IL-6及其受體在膽管癌患者組織中的表達及臨床意義

劉亮亮，黃 強，劉臣海，劉 振，齊 燦

膽管癌是一種缺乏早期診斷，膽汁異質性的惡性腫瘤。但是其發病機制仍很大程度上未知。早期膽管癌一般無癥狀，并且通常在晚期階段被診斷[1]。白細胞介素6(interleukin-6 , IL-6)是一種多功能的細胞因子, 通過與細胞膜的受體(IL-6R)結合后可作用于多種靶細胞, 近年來研究[2]顯示IL-6及IL-6R對腫瘤細胞生長、疾病的病理進程及病情嚴重程度均有影響。但關于其在膽管癌組織中的表達情況及其與膽管癌的臨床病理的關系尚未報道。該研究利用Western blot方法檢測兩種蛋白在膽管癌中的表達，并對其表達意義進行探討。

1 材料與方法

1.1病例資料收集安徽醫科大學附屬省立醫院2009年5月～2011年7月手術切除并經病理組織學證實的膽管癌及癌旁的標本40例。所有患者術前未進行放療、化療、免疫治療等抗腫瘤治療，其中男23例，女17 例，年齡41～80(61.9±8.6) 歲。上段膽管癌(肝門部膽管癌) 24例，中下段膽管癌16 例。經病理檢查證實屬高分化腺癌14例，中低分化腺癌26例，手術中探查及術后病理切片證實無癌周及遠處淋巴結轉移者16例，已發生轉移者24 例。按照肝外膽管癌TNM 分期進行臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期25例。所有患者行膽管癌根治性手術R0切除。

1.2Westemblot法檢測IL-6、IL-6R蛋白表達水平過蛋白酶抑制劑處理膽管癌及癌旁組織提取總蛋白，之后經過上樣、電泳、轉膜、封閉、孵育后，最終經化學發光、顯影、定影后，對膠片進行掃描。通過UVP 凝膠圖像處理系統與Abworks 4.6軟件分析目的條帶與β-actin 條帶灰度值之比來表示目的蛋白的相對表達水平。抗 IL-6、IL-6R一抗稀釋濃度為1 ∶200;抗-Actin 一抗稀釋濃度為1 ∶500; 二抗稀釋度為1 ∶5 000。

1.3隨訪采用電話隨訪或信訪。40例均進行了隨訪，通過隨訪獲取生存情況后，繪制生存曲線，分析IL-6及IL-6R在膽管癌組織中的表達與預后的關系。

1.4統計學處理采用SPSS 17.0 統計軟件進行分析。組間均數比較采用t檢驗，生存率的計算采用Kaplan-Meier法，并作Log-Rank檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1IL-6及IL-6R在膽管癌及癌旁組織中的表達通過Western blot法檢測40例膽管癌標本中IL-6及IL-6R的表達水平，結果通過Western blot分析，IL-6R的灰度值在膽管癌組織和癌旁組織分別為(0.780±0.120)和(0.158±0.059)(P<0.05)；IL-6灰度值在膽管癌組織和癌旁組織分別為(0.480±0.112)和(0.058±0.010)，差異有統計學意義(P<0.05)。見圖1。

表1 膽管癌組織中IL-6及IL-6R蛋白的表達與臨床病理關系±s)

圖1 膽管癌組織與癌旁組織中的受體表達情況

2.2膽管癌組織中IL-6及IL-6R表達水平與臨床病理特征的關系IL-6及IL-6R表達水平與腫瘤分化程度，TNM分期和淋巴轉移相關，且呈正相關性；在低分化組中表達明顯高于高中分化組，T1+T2期分組中表達水平要明顯低于T3+T4期分組，淋巴轉移組表達水平要高于未轉移組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.3IL-6及IL-6R表達水平與膽管癌預后的關系在40例膽管癌患者中IL-6及IL-6R高表達的26例，低表達的14例。Kaplan-Meier 生存分析顯示IL-6及IL-6R高表達者的中位生存期為25.30個月，生存率為7.6%,26例患者中僅2例存活；IL-6及IL-6R低表達者的中位生存期為57.00個月，生存率為35.7%，14例患者中5例存活，經Log-Rank檢驗，顯示IL-6及IL-6R高表達者與低表達者生存率相比較，差異有統計學意義(χ2=4.080，P=0.043) ，其中生存分析的截尾時間為60個月。見圖2。

3 討論

膽管癌是一種來源于膽管上皮的惡性腫瘤，癌變的過程中炎癥因子在這個過程中發生了重要的作用，同時在臨床診治中硬化性膽管炎被廣泛認為是一種癌前病變，增加了膽管癌發生的風險[3]。而白細胞介素在腫瘤的發生發展中發揮了重要的作用[4]，本研究探討的IL-6被認為是與腫瘤的發生發展密切相關的炎癥因子，國外多項研究[4]結果顯示IL-6能夠促進多種腫瘤的侵襲轉移以及影響患者的預后，例如食道癌等。然而IL-6 的多種生物學活性是通過IL-6R 介導的,IL-6和IL-6R 形成復合物后發揮其生物學活性。IL-6和IL-6R間有相互協同的作用, 其異常可影響免疫、造血和內分泌系統功能紊亂, 甚至誘發惡性腫瘤。

圖2 膽管癌組織中表達IL-6及IL-6R表達水平

國外已有文獻[5]在血清學水平檢測了胃癌患者中血清IL-6水平，顯示胃癌患者血清IL-6水平明顯增高，并指出IL-6是一種診斷胃癌的潛在指標。本實驗通過膽管癌組織學水平研究結果顯示IL-6及IL-6R表達水平與腫瘤分化程度，TNM分期和淋巴轉移相關，且呈正相關性，推測腫瘤的惡性程度越高，其表達水平越高。40例患者通過手術后，根據隨訪結果，應用Kaplan-Meier生存分析顯示生存分析顯示IL-6及IL-6R高表達者生存率明顯低于低表達者并且差異有統計學意義；推測IL-6及IL-6R表達水平越高，患者預后越差。同時有國內外研究[6-7]顯示IL-6能夠通過激JAK/STAT途徑來增強其增值，侵襲和遷移的能力。但是IL-6及IL-6R在促進人體膽管癌細胞的侵襲和遷移是否通過該信號通路，也是需要的進一步的組織學實驗進行驗證及探索。

綜上所述，IL-6及IL-6R在惡性腫瘤中的作用可能是一種機體對腫瘤產生反饋，IL-6及IL-6R是促進膽管癌生長作用過程中的重要分子，有望成為診斷及治療膽管癌的新靶點。

[1] Banales J M, Cardinale V, Carpino G, et al.Expert consensus document: Cholangiocarcinoma: current knowledge and future perspectives consensus statement from the European Network for the Study of Cholangiocarcinoma (ENS-CCA)[J]. Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2016,13(5):261-80.

[2] Ibrahim S A, El-Ghonaimy E A, Hassan H,et al.Hormonal-receptor positive breast cancer: IL-6 augments invasion and lymph node metastasisviastimulating cathepsin B expression.[J]. J Ady Res,2016,7(5):661-70.

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[4] Lukaszewicz-Zajac M,Mroczko B, Kozlowski M, et al. Higher importance of interleukin 6 than classic tumor markers(carcinoembryonic antigen and squamous cell cancer antigen) in the diagnosis of esophageal cancer patients[J].Dis Esophagus, 2012,25(3):242-9.

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[6] 瞿 帥，宋 楊，梅金玉，等.IL-17及其受體調控JAK/STAT3信號通路促進喉癌血管生成的作用[J]. 安徽醫科大學學報,2015,50(10):1464-7.

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