青海牦牛牛病毒性腹瀉的血清學調(diào)查

朱 玲 青海省祁連縣野牛溝鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站 810499

牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒 （Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起牛的一種急性、熱性傳染病[1]，牛感染BVDV后主要表現(xiàn)為腹瀉，進行性消瘦，脫水，嚴重的可引起死亡[2]。BVDV可以導致免疫耐受和免疫抑制，母畜流產(chǎn)和奶牛產(chǎn)奶量下降，以及生產(chǎn)性能下降，每年都給全球養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失[3-4]。近幾年來，我國BVDV的感染情況日益嚴重，為了掌握青海牦牛BVDV的感染情況，為青海牦牛BVDV的綜合防控提供參考依據(jù)，本研究對采集于青海省6個規(guī)模牦牛飼養(yǎng)場和11戶散養(yǎng)戶的559份血清樣品進行了ELISA抗體檢測。現(xiàn)將整個試驗過程介紹如下。

1 材料和方法

（1）血清樣品來源。2017年3～12月，采集于青海省6個規(guī)模牦牛飼養(yǎng)場和11戶散養(yǎng)戶的血清樣品共計559份。

（2）試劑與儀器。牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒為美國IDEXX公司產(chǎn)品；ELx800酶標儀為美國BIOtek公司產(chǎn)品。

（3）檢測方法。按照牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書操作，首先在96孔酶標板每個孔加入100μL樣品稀釋液，之后在檢測孔加入25μL血清樣品，在陽性對照孔和陰性對照孔中各加入25μL陽性和陰性對照血清，加完后在室溫下作用90分鐘，之后棄去酶標板液體，每孔加入300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。在每個酶標孔加入100μL酶標抗體，室溫下作用30分鐘，之后棄去酶標板液體，每孔加入300μL洗液洗5次，最后一次洗完拍干。每孔加入100μL TMB底物，室溫下避光10分鐘H歐諾個顯色，之后每孔加入100μL終止液終止反應，酶標儀在450nm波長讀數(shù)，記錄分析檢測結果。

（4）結果判定。按照牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書要求，陰性對照平均值≤0.25，陽性對照平均值-陰性對照平均值≥0.15，試驗結果成立，計算檢測血清樣品的S/P值。公式為S/P=樣品OD值-陰性平均OD值/陽性平均OD值-陰性平均OD值。S/P≥0.3，檢測樣品為陽性；S/P＜0.2， 檢測樣品為陰性；0.2≤S/P＜0.3，檢測樣品為可疑；可疑樣品需要重新檢測。

2 結果和分析

試驗結果顯示，6個規(guī)模養(yǎng)殖場和11戶散養(yǎng)戶均存在BVDV抗體陽性牛，陽性率達100%。共計檢測559份樣品，陽性樣品為202份，平均陽性率為36.14%。其中，6個規(guī)模牦牛場的BVDV血清抗體陽性率最高的為47.27%，最低的為16.67%，平均陽性率為34.19%。11戶散養(yǎng)戶的BVDV血清抗體陽性率最高的為57.89%，最低的為27.78%，平均陽性率為39.42%。散養(yǎng)戶與規(guī)模牛場相比，無論是最高陽性率還是最低陽性率都高于規(guī)模牛場，其中散養(yǎng)戶的平均陽性率較規(guī)模養(yǎng)牛場高5.23個百分點。因采集血清樣品的牦牛養(yǎng)殖場和散養(yǎng)戶均未免疫過BVDV疫苗，該抗體陽性表明均由BVDV野毒感染所致。

3 討論

BVDV是牛群普遍易感的疾病，也是危害養(yǎng)牛業(yè)最主重的疾病之一，BVDV抗體普查具有十分重要的意義，通過BVDV抗體普查可以了解牛群BVDV感染情況，由于本病的臨床癥狀不明顯，有時還不表現(xiàn)臨床癥狀，在實際生產(chǎn)中常常不易診斷。從青海牦牛的血清BVDV抗體檢測結果可以看出，559份血清樣品的平均陽性率為36.14%，規(guī)模牦牛場的陽性率為34.19%，散養(yǎng)戶的陽性率為39.42%，散養(yǎng)戶的平均陽性率較規(guī)模牛場高5.23個百分點，說明青海牦牛存在嚴重的BVDV污染，尤其是散養(yǎng)戶牛的感染狀況更為嚴重。BVDV感染后可以引起本病在牛群中潛伏感染，也可以引起免疫抑制，雖然牛暫時不發(fā)病，但在受到應激刺激或遇惡劣氣候時，就可以引發(fā)病毒性腹瀉的急性感染。建議根據(jù)檢測結果對牛群進行凈化處理，將BVDV抗體陽性的牛逐漸淘汰，更不能留作種用。

BVDV在牛群中的潛伏感染狀況常常導致本病很難凈化，本病可以通過母牛垂直傳播，感染BVDV的母牛會出現(xiàn)產(chǎn)死胎及弱仔現(xiàn)象，嚴重影響規(guī)模養(yǎng)牛場的發(fā)展。隨著BVDV在我國感染情況的日益嚴重，各大養(yǎng)牛場都應該對本病引起重視。對BVDV的防治需做到以下幾點。首先要加強對新購牛的檢疫，最好堅持自繁自養(yǎng)，對引進的犢牛一定要做好BVDV抗體檢測工作，只有血清抗體檢測顯示陰性的方可引進。防治BVDV最有效的手段就是牛群BVDV凈化，逐步淘汰陽性牛。其次，加強飼養(yǎng)管理，經(jīng)常消毒，保持良好的環(huán)境衛(wèi)生。及時清理糞便，保持牛舍通風良好。本病重在預防，發(fā)病后目前主要采取對癥治療、及時補液防止脫水等措施。