復合蛋白酶添加量對魯煙白豬生產性能、養分消化率及血液生化指標的影響

楊文嬌，宋春陽，于振洋，姜建陽

（青島農業大學動物科技學院，山東青島266109）

復合蛋白酶已經成為豬日糧中有益的添加劑，日糧中添加復合酶制劑可以提高生長育肥豬的生長性能，改善胴體性狀和肉品質。研究表明，在仔豬日糧中添加含有蛋白酶的復合酶制劑，能夠促進仔豬生長發育、提高飼料利用率；增強仔豬免疫力，降低死亡率。楊春雷（2013）認為，日糧中添加復合酶制劑可以顯著提高鈣、磷和總能的表觀消化率，極顯著降低仔豬腹瀉率；對斷奶仔豬的平均日增重及采食量無顯著影響。葉慧（2013）認為組合型蛋白酶對仔豬生產性能和養分表觀消化率相較于單一蛋白酶組能量的表觀消化率提高6.08%，粗蛋白質的表觀消化率提高7.53%。另外，研究表明，在日糧中添加適量的蛋白酶，能夠有效補充機體消化道中內源蛋白酶，提高飼料中粗蛋白質等營養物質的消化率，進而達到提高生產性能的目的。蛋白酶的添加量是影響其作用效果的一個重要因素，適宜的添加量既可以提高飼料消化率，改善生產性能，又可以避免過量添加造成的成本及資源的浪費，因此研究蛋白酶的添加量對于生產實踐具有重要意義。本試驗旨在通過研究不同蛋白酶水平對魯煙白豬生產性能、養分消化率及血液生化指標的影響，確定復合蛋白酶在最優日糧組型中的適宜添加量，為復合蛋白酶在魯煙白豬上的科學應用提供理論依據。

1　材料與方法

1.1試驗材料 復合蛋白酶由兩種酸性蛋白酶（蘇柯漢生物工程有限公司，SUKAPro AC，酶活力10萬U/g；山東安克生物工程有限公司，酸性蛋白酶，酶活力4萬 ～10萬U/g）和一種中性蛋白酶（蘇柯漢生物工程有限公司，SUKAPro NE PW 100，酶活力10萬U/g）按3：3：2的比例混合而成。

蛋白酶活性定義為1 g固體酶粉（或1 mL液體酶），在一定溫度和pH條件下，1 min內水解酪素產生1 μg酪氨酸所需要的酶量，以U/g表示。1.2 試驗動物與飼養管理 本試驗選用150頭（26±1）kg去勢健康生長的魯煙白公豬，按體重將其隨機分配到5個試驗組中，即對照組；復合蛋白酶0.05%；復合蛋白酶0.075%；復合蛋白酶0.1%；復合蛋白酶0.125%，每個試驗組3個重復，每個重復10頭豬。

飼養管理按常規飼養管理進行，試驗前對豬舍進行徹底清理和消毒，同時給豬打耳號，驅蟲，并在試驗期間注射疫苗，生長豬每天以圈為單位飼喂 2 次（7：00，16：00），豬自由采食和飲水，每日早晚各打掃一次圈舍，保持圈內清潔、衛生、地面干燥，每周消毒3次（多種消毒液輪換使用）。試驗期為28 d。

1.3試驗日糧 采用玉米-雜粕型日糧，飼料為制粒型，其配方及營養水平見表1。

表1　試驗日糧組成及營養成分（風干基礎）

1.4樣品采集

1.4.1飼料與糞便的采集 試驗期間每個重復抽取500 g飼料樣品，留做飼料養分含量的測定；在試驗最后一天以重復為單位，收集適量新鮮糞便，于65℃烘箱內烘干，之后再置于空氣中回潮24 h，混合、粉碎后備用。

1.4.2血液的采集 稱重前每個重復隨機選1頭豬于前腔靜脈采血10 mL，3000 r/min離心10 min后分裝血清，-20℃保存。

1.5測定指標

1.5.1生產性能測定指標 試驗開始前和結束后，分別將已空腹12 h的豬逐個稱重，以重復為單位結算飼料消耗。計算平均日總重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和耗料增重比（F/G）。

1.5.2日糧中各種養分消化率的測定 使用2 mol/L HCl不溶灰分（AIA）作內源指示劑，分別測定料樣和糞樣中水分含量，計算干物質、粗蛋白質、粗灰分、有機物含量；根據指示劑法計算日糧中各養分的表觀消化率：

1.5.3血液生化指標的測定 血清尿素氮和總蛋白分別使用比色法和雙縮脲法測定，測定儀器均為全自動生化分析儀。

1.6數據處理 試驗數據使用Excel進行統計、計算，采用SPSS 20.0軟件中的ANOVA進行單因子方差分析，用LSD法進行多重比較。

2　結果與分析

2.1復合蛋白酶添加量對魯煙白豬生產性能的影響 由表2可知，在玉米-雜粕型日糧中添加復合蛋白酶能夠顯著降低耗料增重比 （p＜0.05），其中0.1%組與對照組之間差異極顯著，且0.075%和0.1%組之間差異不顯著（P＞0.05）。回歸分析表明，復合蛋白酶添加量與魯煙白豬的料重比之間符合二次曲線模型，其回歸方程為y=0.0421x2-0.3039x+3（R2=0.8729，P ＜ 0.05），極值點在0.075%和 0.1%組之間；但在平均日采食量和平均日增重方面，雖然添加復合蛋白酶之后都有所提高，但各組間差異不顯著（P＞ 0.05）。

2.2復合蛋白酶添加量對魯煙白豬養分消化率的影響 由表3可知，在玉米-雜粕型日糧中，隨著復合蛋白酶添加水平的提高，干物質、有機物的消化率隨之逐漸升高并趨于平穩。其中0.075%和0.1%組的養分消化率都顯著高于對照組 （p＜0.05或p＜0.01），并且0.075%和0.1%組之間差異不顯著 （P＞0.05）。蛋白酶的添加量對日糧粗蛋白質消化率有顯著影響（p＜0.01）。

表2　復合蛋白酶添加量對魯煙白豬生產性能的影響

表3　復合蛋白酶添加量對魯煙白豬養分消化率的影響 %

2.3復合蛋白酶添加量對魯煙白豬血液生化指標的影響 由表4可知，復合蛋白酶在玉米-雜粕型日糧中隨著添加量的提高，對魯煙白豬的血清生化指標有顯著影響（p＜0.01）。其中血清總蛋白含量各試驗組均顯著高于對照組（p＜0.01）；血清尿素氮除0.05%組外，其他各組均顯著低于對照組（p＜0.05或p＜0.01），且0.075%和0.1%組與對照組差異極顯著，0.075%組和0.1%組之間差異不顯著（P＞0.05），回歸分析表明，復合蛋白酶添加量與魯煙白豬的血清總蛋白和尿素氮含量之間符合二次曲線模型，其回歸方程分別為y=-0.2357x2+1.8743x+66.48（R2=0.9497，P ＜ 0.01）、y=0.0543x2-0.4057x+5.78（R2=0.8327，P ＜ 0.01），極值點都在0.075%和0.1%組之間。

3　討論

3.1復合蛋白酶添加量對魯煙白豬生產性能的影響 對于飼用酶制劑而言，不管其對哪一種底物發揮作用，根本的目的都是要在降低飼料成本的同時盡可能的提高或保持動物的生產性能。蛋白酶作為飼料添加劑的使用為多種植物性蛋白飼料在養豬生產中的大量應用提供了有效的途徑。在日糧中添加適量的蛋白酶，能夠有效補充機體消化道中的內源蛋白酶，提高飼料中粗蛋白質等營養物質的消化率，進而達到提高生產性能的目的（于桂陽，2005；Yin，2001；Ghazi，1997）。 楊久仙等（2013）研究發現，斷奶仔豬日糧中添加蛋白酶可顯著降低耗料增重比，其中添加量為0.08%和0.12%時飼料轉化率分別提高6.3%和8%。郭建來等（2007）發現仔豬日糧中添加酸性蛋白酶，日增重提高11.98%、采食量提高5.49%，料重比降低5.68%。

表4　復合蛋白酶添加量對魯煙白豬血液生化指標的影響

本試驗在玉米-雜粕型日糧中添加復合蛋白酶耗料增重比顯著降低，但在平均日采食量和平均日增重方面，雖然添加復合蛋白酶之后都有所提高，但各組間差異不顯著。徐奇友等（1995）研究發現，加酶日糧與對照日糧在平均日增重和飼料轉化率這兩項指標中差異均不顯著。分析其原因，這種結果可能是由于飼料類型、蛋白酶配比、蛋白酶來源和活性的不同所引起的。

3.2復合蛋白酶添加量對魯煙白豬養分消化率的影響 相關研究表明，蛋白酶能夠提高能量、蛋白質、氨基酸等營養物質的消化率，提高飼料轉化率（Selle，2010；Gracia，2009）。 在仔豬日糧中添加酸性蛋白酶，可以提高日糧中干物質、粗蛋白質、鈣、磷的表觀消化率，但均未達到差異顯著的水平（郭建來，2007）。 楊久仙等（2013）研究發現，日糧中添加蛋白酶可以顯著提高仔豬對粗蛋白質和干物質的消化率，試驗組中粗蛋白質與干物質的消化率分別提高了4.8%和3.2%。Rooke等（1998）研究表明，飼喂經蛋白酶處理后的豆粕，可以顯著提高斷奶仔豬的生長性能和養分消化率，其原因可能是由于蛋白酶降解了豆粕中的一些特異性多肽。也有一些研究得出了不同的結論，Olukosi等（2008）研究報道，在玉米-豆粕日糧中添加蛋白酶為主的復合酶制劑未能對肉仔雞的養分表觀消化率產生顯著影響。余有貴（2005）研究發現，在以玉米豆粕型日糧為基礎日糧，小麥分別占谷物組成的38%和73%的試驗日糧，3種不同組成的日糧中添加復合酶制劑均可顯著提高其養分消化率。添加0.025%復合酶的玉米豆粕型日糧獲得了最大營養物質消化率。

本試驗發現在玉米-雜粕型日糧中添加復合蛋白酶能顯著提高干物質、粗蛋白質、有機物的消化率（p＜0.05），其中0.1%的添加量作用效果最明顯，粗蛋白質消化率提高了2.78%（p＜0.01）；干物質和有機物分別提高了2.35%和3.96%（P ＜ 0.05）。

3.3復合蛋白酶添加量對魯煙白豬血液生化指標的影響 血清總蛋白的水平可以從整體上反映機體蛋白合成代謝的強弱，當血清總蛋白含量升高時，表明血清總蛋白與組織蛋白質保持的動態平衡向組織蛋白沉積方向移動，組織器官生長得到促進；另一方面，血清總蛋白還能夠反映機體免疫機能的狀態。血清總蛋白質含量高有利于提高動物機體免疫力和代謝水平（高玉紅，2000）。

本試驗中在魯煙白豬玉米-雜粕型日糧中添加復合蛋白酶使血清總蛋白含量顯著提高，其中各試驗組均顯著高于對照組 （p＜0.01）。由此可見，蛋白酶可以提高飼料蛋白利用率，增加機體蛋白沉積，提高動物的生產性能。

尿素氮是機體內各種氨基酸降解程度的檢測指標，能夠準確的反映出動物體內各種氨基酸之間的平衡狀況及蛋白質的代謝水平。血清尿素氮是通過動物體內鳥氨酸循環合成，是機體內蛋白質和氨基酸代謝的終產物，其含量與蛋白質及氨基酸的消化率息息相關。因此關于營養代謝的研究通常會把血清尿素氮作為動物體內蛋白質代謝水平和日糧氨基酸平衡狀況較為準確的反映指標。Choct（1995）研究發現，血清尿素氮含量與機體內氮沉積率及蛋白質利用率呈顯著負相關（y=-0.9）。血清尿素氮含量的降低，表明除尿素氮以外的含氮化合物的合成加快或是機體內含氮物質的分解減少，氮的沉積量增加，利用率提高；反之則表明體內蛋白質分解代謝增強，氮沉積量減少。

本試驗中，添加蛋白酶的各試驗組的血清尿素氮含量除0.05%以外，其他各組均顯著低于對照組（p＜0.05或p＜0.01），其中以0.075%組效果最為理想。分析其原因，日糧中添加復合蛋白酶之后，有效補充了消化道中內源酶的不足，促進了消化道對飼料中蛋白質或氨基酸的消化吸收，從而使體內蛋白質合成代謝加強，氮沉積率提高。這與本試驗中復合蛋白酶提高魯煙白豬對粗蛋白質及氨基酸表觀消化率的試驗結果相符合。

4　小結

隨著復合蛋白酶在玉米-雜粕型日糧中添加水平的提高，魯煙白豬的平均日增重、平均采食量都有所提高，但各組間差異不顯著，耗料增重比顯著降低，復合蛋白酶為0.075%時，耗料增重比最佳。隨著日糧中復合蛋白酶的增加，粗蛋白質、干物質、有機物的消化率及血清總蛋白含量都顯著提高；血清尿素氮含量隨著蛋白酶添加水平升高而顯著降低。其中添加量為0.075%時，作用效果最理想。

[1]郭建來，魏紅芳.酸性蛋白酶對仔豬生產性能及養分表觀消化率的影響[J].飼料博覽，2007，5：10 ～ 12

[2]高玉紅，減素敏，劉艷琴，等.復合酶對斷奶仔豬生產性能和消化吸收能力影響研究[J].飼料研究，2000，3：8～10

[3]徐奇友，霍貴成，楊麗杰，等.外源蛋白酶對仔豬生產性能、器官重的影響[J].養豬，1995，4：10 ～ 11.

[4]楊春雷，楊裕，鞏振華.復合酶制劑對斷奶仔豬生長性能和營養物質消化的影響[J].西農業科學，2013，41（10）：1122.

[5]葉慧，黃升科，雷建平，等.組合型蛋白酶對仔豬生產性能和養分表觀消化率的影響[J].廣東農業科學，2013，6：120.

[6]于桂陽.斷奶仔豬日糧中添加復合酶制劑的效果研究[J].家畜生態學報，2005，26（3）：26 ～ 29.

[7]楊久仙，張榮飛，郭江鵬，等.角蛋白酶對斷奶仔豬生長性能和營養物質消化率的影響[J].畜牧與獸醫，2013，9：43.

[8]余有貴，賀建華.日糧中谷物組成和復合酶添加對生長豬生產性能和養分消化率的影響[J].動物營養學報，2005，1：25～29.

[9]Choct，M.Nonstarch Polysaccharide-degrading enzymes increase the permance of broiler chickens fed wheat of low apparent metabolizable energy[J].Nutr，1995，125：485 ～ 492

[10]Ghazi S，Rooke T A，Galbraith H，et al.The potential for improving soya～ bean meal in diets for chickens： treatment with different Proteolysis enzyme[J].British Poultry Science，1997，37：554 ～555.

[11]Gracia M I，Lazaro R，Latorre M A，et al.Influence of enzyme supplementation of diets and cooking-flaking of maize on digestive traits and growth performance of broilers from 1 to 21days of age[J].Animal Feed Science and Technology，2009，150：303 ～ 315.

[12]Olukosi O A，Cowieson A J，Adeola O.Energy utilization and growth performance of broilers receiving diets Supplemented with enzymes containing Carbohydras or phytase activity individually or in combination[J].British Journal of Nutrition，2008，99： 682 ～ 690.

[13]Rooke J A，Slessor M，Fraser H，et al.Growth performance and gut function of piglets weaned at four weeks of age and fed Protease treated soya-bean meal[J].Animal Feed Science and Technology，1998，70：175 ～ 190.

[14]Selle P H，Cadogan D J，Ru Y J，et al.Impact of exogenous enzymes in sorghum or wheat-based broiler diets on nutrient utilization and growth performance[J].International Journal of Poultry Science，2010，9（1）：53 ～ 58.

[15]Yin Y L，Baidoo S K，Jin L Z，et al.The effect of different carbohydrase and protease supplementation on apparent digestibility of nutrients of five hulless barley varieties in young pigs[J].Livestock Production Science，2001，71：109 ～ 120.