黃河三角洲刺參苗種繁育技術

王沖 孫同秋 崔玥 柴曉貞 國儉文

摘 要：為摸清黃河三角洲地區刺參繁育特性，提高刺參育苗技術，在顯微鏡下觀察、測量了胚胎和幼體的大小及胚胎發育過程。結果表明，在水溫22±0.5 ℃，鹽度（30±0.5）‰、pH 7.8條件下，利用陰干、流水刺激法可成功進行人工催產。受精卵經42 h完成胚胎發育變態為初耳狀幼體，7 d左右發育為大耳狀幼體，體長為760.0～970.0 μm；10 d左右生長發育為樽形幼體，16 d變態為稚參。

關鍵詞：刺參；幼體；發育；人工繁育

刺參（Apostichopus japonicus）隸屬棘皮動物門（Echinodermata），海參綱 （Holothuroidea），仿刺參屬（Apostichopus），是我國重要的海珍品養殖種類之一，具有很高的營養與藥用價值，富含黏多糖、皂苷和凝集素等多種生理活性物質，具有提高機體免疫力、抗炎、抗腫瘤、延緩衰老等功效[1]，深受消費者喜愛。目前，我國主要養殖區集中在山東、遼寧和福建沿海[2]。在山東，隨著“東參西養”的快速發展，形成了黃河三角洲地區以東營、濱州為主的刺參養殖新興產業帶，但苗種產量的不穩定性制約產業快速發展。筆者以黃河三角洲地區池塘養殖刺參為親參，通過人工催產，開展了工廠化刺參苗種生態繁育技術研究，以期為刺參人工繁育和養殖提供基礎生物學參考。

1 材料與方法

1.1 親參的采捕與管理

北方地區每年的5月份親參基本成熟，一般選擇在4月底或5月初進行親參的采捕與暫養。本次育苗所用親參為2017年4月下旬采捕于濱州市無棣縣池塘養殖個體，體長15～25 cm、體重250～350 g、參齡3～4年。親參采捕后暫養于室內育苗池中，前期為自然水溫、鹽度；然后采用升溫促熟培育親參，在暗光條件下，日升溫0.5～1 ℃，至18～20 ℃后恒溫養殖，密度一般為20～30頭/m3。每天投喂適量的配合飼料1次，同時進行例行管理，觀察刺參活動情況。

1.2 產卵與受精

在育苗生產過程中一般采用陰干流水刺激法進行人工誘導產卵。一般雄參先排，根據雄參排精量情況，及時將雄參挑出，以避免精子過多，待親參全部產完后，將其全部移出。視精子和卵子密度情況，判斷是否進行洗卵。受精卵在育苗池中進行培育，應進行充氣增氧和人工攪動，使受精卵在水體中均勻分布，以防止受精卵下沉堆積，局部缺氧，造成受精卵死亡而影響孵化。

1.3 幼體培育

幼體培育密度為0.5～1個/mL，受精卵經36～48 h發育后至初耳狀幼體，消化道形成，此時可投喂餌料，前期以海洋紅酵母和螺旋藻為主，每天7：30和17：30各投餌1次；后期添加鼠尾藻、配合飼料和海泥，每天投餌1次。在投餌前和投餌后對幼體進行鏡檢，根據其攝食情況，適當調整投餌量。當30%幼體變態成樽形幼體時，投放波紋板附著基。每天換水1次，換水量為全量的1/2。每天取樣1次，觀察幼體發育情況，并在光學顯微鏡下用目微尺測量幼體大小20個。幼體培育期間的水溫、鹽度變化如圖1所示。

2 結果

2.1 催產與受精

親參在室內培育15 d左右，在顯微鏡下檢查其性腺發育情況。經檢查性腺發育成熟，雄性性腺為乳白色，鏡檢精子活力好；雌性性腺為橘紅色，鏡檢卵子色澤均勻，個體飽滿。于5月10日采用陰干流水刺激法進行人工催產，陰干處理1.5～2 h，再流水刺激30 min，24：00時，刺參沿池壁上移至表層，活動劇烈。雄參先排精，呈白色細線狀向上浮，約30 min后受刺激的雌參開始產卵，產卵量為1.5億粒，呈橙色絨線狀向下沉。隨后，于5月17、18日再次產卵，產卵量分別為3億粒、5億粒。經鏡檢受精率達95%以上，同時，出現多精入卵現象。

2.2 幼體發育

受精卵一般經40～48 h發育形成初耳狀幼體，此時幼體體長為410.0～530.0 μm，消化道已基本形成，胃呈橢圓形，口前環和口后環清晰可辨。幼體依靠口前環的纖毛擺動攝食，可投喂開口餌料。發育到4 d時，幼體進入中耳狀幼體期，體長達550.0～750.0 μm。幼體形態和內部器官發生較大變化，胃部增大，攝食能力增加，胃部食物清晰可見。其體側脊上的纖毛帶發生彎曲和突出，前、后背臂逐漸形成。此時6對臂已清晰可辨，其中后側臂和間背臂最為發達。同時，水體腔位于胃和食道連接處的左側且逐漸增大。

經7 d左右發育為大耳狀幼體，體長進一步增長，達到760.0～970.0 μm。此時幼體胃部兩側分別出現呈長條狀的左、右兩個體腔，水體腔開始向外形成初級口觸手原基，最為發達的后側臂和間背臂顏色加深，并最早出現球狀體。9日齡時，幼體各臂尖端均出現球狀體，口和胃部發育到幼體期的最大值，胃部呈卵圓形，顏色加深，食物在胃內不斷轉動。此時在水體腔上，向外長出5個小囊，似手指狀分枝。

10日齡幼體進入樽形幼體初期，幼體開始收縮，幼體臂全部縮小，纖毛脫落，輪廓變得模糊。隨著身體的不斷收縮，纖毛帶呈橫向生長，形成橫環纖毛帶。胃部、消化道大幅收縮，與輻水管和初級口觸手團縮于體腔內，且初級口觸手顯著變大。11日齡時，體長縮至420.4 μm，顏色變深，不易觀察體內發育情況。隨后，發育為五觸手幼體，身體背部現刺狀突起，開始形成“X”型骨片，遍布全身。幼體下沉到附著基上，依靠第一管足和觸手進行爬行。刺參幼體的生長情況如圖2所示。

2.3 稚參培育

當大耳狀幼體有20%左右變態為樽形幼體時，投放附著基。附著基為40 cm×40 cm的聚乙烯波紋板，將波紋板放入專用的塑料框架上，每個框架放置20片，投放前需經浸泡、消毒處理。此時，稚參的附著密度一般為0.2～0.5頭/cm2，投放附著基前應控制好幼體密度。每天換水1次，方式為對流，一邊進水，一邊排水，換水量為1/2～1個全量，隨著水溫的升高和稚參的生產換水量逐漸增加。在投放附著基15 d左右（幼體全部附板7～10 d）倒池1次，此后，根據水質、水溫、密度等情況，5～7 d倒池1次。

3 討論

許多研究表明，精子和卵子的比例對其后續的胚胎和幼體發育具有直接影響，精子過少會使部分卵子不能受精，精子過多則會出現多精入卵現象，引起胚胎停止發育或出現非整倍體而導致胚胎的早期死亡[3-4]。因此，在刺參人工育苗過程中，需進行洗卵，大多數采用分池稀釋法或沉底濃縮法，及時降低精子密度，一般精卵數量比控制在3～5∶1，以保證卵子能正常受精。

在刺參幼體發育過程中，胃部的飽滿程度決定了幼體對餌料攝食和營養物質吸收，是幼體正常發育的重要因素；在大耳狀幼體階段，其水管的發育程度是決定耳狀幼體變態發育為樽形幼體的重要指標。因此，在刺參人工育苗過程中，幼體胃部的飽滿程度和水管的發育程度是育苗成敗的關鍵指標。有研究表明，球狀體的出現與否與幼體變態和附著密切相關[5]，投喂適量、適宜的餌料和改善育苗管理有助于提高幼體球狀體的出現率。在育苗過程中，通常采用微生態制劑進行底質、水質的改善，同時合理控制培育密度；在產卵后、布附著基、倒池等階段，及時投入抗菌藥，以預防爛邊病、爛胃病、滑板病等病害的發生。

參考文獻：

[1] 樊繪曾.海參：海中人參-關于海參及其成分保健醫療功能的研究與開發[J].中國海洋藥物，2001，20（4）：37-44.

[2] 姜森顥，任貽超，唐伯平，等.我國刺參養殖產業發展現狀與對策研究[J].中國農業科技導報，2017，19（9）：15-23.

[3] 孫新明，代遠玲，孫弋.體外受精過程中多精受精發生機制[J].井岡山學院學報：自然科學版， 2007， 28（6）： 76-79.

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[5] Dautov S.Structure and properties of hyaline spheres in holothuroid larvae[J].Invertebrate Reproduction and Development，1997，32（2）：155-161.