鹽酸林可霉素原料藥穩定性研究

劉學威，王靈靈，薛 娟，李貴文，王留國，秦寶福

(1.西北農林科技大學，陜西 西安 712100；2.天方藥業有限公司，河南 駐馬店 463000)

鹽酸林可霉素是一種高效的抗革蘭陽性菌的抗生素，在體內分布廣?？蛇M入骨髓和骨組織，臨床廣泛用于呼吸系統骨髓炎及軟組織感染等病癥的治療,尤其適用于對青霉素和紅霉素過敏的病人[1]。本研究采用極限試驗法加快鹽酸林可霉素中組分的分解變化，以高效液相色譜(HPLC)法測定其含量變化，考察鹽酸林可霉素產品在運輸過程中產品的穩定性。

1 儀器和材料

1.1 儀器

HWS-250智能型恒溫恒濕箱(寧波海曙賽福試驗儀器廠)，儀器CP225D天平(北京賽多利斯有限公司)，DK-S22型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏試驗設備有限公司)，KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，DL31卡爾菲休氏水分滴定儀(瑞士梅特列公司),Agilent1200高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)。

1.2 試劑

乙腈，甲醇，氨水，超純水，鹽酸林可霉素標準品批號n○3，雜質鑒別標準品n○1(來源EDQM)，鹽酸林可霉素樣品批號A1、A2、A3(天方藥業有限公司)。

2 方法和結果

2.1 穩定性考察指標

2.1.1 色譜條件

色譜柱：250 mm×4.6 mm×5μm，SUPELCOSIL LC-8-DB，頂端封尾堿基去活的辛烷基甲硅烷基硅膠為填充劑；柱溫：50℃；檢測波長：210 nm；流速：1 mL/min；進樣量：20μL；

pH值6.1緩沖液：(取34g的濃磷酸溶解于900mL的色譜級純化水中，用濃氨水調pH值至6.1，再用色譜級純化水稀釋至1000 mL)；

流動相∶甲醇∶乙腈∶緩沖液=8∶17∶75(V∶V∶V)，混勻后用微孔濾膜(φ0.45μm)過濾備用。

2.1.2 對照品制備

取25.0 mg的鹽酸林可霉素對照品，精密稱定，置于10.0 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度。

2.1.3 供試品溶液制備

取25.0 mg的鹽酸林可霉素樣品，精密稱定，置于10.0 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度。

2.1.4 線性關系考察

取對照品100 mg，精密稱定，置于20 mL容量瓶中，用流動相溶解定容搖勻，制成相對標準濃度200%的對照品貯備液，然后用流動相分別配制成0.1、0.4、0.8、1.0、1.2倍對照品溶液，每個樣進樣3次，記錄峰面積。取每個樣品平均值，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y=7.0×10-5X-0.0199，相關系數R2=0.99983，r=0.9991。結果表明鹽酸林可霉素在0.0003～3.0 mg/mL的范圍內有良好的線性關系。

2.1.5 精密度試驗

取上述1.0倍濃度鹽酸林可霉素對照液，連續進樣6針，峰面積RSD值為0.07%，進樣精密度高，重復性好

2.1.6 定量限與檢測限試驗

將對照液逐步稀釋，信噪比約大于等于10的濃度為定量限濃度，信噪比約大于等于3的濃度為檢測限濃度。定量限要低于忽略限度。經過確認該方法的定量限濃度為0.0003 mg/mL，相對標準濃度0.03%；檢測限濃度為0.00009 mg/mL，相對標準濃度0.009%。

2.1.7 溶液穩定性試驗

將供試樣品溶液每小時進樣一次，考察24h內溶液的穩定性，主成分鹽酸林可霉素的峰面積以RSD值計算(RSD不得大于0.85%)，林可霉素B和其他有關物質的含量的絕對值在±0.1%，并不得檢查出新的雜質，否則認為溶液不穩定，需要在溶液變化發生之前進樣。對24次進樣結果分析后，主成分鹽酸林可霉素RSD為0.23%，雜質A絕對值0.0%，雜質B絕對值0.0%，總雜質絕對值0.0%，林可霉素B絕對值0.0%。說明鹽酸林可霉素供試液在24 h內是穩定的。液相色譜圖如圖1。

圖1 液相色譜圖

方法學考察結果表明，該方法專屬性強，精密度高，定量限與檢測限低于忽略限度，線性關系良好，濃度范圍寬，溶液在24 h內穩定性良好，適合本試驗對鹽酸林可霉素含量與有關物質的檢測。

2.1.8 樣品的測定

分別將對照品溶液與供試品溶液按上述色譜條件測定，記錄峰面積，計算含量與有關物質。

2.2 方法

極限試驗：取市售批號A1、A2、A3三批，按照模擬市售包裝成小桶狀，將樣品在60℃±2℃，RH75±5%的條件下放置2個月，分別于第一個月末和第二個月末取樣檢測，如果檢測結果不合格停止試驗，如果試驗正常放入25℃±2℃，RH60±5%智能恒溫恒濕箱中繼續考察。

長期試驗：將樣品放在25℃±2℃，RH60±5%智能恒溫恒濕箱中，以極限試驗結束時間為0個月，每年檢測一次至48個月，按時取樣考察。如果不合格停止試驗。

3 結果與討論

3.1 極限試驗結果

在進行兩個月極限試驗后，鹽酸林可霉素的性狀與外觀均未發生變化，把水分和液相的檢測結果輸入Minitab處理后如圖2。

圖2 水分、林可霉素B、含量、總雜質與時間的散點圖

通過統計表可知在極限試驗2個月后，水分有輕微的升高。鹽酸林可霉素主成分RSD值變化分別為0.27%、0.35%、0.25%；林可霉素B和有關物質變化均在±0.1%以內。在目前使用的包裝樣式下，鹽酸林可霉素具有較好的穩定性。把水分和總含量結果分別用Minitabe穩定性考察工具進行處理，結果如圖3和圖4。

圖3 所有批次的穩定性(水分)

圖4 所有批次的穩定性(含量)

根據結果分析，鹽酸林可霉素在極限試驗中水分合格方程為：水分=0.0407+0.000833月，在極限條件下推測約3.8月水分將不合格。

Minitab計算含量回歸方程如下：

批次

A1 含量 = 0.99317 - 0.002167 月

A2 含量 = 0.99317 - 0.002167 月

A3 含量 = 0.99750 - 0.002167 月

估計穩定期

規格下限 = 0.96 規格上限 = 1.02

穩定期 = 以 95% 確信至少 50% 的響應在規格限內的時間期間

批次 穩定期(月)

A1 8.8686

A2 8.8686

A3 9.9833

整體 8.8686

經過分析，在極限條件下約8.9月鹽酸林可霉素含量能夠符合質量要求。

鹽酸林可霉素的極限穩定性結果說明本包裝在高溫高濕復雜環境中2個月能夠保證產品質量。經過極限試驗后對鹽酸林可霉素長期穩定性是否影響，需要進行長期穩定性試驗。

3.2 長期試驗結果

以極限試驗結束時間為0個月，把上述樣品置于25℃±2℃、RH60±5%智能恒溫恒濕培養箱中，分別于第12、24、36、48個月取樣分析，并與0月結果比較，判斷本品的穩定性。

把所有批次試驗結果輸入Minitab后進行處理分析結果如圖5和圖6。

圖5 水分、林可霉素B、含量、總雜質與月的散點圖

在長期試驗中，水分有較好的穩定性無顯著變化(P>0.05)；林可霉素B呈現下降趨勢，降解趨勢方程 林可霉素B = 0.0236 - 0.000042 月，含量有下降趨勢，總雜質變化不大。

圖6 雜質A、雜質B、任一雜質、總雜質與月的散點圖

在雜質檢測中，特定雜質與非特定雜質變化不大，體現出鹽酸林可霉素當前包裝在常溫中具有較好的穩定性。

圖7 所有批次的穩定性

使用Minitabe穩定性試驗工具分析含量結果后(圖7)，得出含量擬合線方程：含量=0.989-0.000147月，穩定期=141.41月。

鹽酸林可霉素原料藥經模擬包裝穩定性試驗考察，其試驗結果經數理統計表明：水分和含量在極限條件下2個月能夠保證產品質量，在極限條件下有關物質也變化甚微。在長期穩定性試驗48個月中，鹽酸林可霉素的各項指標均變化不大，說明該品種在當前包裝條件下性質較為穩定。在試驗中空氣中濕度對水分測定有直接影響，因此在檢定過程中，應注意容器的密封，操作時應盡量減少樣品、容器在空氣中暴露的時間，以免吸潮影響樣品真實值測定。

[1]童 婷.林可霉素發酵培養基優化實驗研究[J].江西化工,2006,12(4):173.

[2]劉雅華,史 蕙,黃 蓓,等鹽酸林可霉素膠囊穩定性考察[J].貴陽醫學院學報，2000，25(1):47.

[3]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(二部)[M]. 北京：中國醫藥科技出版社，2015.

(本文文獻格式：劉學威，王靈靈，薛娟，等.鹽酸林可霉素原料藥穩定性研究[J].山東化工,2018,47(7):22-25.)