扶正解毒微粉與扶正解毒散體外抗IBDV藥效對比試驗

張傳津， 陳炳見

(1. 山東省獸藥質量檢驗所， 山東 濟南 250022 ；2. 山東亞康藥業股份有限公司， 山東 濰坊 261101)

超微粉碎是近20 年迅速發展起來的一項高新技術，用于中藥領域能把原材料加工成微米甚至納米級的微粉。 中藥經超微粉碎所得到的超細粉末，其比表面積顯著增大，藥物在胃腸道里的溶解度明顯增加，從而增加藥物的生物利用度，并加快藥物起效時間[1]。 此外，由于納米或微米粒的粘附性及小的粒徑，既有利于延長局部用藥時滯留性的增加，也有利于延長藥物與腸壁接觸時間，加大接觸面積，從而提高藥物口服吸收的生物利用度[2]。 扶正解毒散為《中華人民共和國獸藥典》(2015 版二部)收載普通散劑處方，由黃芪、板藍根和淫羊藿三味中藥按一定比例組合而成的成方制劑，具有扶正祛邪、清熱解毒的功效，主用于治療雞法氏囊病[3-4]。本試驗用雞胚體外驗證該處方粗粉與超微粉兩種劑型的抗病毒活性效果差異，為扶正解毒微粉治療雞傳染性囊病的藥理作用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物的準備及試驗用雞胚 扶正解毒微粉(300 目)和扶正解毒散(80 目)由山東亞康藥業股份有限公司提供。 按照藥物重量和水重量1 ∶25，100 ℃密閉浸泡1 h，然后把含有藥渣的藥液離心取上清，減壓濃縮至4 g/mL，使用前按凈含量用生理鹽水稀釋成2000 g/mL 的藥液扶正解毒散微粉和扶正解毒散(FZC 和FZ)，充分溶解后，0.22 μm 的微孔濾膜過濾除菌，4 ℃保存備用。

SPF 雞胚為山東綠都生物科技有限公司饋贈。

1.2 病毒準備 雞傳染性囊病中等毒力活疫苗，山東濱州沃華生物工程有限公司產品，規格：1 000 羽/瓶；批號：130916。 用生理鹽水溶液稀釋成5 羽份·mL-1，接種10 日齡SPF 雞胚尿囊膜，0.2 mL/枚，37 ℃孵育168 h 后收取尿囊膜及胚體；尿囊膜及胚體研磨反復凍融后用生理鹽水做10 倍稀釋經離心后再接種SPF 雞胚尿囊膜，劑量同上，168 h 后收取尿囊膜及胚體研磨反復凍融后，10 倍稀釋經離心上清液按Karber 法[3]測定傳染性囊病病毒的ELD50 為10 -5.64/0.1 mL。 -20 ℃凍藏備用。

1.3 扶正解毒微粉和扶正解毒散藥液對SPF 雞胚安全濃度測定 將2 種藥液分別用生理鹽水從4 000 g/mL 連續的2 倍比稀釋5 個濃度后，設生理鹽水對照，接種10 日齡SPF 雞胚尿囊膜，0.2 mL/枚，每個濃度接種6 枚SPF 雞胚，37 ℃孵育168 h。對無出現雞胚死亡且雞胚發育正常有活力的最大藥物濃度為作為最大安全濃度。

1.4 扶正解毒微粉和扶正解毒散藥液抵抗IBDV效果的測定 將各藥液與傳染性囊病病毒液等比混合使藥物終濃度為500、250、125 g/mL3 個濃度，設生理鹽水傳染性囊病病毒混合液對照，在37 ℃共同培育1 h 后，接種10 日齡SPF 雞胚尿囊膜，0.2 mL/枚，每個濃度接種6 枚SPF 雞胚，37 ℃孵育168 h，按Karber 法[3]測定各病毒混合液的ELD50，計算病毒滴度。

1.5 傳染性囊病病毒與中藥液共育后病毒滴度變化 與未加藥共育的病毒對照組比較，傳染性囊病病毒經與扶正解毒散微粉和扶正解毒散藥液共育后病毒滴度降低。 同一種藥物其高濃度組的傳染性囊病病毒滴度低于低濃度組。 扶正解毒微粉和扶正解毒散在同一濃度時，扶正解毒微粉組傳染性囊病病毒滴度低于扶正解毒散組(表2、表3、圖1)。

2 結果

各藥液對SPF 雞胚的安全濃度：各藥業從500 μg/mL 開始接種的雞胚全部存活，且發育和活力與對照組比較為正常，所以可將它們的最大安全濃度定為500 μg/mL(表1)。

表1 各種藥液接種雞胚后雞胚死亡和活力情況

表2 傳染性囊病病毒與藥液共育后的ELD50 變化

表3 傳染性囊病病毒與藥液共育后的病毒滴度變化

圖1 傳染性囊病病毒與藥液共育后的病毒滴度變化

3 討論

本試驗結果表明，在所選濃度范圍內由扶正解毒微粉和扶正解毒散制備溶液都可以降低病毒滴度值，且高濃度中藥效果優于低濃度中藥；同濃度扶正解毒微粉效果優于扶正解毒散。 表明扶正解毒微粉和扶正解毒散均具有抗病傳染性囊病病毒感染雞胚的能力，并且扶正解毒散微粉效果優于扶正解毒散。

本試驗結果表明扶正解毒微粉藥液與傳染性囊病病毒共育后的病毒滴度低于扶正解毒散藥液與傳染性囊病病毒共育后的病毒滴度，原因可能是微粉可以增加單位中藥或復方中中藥成分的溶出。黃一帆等[5]用高效液相色譜檢測了黃連解毒微粉和黃連解毒散中黃芩苷的含量，發現前者黃芩苷含量高出后者51.23%；張國祖等研究發現，100 ℃浸泡的扶正解毒微粉和扶正解毒散中淫羊藿苷前者比后者高出115%[6]。

4 結論

扶正解毒微粉體外具有很好抗病毒作用，且效果明顯優于扶正解毒散。 因此，扶正解毒微粉可以作為防治雞病毒病新獸藥進一步研究開發。