萄枝條中含有大量纖維素、木質(zhì)素、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)成分，目前已有一些利用葡萄枝條栽培食用菌的應(yīng)用研究[2-4]，但鮮見在靈芝（Ganoderma Karst.）栽培上的應(yīng)用報(bào)道。此外，杏鮑菇[Pleurotus eryngii（DC.ex.Fr.）Quel.]工廠化生產(chǎn)企業(yè)增加較多，工廠化模式生產(chǎn)的杏鮑菇菌袋只收一潮菇后即被丟棄，因此產(chǎn)生大量廢菌渣，這些廢菌渣含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，但沒有被有效地再利用，已成為新的污染源[5，6]，如將其與葡萄枝條合理配比，有望成為靈芝等食用菌的栽培新材料。黑靈芝（Ganoderma atrum J. D.Zhao，L. W. Hsu et X. Q. Zhang）是靈芝屬的重要種類之一，具有較高的藥用與食用價(jià)值，它含有三萜類、皂苷、多糖和肽類等多種人體需要的具有藥理活性的化合物[7]，對于多種疾病如慢性氣管炎、白細(xì)胞減少癥、冠心病等具有較好的療效，長期服用還可減輕神經(jīng)衰弱癥狀[8]。黑靈芝目前的栽培方法主要有段木栽培與袋料栽培[9-11]。以段木栽培為主的木腐食用菌對林木資源高度依賴，其種植需要消耗天然與人工種植的樹木，這會導(dǎo)致部分林業(yè)自然資源的加劇損耗[12]。袋料栽培主要利用農(nóng)林加工業(yè)的副產(chǎn)品，如雜木屑、棉子殼、玉米芯等，通過這些材料的再利用，不僅提高了所屬行業(yè)產(chǎn)品的附加值，而且對于環(huán)境保護(hù)及林業(yè)資源可持續(xù)循環(huán)利用也有較大積極意義。據(jù)此，課題組以葡萄廢枝木屑與工廠化生產(chǎn)產(chǎn)生的杏鮑菇廢菌渣為原料，在黑靈芝出芝袋培養(yǎng)料中添加不同配比組合的葡萄木屑、杏鮑菇廢菌渣，通過調(diào)查黑靈芝菌絲生長速度、生物轉(zhuǎn)化率，研究葡萄枝條木屑、杏鮑菇廢菌渣對黑靈芝生長的影響， 以期為黑靈芝袋料栽培開辟新的原料來源。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用黑靈芝菌株W-31采自廣西壯族自治區(qū)灌陽縣西山鄉(xiāng)，經(jīng)組織分離獲得。所用杏鮑菇廢菌渣收購自廣西綠霖食用菌生物科技有限公司[菌袋培養(yǎng)基配比（W/W）為棉子殼28%、桑枝木屑35%、玉米芯25%、玉米粉10%、石膏1%、過磷酸鈣1%]，葡萄枝條木屑收購自灌陽縣。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 各培養(yǎng)料營養(yǎng)成分對比分析 主要測定葡萄枝條木屑、杏鮑菇廢菌渣、棉子殼、雜木屑各培養(yǎng)料中的無氮浸出物、粗蛋白、半纖維素、粗纖維、木質(zhì)素、灰分含量。

1.2.2 葡萄枝條木屑與棉子殼不同配比對出芝袋黑靈芝菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率的影響 在棉子殼基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加不同比例的葡萄枝條木屑，以觀察其對出芝袋黑靈芝菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率的影響。各處理每千克培養(yǎng)料中葡萄木屑與棉子殼的配比（W/W）分別為80∶0、70∶10、60∶20、50∶30、40∶40、30∶50、20∶60、10∶70、0∶80，每個處理均另添加18%的米糠、1%的過磷酸鈣，1%的石膏。各處理都50個菌袋，3次重復(fù)。

1.2.3 添加杏鮑菇廢菌渣對出芝袋黑靈芝菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率的影響 在“1.2.2”的基礎(chǔ)上，以葡萄木屑與棉子殼配比（W/W）60∶20與50∶30的2個處理為基本培養(yǎng)基，分別添加50、100、150、200、250、300 g/kg杏鮑菇廢菌渣。基本培養(yǎng)基中均另添加18%的米糠、1%的過磷酸鈣，1%的石膏。

1.3 培養(yǎng)基配制方法

1.3.1 出芝袋制作 按配方稱取各種配料，拌勻，加水至培養(yǎng)料含水量為60%～65%，然后裝入22 cm×45 cm規(guī)格菌袋中，經(jīng)高壓121 ℃滅菌3 h，冷卻至室溫后接種培養(yǎng)。黑靈芝菌絲培養(yǎng)溫度24～28 ℃，黑暗環(huán)境。

1.3.2 出芝管理 2016年3月，將長滿黑靈芝菌絲的菌袋除去塑料袋后，埋入郁閉度大于70%的林地中，菌塊表面覆蓋厚度2～3 cm的土層，自然生長至采收，當(dāng)年7月與10月各采收1次。

1.4 樣品檢測方法

無氮浸出物的測定采用減差法，粗蛋白含量采用凱氏定氮法測定，半纖維素含量采用鹽酸水解法和DNS法相結(jié)合進(jìn)行測定，纖維素含量采用植物類粗纖維測定法[13]測定，木質(zhì)素含量采用Klason法測定，多糖含量采用苯酚-硫酸比色法測定；灰分含量于馬弗爐中560 ℃灼燒至恒量，再計(jì)算灰分含量。各測定方法均重復(fù)測定3次，取平均值。

出芝袋黑靈芝菌絲生長速度于接種后14-24 d測定；菌絲生長狀況分別表述如下：“+”為菌絲生長一般；“++”為菌絲生長較健壯；“+++”為菌絲生長健壯；幼芝形成時(shí)間指菌袋覆土至幼芝出土所用時(shí)間；計(jì)算生物轉(zhuǎn)化率，公式為：

生物轉(zhuǎn)化率=2次采收的子實(shí)體鮮重（g）/培養(yǎng)料干重（g）×100%。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)應(yīng)用Microsoft Office Excel 2007程序處理，并制表；采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行方差分析和鄧肯氏多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄木屑與杏鮑菇廢菌渣營養(yǎng)成分分析

將葡萄木屑、杏鮑菇廢菌渣與棉子殼、雜木屑的營養(yǎng)成分進(jìn)行分析比較，結(jié)果見表1。從表1可見，葡萄木屑中無氮浸出物、粗蛋白、木質(zhì)素、灰分4種成分的含量高于棉子殼，纖維素含量與棉子殼接近，半纖維素含量低于棉子殼。與雜木屑相比，葡萄木屑中粗蛋白、半纖維素、木質(zhì)素、灰分含量均高于雜木屑，無氮浸出物、纖維素含量低于雜木屑。杏鮑菇廢菌渣測定結(jié)果表明，杏鮑菇廢菌渣在無氮浸出物、粗蛋白、灰分3種成分含量上有明顯的優(yōu)勢，其含量分別達(dá)到38.5%、9.52%、5.20%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于棉子殼、雜木屑，但它所含的半纖維素、纖維素、木質(zhì)素低于其他3種原料。由此可見，葡萄木屑、杏鮑菇廢菌渣在營養(yǎng)成分上具有各自的獨(dú)特之處，二者含有較為豐富的可滿足食用菌生長的有機(jī)營養(yǎng)成分，經(jīng)過調(diào)整組合，可以滿足靈芝生長的需求。

2.2 葡萄木屑與棉子殼不同配比對出芝袋黑靈芝菌絲生長與產(chǎn)量的影響

出芝袋培養(yǎng)料中添加不同配比葡萄木屑與棉子殼對黑靈芝菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率的影響情況見表2。從表2可以看出，培養(yǎng)料中葡萄木屑與棉子殼配比為80∶0的處理黑靈芝菌絲長滿菌袋所需時(shí)間最長，為76.7 d；菌絲生長速度最慢，只有50 mm/d，并且菌絲較弱。葡萄木屑與棉子殼配比為60∶20、50∶30、40∶40的3個處理菌絲生長速度分別達(dá)到88、92、90 mm/d，菌絲長滿菌袋所需時(shí)間分別為63.4、60.3、61.2 d，較對照（0∶80）及其他處理明顯縮短，差異上達(dá)極顯著水平（P<0.01），但三者之間差異不顯著（P>0.05），其中60∶20處理菌絲生長稍弱，其他2個處理菌絲生長健壯。在長滿菌絲的菌袋埋入土里后的出芝調(diào)查發(fā)現(xiàn)，葡萄木屑與棉子殼配比為60∶20、50∶30、40∶40這3個處理的幼芝出土?xí)r間分別為26.6、25.1、25.8 d，早于對照及其他處理，與對照及其他處理多數(shù)差異極顯著（P<0.01）；2次采收總生物轉(zhuǎn)化率分別達(dá)到58.9%、63.1%、65.6%，其中50∶30、40∶40這2個處理極顯著（P<0.01）高于對照及其他處理。

2.3 添加杏鮑菇廢菌渣對出芝袋黑靈芝菌絲生長與產(chǎn)量的影響

在葡萄木屑與棉子殼比例為60∶20與50∶30的出芝袋培養(yǎng)料中，添加不同數(shù)量的杏鮑菇廢菌渣，比較不同杏鮑菇廢菌渣添加量對黑靈芝菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率的影響，結(jié)果見表3。從表3可看出，在葡萄木屑與棉子殼比例為60∶20情況下，杏鮑菇廢菌渣添加量為200、250、300 g/kg的處理其黑靈芝菌絲生長健壯，菌絲生長速度分別達(dá)到101、104、100 mm/d，菌絲長滿菌袋時(shí)間分別縮短為50.7、48.6、49.7 d，幼芝形成時(shí)間縮短到22.4、21.8、20.4 d，生物轉(zhuǎn)化率有所提高，分別達(dá)到79.6%、82.3%、81.5%，與其他杏鮑菇廢菌渣添加量處理大部分差異極顯著（P<0.01）；并且子實(shí)體多糖含量也有所提高，分別達(dá)到了0.65、0.67、0.69 g/100 g。由表3還可見，在葡萄木屑與棉子殼比例為50∶30情況下，杏鮑菇廢菌渣添加量為200、250、300 g/kg的處理其黑靈芝菌絲生長健壯，菌絲生長速度分別達(dá)到96、95、96 mm/d，菌絲長滿菌袋時(shí)間分別縮短為51.0、50.4、52.3 d，與其他杏鮑菇廢菌渣添加量處理大部分差異極顯著（P<0.01）；但幼芝形成時(shí)間與其他處理間無顯著差異（P>0.05）；杏鮑菇廢菌渣添加量為200 g/kg的處理生物轉(zhuǎn)化率有所提高，達(dá)到83.6%，與其他處理差異極顯著（P<0.01）；子實(shí)體多糖含量也有所提高，達(dá)到了0.66 g/100 g。

總體來看，在葡萄木屑與棉子殼比例為60∶20的配比組合下，在出芝袋培養(yǎng)料中添加杏鮑菇廢菌渣200～300 g/kg，對黑靈芝菌絲生長與生物轉(zhuǎn)化率有較大的促進(jìn)作用，同時(shí)對其品質(zhì)也有提升效果。

3 小結(jié)與討論

1）碳源是食用菌重要的營養(yǎng)來源，食用菌所需的碳源主要有木質(zhì)素、纖維素、半纖維素等。黑靈芝是木腐真菌，它降解纖維素與木質(zhì)素的能力較強(qiáng)。葡萄作為一種重要水果近年種植面積不斷擴(kuò)大。葡萄栽培中產(chǎn)生的修剪枝條其木屑營養(yǎng)成分較多，試驗(yàn)測定結(jié)果表明，葡萄木屑纖維素與木質(zhì)素含量高達(dá)40.1%、39.2%，與傳統(tǒng)食用菌袋料原料棉子殼、雜木屑成分相似，個別成分還高于后兩者，完全可以滿足以木腐材料為原料的黑靈芝生長所需。黑靈芝菌絲生長速度、生物轉(zhuǎn)化率調(diào)查結(jié)果表明，葡萄木屑與棉子殼配比（W/W）為60∶20、50∶30、40∶40情況下，菌絲長滿菌袋所需時(shí)間與幼芝形成時(shí)間均比對照有明顯的縮短，總生物轉(zhuǎn)化率也大大高于對照及其他葡萄木屑與棉子殼配比處理。說明葡萄木屑與棉子殼適量配比有利于黑靈芝生長。

2）食用菌菌渣是食用菌栽培原材料經(jīng)過菌絲生長及子實(shí)體生長收獲后的剩余物，由于原料經(jīng)過菌絲體較長時(shí)間的分解，其營養(yǎng)成分構(gòu)成與最初相比發(fā)生了較大變化，前人研究表明，其可成為食用菌栽培的優(yōu)質(zhì)有機(jī)氮源[12，14]。試驗(yàn)測定結(jié)果顯示，杏鮑菇廢菌渣中無氮浸出物與粗蛋白含量較高，可作為良好的天然有機(jī)氮源應(yīng)用于黑靈芝生產(chǎn)。在試驗(yàn)中，葡萄木屑與棉子殼以適當(dāng)比例配合的培養(yǎng)基中，添加一定量的杏鮑菇廢菌渣有利于黑靈芝產(chǎn)量的進(jìn)一步提高，并可提高黑靈芝的多糖含量。靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一，靈芝的藥用價(jià)值高低與多糖含量有很大的關(guān)系。在葡萄木屑與棉子殼比例為60∶20的組合下，添加杏鮑菇廢菌渣200～300 g/kg，對黑靈芝生物轉(zhuǎn)化率與子實(shí)體多糖的提高均有較大的促進(jìn)作用。

3）目前包括靈芝在內(nèi)的許多食用菌種植都采用段木栽培，這與國家的森林保護(hù)與林業(yè)可持續(xù)發(fā)展方針形成矛盾。近年來伴隨食用菌作為精準(zhǔn)扶貧的主要項(xiàng)目在各地的展開，食用菌行業(yè)產(chǎn)生的菌渣也持續(xù)增加，因此，本試驗(yàn)結(jié)果對于食用菌產(chǎn)業(yè)的循環(huán)發(fā)展與林業(yè)資源保護(hù)協(xié)同并進(jìn)具有重要意義。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉麗麗，李建輝，鄭雪良，等.果樹枝條資源化利用研究進(jìn)展[J].浙江柑橘，2016，33（4）：5-8.

[2] 黃卓忠，陳麗新，韋仕巖，等.葡萄枝屑栽培毛木耳配方篩選試驗(yàn)[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，42（8）：961-963.

[3] 羅雯娟，孟俊龍，渠繼紅，等.葡萄枝屑栽培平菇試驗(yàn)[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，30（2）：146-149.

[4] 王玉民，馬清禮.葡萄枝培養(yǎng)料栽培黑木耳的試驗(yàn)研究[J].宿州學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，27（1）：44-46.

[5] 李昕竺，曾先富，熊維全，等.四川省食用菌菌渣資源化利用研究現(xiàn)狀[J].四川農(nóng)業(yè)科技，2015（5）：59-61.

[6] 王吉峰，董穎超，谷 旭.菌糠飼用價(jià)值評估及潛在霉菌毒素污染防控措施[J].中國飼料，2016（7）：24-26.

[7] 弓曉峰.黑靈芝元素形態(tài)、活性成分及其保健功能研究[D].南昌：南昌大學(xué)，2006.

[8] 張衛(wèi)國，劉 欣，陳永泉.靈芝多糖的研究進(jìn)展[J].飲料工業(yè)，2003，6（4）：5-9.

[9] 金 鑫，李文治，何文紅，等.不同靈芝菌株的農(nóng)藝性狀和藥效成分特異性研究[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（4）：19-23.

[10] 楊紹平.黑靈芝原木覆土栽培技術(shù)[J].食用菌，2006（S）：61.

[11] 才曉玲，何 偉，安福全.靈芝菌生物學(xué)特性及栽培基質(zhì)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2016（7）：95-98.

[12] 金 鑫，劉宗敏，黃羽佳，等.我國靈芝栽培現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢[J].食藥用菌，2016，24（1）：33-37.

[13] GB/T5009.10-2003，植物類食品中粗纖維的測定[S].

[14] 許松葵.葡萄等5個樹種葉中養(yǎng)分含量和養(yǎng)分利用效率研究[J].廣東林業(yè)科技，2003，19（2）：13-16.