2%雙唑草腈顆粒劑液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的分析方法

張 月， 李 衛(wèi)， 賈浩然， 李保同

(江西農(nóng)業(yè)大學(xué)國土資源與環(huán)境學(xué)院，江西南昌 330045)

雙唑草腈(pyraclonil)是由德國先令公司(現(xiàn)為拜耳公司)發(fā)現(xiàn)的雙吡唑類除草劑，屬原卟林原氧化酶(PPO)抑制劑，即當(dāng)PPO活性被抑制后，原卟啉原Ⅸ無法氧化生成原卟啉Ⅸ，葉綠素合成受阻，從而導(dǎo)致植物死亡[1-2]。雙唑草腈可被植物根、莖吸收，對稗草、續(xù)隨子、鴨舌草、耳葉水莧、鱧腸和一年生莎草等有很高的活性，目前國內(nèi)主要有2%顆粒劑登記用于稻田一年生雜草的防治[3-4]。有關(guān)雙唑草腈制劑有效成分含量的檢測方法已有高效液相色譜法[5]，而液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法尚未見報道。本研究采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，以乙腈-0.1%甲酸水作流動相，能夠很好地把雜質(zhì)分離，快速準(zhǔn)確地對雙唑草腈進行定量。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器

高效液相色譜儀：Agilent 1260(配自動進樣裝置)，色譜柱為Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；過濾器：過濾膜孔徑約0.22 μm；SB-5200DT超聲波清洗器；質(zhì)譜儀：Agilent 6120單級四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀。

1.2 試驗試劑

乙腈(色譜純)購自西隴科學(xué)股份有限公司；甲酸(≥88%，色譜純)購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；水(經(jīng)二次蒸餾)；99.4%雙唑草腈標(biāo)樣購自上海艾恩醫(yī)藥科技有限公司；2%雙唑草腈顆粒劑購自湖北相和精密化學(xué)有限公司。

1.3 色譜操作條件

1.3.1 液相色譜條件 流動相為乙腈-0.1%甲酸水(體積比為55 ∶45)；流速為0.8 mL/min；柱溫為30 ℃，進樣體積為10 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件 ESI離子源為正離子掃描；毛細(xì)管電壓為3 000 V；干燥氣(氮氣)流速為 12 L/min；霧化氣壓力為241.32 kPa；干燥氣溫度為350 ℃；分子質(zhì)量范圍為70～350；碰撞誘導(dǎo)解離電壓為100 V；闕值為70；增益為10.00；相對駐留為100%；選擇性離子檢測(selected ion monitor，簡稱SIM)質(zhì)荷比(m/z)設(shè)定為315.2。

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱取雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)品0.01 g(精確至0.000 1 g)置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，超聲波水浴助溶10 min，冷卻至室溫后，用乙腈定容并搖勻；取1 mL藥液置于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度并搖勻；再取1 mL稀釋液置于10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度并搖勻，過孔徑0.22 μm的濾膜，備用。

1.4.2 試樣溶液的配制 稱取2%雙唑草腈顆粒劑0.50 g(精確至0.000 1 g)置于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，超聲波水浴助溶10 min，冷卻至室溫后，用乙腈定容并搖勻；取1 mL藥液置于 50 mL 容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度并搖勻；再取1 mL稀釋液置于10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度并搖勻，過孔徑0.22 μm的濾膜，備用。

1.4.3 分析測定 在“1.3”色譜操作條件下，待基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液直至相鄰2針的豐度變化小于1.5%后，按標(biāo)準(zhǔn)溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)溶液的順序進樣測定，用外標(biāo)法分別計算雙唑草腈含量。雙唑草腈色譜見圖1。

1.5 計算

測得標(biāo)樣溶液和試樣溶液中雙唑草腈的豐度，計算試樣溶液中雙唑草腈的質(zhì)量分?jǐn)?shù)W2(%)。計算公式如下：

式中：A1為雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)品豐度；A2為試樣中雙唑草腈豐度；m1為雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)品稱樣量(g)；m2為試樣稱樣量(g)；W1為雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)化

參照文獻(xiàn)[5]，以雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)品為研究對象，分別考察乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液流動相對雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)品色譜分離的影響。結(jié)果表明，采用乙腈-水為流動相時，響應(yīng)值偏低，峰形展寬，出現(xiàn)較多干擾小峰；采用乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相可得到較好的峰形，能有效去除色譜柱中的雜質(zhì)殘留，提高離子化效率，優(yōu)化峰形，使靈敏度迅速提高。因此，最終以乙腈-0.1% 甲酸水溶液作為流動相。

為避免雜質(zhì)對檢測結(jié)果的干擾，提高檢測效率，對乙腈-0.1%甲酸水溶液的體積比進行優(yōu)化。結(jié)果表明，當(dāng)乙腈和0.1%甲酸水溶液體積比為55 ∶45時豐度最大(表1)。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

為優(yōu)化質(zhì)譜檢測參數(shù)，選擇全掃描檢測(Scan)模式，采用ESI離子源正離子和負(fù)離子模式對濃度為1 mg/L的雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)溶液進行掃描。結(jié)果表明，正離子模式下信號豐度遠(yuǎn)高于負(fù)離子模式，從而確定離子源為正離子掃描，進一步確定掃描的分子量范圍為70～350。再選擇SIM模式進行定量分析，確定被監(jiān)測的離子質(zhì)荷比為315.2。對離子、 碰撞誘導(dǎo)解離電壓等參數(shù)進一步優(yōu)化，最終確定了“1.3.2”中的質(zhì)譜條件。

表1 乙腈-0.1%甲酸水溶液體積比對保留時間和豐度的影響(雙唑草腈0.4 mg/L)Table 1 Effect of volume ratio of acetonitrile-0.1% formic acid water on retention time and peak area (pyraclonil 0.4 mg/L)

2.3 方法線性相關(guān)性的測定與檢出限

在確定的色譜和質(zhì)譜條件下，分別配制6個不同質(zhì)量濃度的雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.02、0.04、0.12、0.20、0.40、0.80 mg/L)，采用外標(biāo)法定量，以進樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、豐度為縱坐標(biāo)，求得線性方程為y=3×106x+68 852，r2=0.999 4，具有良好的線性關(guān)系(圖2)。

不同濃度雙唑草腈標(biāo)樣溶液按照文中“1.4”條件進行檢測，使信噪比在3.0(S/N=3)左右時，即為最低檢出限(LOD)。本試驗中雙唑草腈的質(zhì)量濃度為0.002 5 mg/L時，信噪比為2.6，即該方法雙唑草腈的LOD為2.5×10-8mg。

2.4 精密度測定

由表2可知，同一2%雙唑草腈顆粒劑中準(zhǔn)確稱取5份試樣，雙唑草腈顆粒劑的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.027，變異系數(shù)為1.22%，符合國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(CIPAC，<1.71%)的要求。

表2 2%雙唑草腈顆粒劑精密度測定結(jié)果Table 2 Precision measurement results of pyraclonil 2% GR

2.5 準(zhǔn)確度測定

由表3可知，稱取6份已知含量的2%雙唑草腈顆粒劑(2.01%)試樣于50 mL容量瓶中，分別加入一定量的雙唑草腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，雙唑草腈的回收率為98.10%～101.04%， 平均回收率為 99.51%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.471%。

表3 2%雙唑草腈顆粒劑準(zhǔn)確度測定結(jié)果Table 3 Accuracy determination results of pyraclonil 2% GR

3 結(jié)論

建立以液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定2%雙唑草腈顆粒劑的定量分析方法。該方法操作簡便，保留時間適中，與雜質(zhì)分離徹底，精密度和準(zhǔn)確度較高，線性關(guān)系良好，是雙唑草腈制劑較為理想的檢測分析方法。