花斑裸鯉的胚胎發育觀察

董艷珍， 鄧思紅， 肖文淵

(1.西昌學院動物科學學院，四川西昌 615013； 2.涼山科華水生態工程有限公司，四川西昌 615000)

花斑裸鯉(GymnocypriseckloniHerzenstein)，別稱大嘴湟魚、大嘴魚、花魚、豹子魚等，隸屬鯉形目鯉科裂腹魚亞科裸鯉屬[1]，主要分布在青海省境內黃河干支流和柴達木盆地格爾木河干支流及修溝湖，是青海省黃河上游扎陵湖、鄂陵湖的重要經濟魚類，也是青海省重要的水生野生動物種質資源，具有良好的開發前景，1992年被列入省級保護種類[2]。

花斑裸鯉肉質細嫩，營養豐富，具有很高的經濟價值和開發潛力[3-4]。國內學者對花斑裸鯉的分子生物學以及人工馴養、人工繁殖方面做了研究[5-8]，并在全人工繁殖方面初步獲得了成功，但有關花斑裸鯉胚胎發育的研究尚未見報道。本研究于2015年4—5月以及2016年4—5月對花斑裸鯉的胚胎發育過程進行了詳細的觀察，并記錄了其發育特征及發育時序，旨在完善高原土著魚類生物學資料，為今后開展該魚的人工繁殖提供一定的參考依據。

1　材料與方法

1.1　受精卵的獲取

對3～4齡的野生花斑裸鯉親魚(雌魚體質量1.2～1.5 kg，雄魚體質量0.4～0.6 kg)使用促黃體素生成素類似物(LRH-A2)和馬來酸地歐酮(DOM)進行人工催產，雌魚注射劑量為20 μg/kg LRH-A2+2 μg/kg DOM，采用2針注射法，第1次注射1/10，第2次注射余下劑量，2次注射時間間隔48 h。雄魚注射劑量為雌魚的1/2，采用一針注射法，在雌魚注射第2針時注射。采取干法受精的方式獲得受精卵。

1.2　試驗方法

將受精卵置于孵化盆中流水孵化，孵化水源為井水，孵化水溫14～16 ℃，溶氧量6.5～7.5 mg/L，pH值7.0～7.4，流速0.2～0.3 m/s，孵化期間每天清除死卵。

受精卵入孵后隨即取卵用體視鏡(NiKon Eclipse E100，目鏡10×，物鏡4×)進行分階段不定時觀察。在卵裂階段，每0.5 h左右取卵觀察1次，以后階段每1～2 h取卵觀察1次，拍照記錄觀察到的胚胎發育特征圖片，每次觀察卵數5～10粒，當其50%以上的個體發育進入某個時期，則將該時期作為該發育階段的起始時間，前一發育階段的起始時間到下一發育階段的起始時間為階段時間。

2　結果與分析

2.1　胚胎發育過程

在水溫14～16 ℃的條件下，花斑裸鯉胚胎發育歷時 140 h 17 min。胚胎發育分為受精階段、卵裂階段、囊胚階段、原腸胚階段、神經胚階段、器官形成階段以及出膜階段7個階段，以胚胎發育的主要特征為依據，共劃分為22個胚胎發育期，胚胎發育時序見表1。

表1　花斑裸鯉胚胎發育時序

2.1.1受精階段花斑裸鯉魚卵呈淡黃色，卵徑2.1～2.6 mm，遇水后變微黏，沉性。受精49 min后吸水膨脹，卵徑達3.5～4.1 mm(圖1-a)。受精后2 h 16 min，卵子原生質向動物極流動，形成胚盤，胚盤隨著卵膜的膨脹逐漸隆起(圖1-b)。

2.1.2卵裂階段受精3 h 17 min后，胚盤發生第1次卵裂，為經裂，將胚盤分成大小相等的2個卵裂球，進入2細胞期(圖1-c)。受精后4 h 47 min，發生與第1次卵裂溝垂直的分裂，進入4細胞期(圖1-d)。5 h 25 min后，進行第3次卵裂，卵裂成8個大小相似的細胞，進入8細胞期(圖1-e)。受精后6 h 10 min，進行第4次卵裂，卵裂成4行×4列的16個細胞，進入16細胞期(圖1-f)。受精后8 h 55 min，進入第5次卵裂，仍為經裂，分裂成32個細胞，進入32細胞期(圖1-g)。受精后12 h 5 min，隨著不斷的卵裂，細胞逐漸多到不可數，胚盤逐漸隆起成團，形似桑葚，進入多細胞期(圖1-h)。

2.1.3囊胚階段受精后16 h 21 min，細胞在動物極堆積，胚盤明顯隆高，形成囊胚，進入囊胚早期(圖1-i)。受精后18 h 22 min，細胞更加細密，胚盤變扁，進入囊胚中期(圖1-j)。受精后25 h 4 min，胚盤繼續下降變薄，進入囊胚晚期(圖1-k)。

2.1.4原腸胚階段受精后31 h 54 min，胚層下包卵黃的1/3，形成胚環，為原腸早期(圖1-l)。其后2 h 0 min，胚層繼續下包卵黃1/2，進入原腸中期(圖1-m)。受精后37 h 12 min，胚層繼續下包卵黃達4/5，進入原腸晚期(圖1-n)。

2.1.5神經胚階段受精后38 h 59 min，胚層下包至卵黃囊的底部，約覆蓋卵黃表面9/10，裸露在胚環以外的部分為卵黃栓，進入神經胚期(圖1-o)。受精后39 h 19 min，胚孔進一步縮小并閉合，進入胚孔封閉期(圖1-p)。

2.1.6器官形成階段此后3 h 22 min，胚體出現3～4對肌節，胚體一端微微隆起，可分辨出頭尾部，進入肌節出現期(圖1-q)。受精后66 h 14 min，胚體尾部出現1小段細長尾芽，進入尾芽期(圖1-r)。受精后80 h 6 min，胚體出現蠕動，平均2～3次/min，進入肌肉效應期(圖1-s)。受精后 96 h 53 min，心臟開始跳動，胚體尾部變粗，扭動變頻繁，左右扭動，平均17～18次/min，進入心臟跳動期(圖1-t)。受精后106 h 45 min，尾部繼續變粗壯并伸長與頭部接觸，扭動不如之前劇烈，進入出膜前期(圖1-u)。

2.1.7出膜階段器官形成后期，卵膜開始軟化。受精后118 h 34 min，胚體尾部首先從卵膜中伸出，繼而仔魚掙脫卵膜完成出膜，進入出膜期(圖1-v)，初孵仔魚平均全長7.6～8.0 mm。21 h 43 min后全部完成出膜，整個胚胎發育過程用時140 h 17 min。

3　討論

3.1　花斑裸鯉的受精卵特點

花斑裸鯉成熟卵徑為2.1～2.6 mm，沉性，微黏性，受精后黏性消失。受精卵吸水膨脹后卵徑達到3.5～4.1 mm，略大于申志新等報道的結果[5]，與裸鯉屬的青海湖裸鯉卵徑大小(卵徑1.9～2.3 mm，吸水后卵徑3.9～4.1 mm)[9]相近，大于裂腹魚屬的小裂腹魚的相應值(卵徑1.9 mm，吸水后卵徑3.0 mm)[10]。

3.2　花斑裸鯉的胚胎發育特點

花斑裸鯉的受精卵卵徑大，卵黃物質豐富，孵化時間長，在14～16 ℃水溫條件下140 h左右完成孵化，而在7～8 ℃條件下花斑裸鯉需要120 h進入原腸期，360 h開始破膜，504 h 破膜結束。這說明在7～16 ℃條件下，花斑裸鯉均能孵化，且孵化率相差不大，在7～8 ℃條件下孵化率為 78.4%[5]，在14～16 ℃條件下孵化率為77.9%[7]。但低溫條件下孵化時間長，且出膜不整齊，從破膜開始到結束所需時間長。關于花斑裸鯉胚胎發育的適宜溫度還需進一步研究。

花斑裸鯉初孵仔魚平均全長7.6～8.0 mm，與松潘裸鯉(8.0 mm)[11]、祁連山裸鯉(8.2 mm)[12]相近，而小于青海湖裸鯉[8](8.9 mm)、雅魯藏布江尖裸鯉(10.27 mm)[13]。

參考文獻：

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