HBV相關慢加急性肝衰竭患者T淋巴細胞亞群和體液免疫指標檢測的臨床意義

謝能文，涂慧敏，何金秋，熊墨龍

(南昌市第九醫院重癥肝病科，南昌 330002)

在中國，HBV感染相關慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者占肝衰竭患者總數的70%～80%[1-2]。HBV-ACLF的發病機制目前尚不十分清楚，主要與HBV感染本身和機體免疫反應有關[3-4]。HBV是導致肝炎活動的始動因素，機體免疫反應可能是發生肝衰竭的關鍵因素，且其在肝衰竭早、中、晚期的免疫學動態變化與治療方案的制定、預后密切相關。但是，目前關于肝衰竭早、中、晚期免疫應答的動態變化規律仍不清楚，嚴重影響了治療效果。因此，本研究旨在通過檢測HBV-ACLF患者不同分期外周血T淋巴細胞亞群(CD4+、CD8+值和CD4+/CD8+比值)和體液免疫指標(IgG、IgM、IgA和補體C3)水平的變化，探討在肝衰竭發生發展過程中免疫應答規律、免疫狀態變化的特點及與預后之間的關系，為臨床判斷疾病預后和制定治療方案提供參考。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2014年2月至2015年3月在南昌市第九醫院收治的HBV-ACLF患者87例，所有病例診斷及早期、中期和晚期分期均參照2012年中華醫學會感染病學分會肝衰竭與人工肝學組，中華醫學會肝病學分會重型肝病與人工肝學組制定的《肝衰竭診治指南》[5]中的標準。其中早期HBV-ACLF患者(早期組)35例，男27例，女8例，年齡21～50歲，平均(29.9±3.5)歲；中期HBV-ACLF患者(中期組)30例，男23例，女7例，年齡23～55歲，平均(30.0±4.5)歲；晚期HBV-ACLF患者(晚期組)22例，男18例，女4例，年齡24～53歲，平均(32.7±3.4)歲。繼發感染患者(繼發感染組)47例，男35例，女12例，年齡21～55歲，平均(31.5±3.2)歲；無繼發感染患者(無繼發感染組)40例，男33例，女7例，年齡22～54歲，平均(29.6±4.2)歲。各組均排除年齡>60歲或<18歲，患有肝硬化、系統性紅斑狼瘡、甲狀腺功能亢進癥、類風濕性關節炎、糖尿病、獲得性免疫缺陷綜合征、結核、惡性腫瘤，6個月內使用過干擾素、糖皮質激素、其他免疫調節藥物的患者。選擇同期在本院門診體檢的健康體檢者(正常對照組)25例，男18例，女7例，年齡20～40(31.6±5.2)歲。均為本院員工，均血清HBsAg陰性，血清ALT<40 U·L-1，血清TBIL<17.1 μmol·L-1。各組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 研究方法

標本采集：各組晨空腹抽取肘靜脈血4 mL。2 mL 置于EDTA抗凝管中，用于CD4+、CD8+值和CD4+/CD8+比值的檢測；2 mL置于EDTA抗凝管中，2000 r·min-1離心15 min，取血清，放置-20 ℃ 冰箱保存，待測，用于IgG、IgM、IgA及補體C3的檢測。

檢測方法：使用美國BD公司生產的FACScalibur流式細胞儀及其配套試劑檢測血CD4+、CD8+值和CD4+/CD8+比值，具體操作根據儀器標準化操作程序進行。使用日本奧林巴斯公司生產的AU680全自動生化分析儀、采用免疫比濁法檢測血清IgG、IgM、IgA和補體C3的水平，試劑盒購自浙江愛康生物科技有限公司，具體操作根據試劑盒說明書及根據儀器標準化操作程序進行。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 各組血T淋巴細胞亞群水平的比較

中期、晚期2組CD8+值與正常對照組、CD4+/CD8+比值與早期組比較差異無統計學意義(P>0.05)，中期組CD4+、CD8+值和CD4+/CD8+比值與晚期組比較差異無統計學意義(P>0.05)，繼發感染組CD8+值與無繼發感染組比較差異均無統計學意義(P>0.05)。與正常對照組比較，早期、中期、晚期3組CD4+值、CD4+/CD8+比值均明顯降低，早期組CD8+值明顯升高(均P<0.05)；與早期組比較，中期、晚期2組CD4+、CD8+值均明顯降低，晚期組CD4+/CD8+比值明顯升高(均P<0.05)；與無繼發感染組比較，繼發感染組CD4+值、CD4+/CD8+比值均明顯降低(均P<0.05)。見表1—2。

組別nCD4+/%CD8+/%CD4+/CD8+比值正常對照組2545.1±2.123.0±3.41.9±0.4早期組 3540.2±3.1*28.1±5.6*1.4±0.2*中期組 3038.2±4.5*#25.0±4.1#1.5±0.3*晚期組 2237.8±3.7*#24.2±3.6#1.6±0.3*#

*P<0.05與正常對照組比較，#P<0.05與早期組比較。

組別nCD4+/%CD8+/%CD4+/CD8+比值繼發感染組 4735.8±3.5#25.5±4.61.4±0.3#無繼發感染組4040.2±2.826.1±5.21.6±0.4

#P<0.05與無繼發感染組比較。

2.2 各組血清體液免疫不同指標水平的比較

早期、中期、晚期3組血清IgM、IgA水平和中期、晚期2組血清IgM、IgA水平與正常對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，繼發感染組血清IgG、IgM、IgA水平與無繼發感染組比較差異無統計學意義(P>0.05)。與正常對照組比較，早期組血清IgG水平、血清補體C3水平和中期、晚期2組血清補體C3水平均明顯降低，晚期組血清IgG水平明顯升高(均P<0.05)；與早期組比較，中期、晚期2組血清IgG水平均明顯升高(均P<0.05)；與中期組比較，晚期組血清補體C3水平明顯降低(均P<0.05)；與無繼發感染組比較，繼發感染組血清補體C3水平明顯降低(均P<0.05)。見表3—4。

表3

早期

、

中期

、

晚期3組與正常對照組血清體液免疫不同指標水平的比較

組別nIgGIgMIgA補體C3正常對照組2513.70±3.201.40±0.502.40±0.501.20±0.35早期組 3511.20±4.50*1.50±0.402.40±0.700.92±0.27*中期組 3014.50±3.80#1.60±0.402.60±0.600.76±0.23*#晚期組 2215.60±5.20*#1.60±0.702.60±0.500.55±0.11*#△

*P<0.05與正常對照組比較，#P<0.05與早期組比較，△P<0.05與中期組比較。

表4

繼發感染組與無繼發感染組血清體液免疫不同指標水平的比較

組別nIgGIgMIgA補體C3繼發感染組 4713.80±3.001.60±0.502.60±0.800.65±0.20#無繼發感染組4013.20±2.601.50±0.402.50±0.200.90±0.30

#P<0.05與無繼發感染組比較。

3 討論

HBV感染機體后，導致肝細胞損傷的主要機制是細胞免疫反應[6-7]。D4+/CD8+比值是監測人體細胞免疫功能、反映機體細胞免疫狀態的重要指標，其比例失衡提示機體免疫功能的異常和免疫調節功能的紊亂[8]。

本研究結果顯示，與正常對照組比較，早期、晚期2組CD4+值、CD4+/CD8+比值均明顯降低，早期組CD8+值明顯升高(均P<0.05)；與無繼發感染組比較，繼發感染組CD4+值、CD4+/CD8+比值均明顯降低(均P<0.05)，提示HBV感染導致的HBV-ACLF各期存在不同程度的細胞免疫功能低下，不能有效清除體內病毒及外來抗原，導致病情加重和易并發感染；CD4+值的下降也可能與中期、晚期患者機體的抗原提呈細胞功能下降或CD4+T淋巴細胞耗竭有關[9]。與正常對照組比較，早期組CD8+值明顯升高(P<0.05)，但中期、晚期2組CD8+值與正常對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，其可能由于HBV-ACLF早期機體受到外來抗原及體內毒素的攻擊，為維持機體免疫環境穩定，CD8+值升高，以增強機體的清除功能，升高的細胞主要是細胞毒性T淋巴細胞，其在清除病毒的同時導致肝損傷，而在HBV-ACLF中期、晚期，肝細胞大塊壞死，出現明顯肝性腦病、肝腎綜合征、凝血功能障礙等肝功能失代償，同時由于大量外周淋巴細胞向肝臟組織內募集及負反饋調節，外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞計數下降[10-11]。

本研究結果顯示，與正常對照組比較，與正常對照組比較，早期、中期、晚期3組CD4+/CD8+比值均明顯降低(均P<0.05)；與早期組比較，中期、晚期2組CD4+、CD8+值均明顯降低，晚期組CD4+/CD8+比值明顯升高(均P<0.05)；中期、晚期2組CD4+/CD8+比值與早期組比較差異無統計學意義(P>0.05)，提示CD4+/CD8+比值沒有出現隨著病情加重而增加或者減少的趨勢，且HBV-ACLF在不同時期的炎癥反應及免疫狀態的動態變化是不同的，HBV-ACLF患者的細胞免疫功能紊亂。此外，與無繼發感染組比較，繼發感染組CD4+值、CD4+/CD8+比值均明顯降低(均P<0.05)；繼發感染組CD8+值與無繼發感染組比較差異無統計學意義(P>0.05)，其與文獻[12-13]研究的結果相一致，并提示由于HBV-ACLF患者細胞免疫功能下降，導致機體對外源性抗原的清除作用減弱，機體處于易感染階段。

目前，關于體液免疫在HBV-ACLF的作用的研究報道較少，筆者將HBV-ACLF不同分期的體液免疫相關指標作一研究。臨床上通常檢測IgG、IgM、IgA水平來反映機體的體液免疫狀態。本研究結果顯示，晚期組血清IgG水平明顯高于正常對照組、早期組(P<0.05)，但早期組血清IgG水平明顯低于正常對照組(P<0.05)，其與文獻[14-15]研究的結果不一致，其可能的原因是：1)無肝硬化基礎的HBV-ACLF患者在早期時，肝臟的庫普弗細胞功能尚完整，還能清除和處理自身抗原及從腸道吸收的外來抗原，從而不會產生過多的針對自身及外源性抗原的抗體；2)早期劇烈的抗原-抗體反應導致抗體的進一步消耗。

補體廣泛參與機體防御感染、保持內環境穩定及免疫調節作用，同時亦可介導免疫性病理損傷。在臨床上常用補體C3水平反映機體補體系統的功能狀態。因肝臟是合成補體C3的主要場所。當肝臟出現病變時，血清補體C3水平可發生相應變化。本研究結果顯示，與正常對照組比較，早期、中期、晚期3組血清補體C3水平均明顯降低(均P<0.05)，且隨著肝衰竭病情進展，血清補體C3水平逐漸下降，其與文獻[16-17]研究的結果相一致。

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