不同炮制法白芍制品的芍藥苷含量檢測對比及其鎮痛效果研究*

王慧超，張 威，李鐵軍 ，許紅瑋

1.河南大學第一附屬醫院(開封 475000),2.河南中醫藥大學第一附屬醫院(鄭州 450000)

中藥白芍是干燥后的芍藥根部，性溫、味苦，具有鎮痛、養血、收斂、柔等功效，臨床上多用于肝火旺盛所致的血虛、腹痛、肋痛、肢痛等癥[1-3]。在中藥飲片中除了生白芍外還有多種白芍的炮制品，這些不同炮制法制備出的炮制品具有不同的功效。現代藥理學研究表明，白芍中主要成分芍藥苷是白芍發揮鎮痛、抗炎等作用的組份。因此白芍與其炮制品在臨床組方中主要發揮鎮痛作用[4-6]。而芍藥苷成分則成為白芍質量評價的主要指標。本院開展本次研究以明確不同白芍炮制品當中芍藥苷的含量及其鎮痛效果，旨在為今后臨床用藥的選擇提供參考。

材料與方法

1 藥品、儀器與試劑 本次研究所用白芍均購自同仁堂中藥飲片公司。涉及試劑及儀器：芍藥苷對照品、對乙酰氨基酚片、乙酸、甲醇、乙腈等試劑(北京萬佳首化生物科技有限公司出品)。屈臣氏蒸餾水，高效液相色譜儀。

2 試驗用動物 昆明小鼠(購自第四軍醫大學實驗動力中心)，60只，雄性體重為18～22g。

3 炮制方法 ①生白芍，將白芍適度清洗后以蒸餾水浸泡至清透，正常切片后常規干燥。②炒白芍，將生白芍進行清炒，觀察生品出現微黃色后停止炒制，自然冷卻。③酒制白芍，將生白芍完全浸泡于白酒中12 h，以文火炒制浸酒后的白芍至出現微黃色停止，自然冷卻。④醋制白芍，將生白芍完全浸泡于米醋中12 h，以文火炒制浸酒后的白芍至出現微黃色停止，自然冷卻；⑤將生白芍與麩皮共同炒制，炒至生白芍呈黃色偶見焦斑時停止，自然冷卻后篩去麩皮。每種各制備500 g。

將上述白芍炮制品研為粉末儲存備用；自每種白芍制品粉末中各取0.64 g，均置于25 ml容量瓶當中，于瓶中加20 ml甲醇混勻后浸泡30 min，以超聲處理30 min，自然冷卻后以甲醇定容至容量瓶的刻度，充分混勻后過濾。對照品的制備，稱取干燥芍藥苷對照品0.38 mg，置于5 ml的容量瓶當中，以甲醇定容，取得0.76 mg/ml濃度的的芍藥苷對照品。

4 檢測方法 以高效液相色譜儀檢測芍藥苷含量，使用250 mm×4.6 mm，5 μm的C18反相色譜柱；流動相使用乙腈-水；檢測波長為230 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為30 ℃。采用上述條件，進行方法學驗證試驗。芍藥苷標準曲線的繪制，取對照品溶液2 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10 μl、12 μl檢測，獲取峰面積后與濃度共同繪制出標準曲線；取 10 μl的進樣行重復實驗，驗證精密度；取同一批次的樣品另外制備6份樣品溶液，分別上樣10 μl校驗重現性；取6份測定含量后的樣品溶液，以對照品溶液上樣后測量，計算樣品回收率。測量不同白芍炮制品的芍藥苷含量，總共測量3次。

5 鎮痛效果實驗 將實驗小鼠隨機分為空白對照組、生白芍組、炒制組、醋制組、酒制組、麩炒組，每組各10只；以0.3%醋酸溶液于全部小鼠頸背部皮下注射。空白對照組小鼠以0.3 ml/10g(體重)蒸餾水灌胃；其它各組均取白芍炮制品30 g加入900 ml水中煎煮2次濃縮至30 ml，以0.3 ml/10 g(體重)灌胃。統計15 min內各組小鼠的扭體次數，以評估鎮痛效果。

6 統計學方法 全部數據均錄入至SPSS 20.0軟件進行統計學計算，計量數據均以單因素ANOVA分析，進一步兩兩對比以LSD-L分析；相關性以Pearson分析，以P<0.05為具有統計學差異標準。

結 果

1 芍藥苷含量 見表1。生白芍與各炮制品的芍藥苷含量均具有差異性(P<0.05)，其中生白芍含量最高；在白芍制品中麩炒白芍的芍藥苷含量最高為(63.26±0.19) μg。

表1 不同白芍炮制品芍藥苷含量統計對比表

2 鎮痛效果 見表2。各白芍泡制組扭體次數均少于空白對照組(P<0.05)；酒制組、醋制組間、炒制組、麩炒制組間無差異(P>0.05)；酒制組、醋制組間扭體次數少于生白芍組(P<0.05)；酒制組與醋制組鎮痛效果最佳。

表2 小鼠鎮痛實驗結果統計對比表

注：與空白對照組對比，★P<0.05;與生白芍組對比,☆P<0.05

3 相關性分析 經相關性分析，鎮痛效果與芍藥苷含量間無統計學相關性(r<0.3，P<0.05)。

4 不同白芍制品性狀 生白芍與不同白芍制品的性狀觀察見下表3所示。

表3 不同白芍制品性狀觀察特征描述明細

討 論

白芍也稱為白花芍藥，為毛茛科芍藥屬的植物，在我國許多地區均有栽培，種植歷史悠久。中醫中不同白芍制品有著不同主治功效，這與其不同的化學成分相關。芍藥苷為白芍的主要有效成分，具有退熱解痙、護肝養肝之功效。生白芍具有斂固滋陰、強效平肝的作用，主要與其芍藥苷的含量較高有關。白芍經過炒制后其芍藥苷的含量稍有下降，藥性更趨平緩，養血、滋陰的效果更加顯著；因此多應用于肝火旺盛、脾弱陰虛之癥。酒炒白芍能夠提高其多糖與鞣質的含量，白芍含有的多糖及鞣質具有理想的抗氧化、調節免疫力等功效，并可輔助發揮鎮痛作用，提高芍藥苷的起效速度；因此酒制白芍能夠和中緩急、快速鎮痛，特別適用于產后鎮痛當中。醋制白芍入肝經，加強了疏肝解郁、柔肝止痛之功效。麩炒白芍可加強養肝、柔肝的作用，緩解酸痛。中藥的藥理機制具有多層次、多靶點的特征，在臨床治療中具有獨特優勢。雖然中國藥典中將芍藥苷含量作為評估白芍質量的評價指標，但芍藥苷的評估無法全面涵蓋各種白芍炮制品的臨床用途。以往中醫中藥的傳承多以經驗為主體，在精準性、數字性方面有所欠缺，因此在臨床藥理學研究中應對白芍不同制品進行全面研究，為臨床應用的具體白芍制品選擇提供依據。

白芍是中藥組方中較為多用的一種中藥飲片，最主要的功能為鎮痛[7-8]。高效液相色譜法是檢測藥物有效成分的一種常用方法，該方法檢測結果穩定可靠[9-10]。在測定芍藥苷的含量時使用甲醇-水作為檢測流動相無法分離芍藥苷。本次研究中我們以乙腈-水作為流動相，測量過程當中的基線平穩，數據可靠，完全可以達到計劃分離效果。浸泡12 h可使芍藥苷的浸出達到最佳效果，超過12 h后隨著浸泡時間的延長其含量可出現下降[11-12]。因此本次研究中，我們在炮制過程中均采取浸泡12 h，以確保芍藥苷的含量被最大程度的浸出，且不會因浸泡時間過長而有所損失。

芍藥苷成分在生白芍飲片中含量為最高，炒、酒、醋法炮制后芍藥苷含量會有所降低[13]。不同炮制法的芍藥苷含量數值為生品芍藥大于醋炒芍藥、醋炒芍藥又大于酒炒芍藥。另外白芍藥中氨基酸、丹皮酚的含量亦受不同炮制方法的影響，因此，由于炮制方法的不同而引起的白芍多種成分的變化，即會使臨證用藥選擇更有針對性。為進一步證明中藥材經炮制后使用的科學性，現代藥理學對于經炮制白芍進行了多項藥理學研究，結果表明經幾種方法炮制后的白芍其藥效普遍增強，生白芍、炒白芍、醋炒白芍、酒炒白芍作用于離體兔腸，發現其自發振幅、收縮活動均呈現增強并與藥物劑量的增加呈正比，而且醋炒白芍各項作用最強[14-15]。此外清炒、醋炒、酒炒白芍可明顯拮抗腎上腺素性腸管蠕動抑制。以當代高科技炮制工藝針對中醫臨床用藥需求對白芍的多種方法炮制技術進行研究，有利于傳統炮制方法的革新，使中藥炮制工藝更快的發展、進步，更加科學、標準，以保證中藥材炮制產品的質量，促進我國中醫中藥更好的傳承發展。

本次研究結果表明，生白芍當中的芍藥苷含量最高，炒制品中的芍藥苷含量最低。這一現象可能與芍藥苷的性質并不完全穩定，而高溫的炮制過程可能導致芍藥苷含量部分喪失有關。通過動物鎮痛實驗證明，酒制白芍與醋制白芍的鎮痛作用最為理想。通過相關性分析可知，芍藥苷的含量與鎮痛效果間無統計學相關性，這一研究結果提示芍藥苷含量最高的生白芍具鎮痛效果并非最理想。芍藥苷的主要作用包含有鎮痛、抗炎、利尿、解痙、清熱等。因此在臨床應用時應考慮主要治療目的，并非單純以芍藥苷的含量作為用藥選擇的標準。

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