G試驗和GM試驗聯合檢測對肺侵襲性真菌病的診斷價值

李璐，柳楠楠

侵襲性真菌病即指真菌侵入人體組織、血液，在這些部位生存、繁殖，致使器官和組織損壞或產生炎癥反應的一類疾病[1]。肺侵襲性真菌病即真菌侵襲肺部，損傷了肺部功能，造成肺部出現病理變化[2]。患者常表現為咳嗽、干嘔、頭暈、失眠、無力、胸悶等癥狀。國內研究發現以念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉為主的絲狀真菌為最常見的病原菌[3]。為探討G試驗和GM試驗聯合檢測對肺侵襲性真菌病的診斷價值，本研究選取2016年8月～2017年8月在本院擬診為肺侵襲性真菌病患者設為觀察組，同時設立對照組（非感染組），對兩組人員各項指標進行了檢測，同時對各項指標在肺侵襲性真菌病中的診斷價值進行觀察，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年8月～2017年8月在本院擬診為肺侵襲性真菌病患者60例為觀察對象。納入標準：①存在真菌感染的高危因素；②存在臨床感染的證據。排除標準：①臨床資料不全者；②不愿參與本項研究者。根據納入排除標準共納入侵襲性真菌肺感染者60例，男35例，女25例，年齡36～68歲，平均（54.15±5.25）歲。對照組納入病例數60例，男30例，女30例，年齡35～70歲，平均（54.18±5.41）歲，其中40例疑似侵襲性真菌感染，20例排除肺部感染，兩組患者的臨床資料比較差異無統計學意義，有可比性。本項研究經醫院倫理委員會評審通過，且所有患者均知情同意。

1.2 儀器與試劑 MB-80微生物快速動態檢測系統，MK3酶標儀，T02智能恒溫儀，高速離心機，振蕩器。（1，3）-β-D葡聚糖檢測試劑盒，血清半乳甘露聚糖試劑盒。

1.3 方法 G試驗：通過振蕩將100μL血清與0.9 ml樣品處理液混勻，加熱10 min（70℃），放置冷卻槽內5 min，同時在主劑中加入600μL主劑溶解液進行溶解，混勻之后放置一邊，做待用準備。將100μL冷卻完畢的處理液與100μl主劑移至試管內，將兩者混勻，插入MB-80微生物快速動態檢測系統中反應，反應結束后儀器自動計算出血清中（1,3-β）-葡聚糖的含量。

GM試驗：將100μl處理液加至300μl待測血清中，將兩者混勻，水浴3 min（100℃），然后對其進行離心，離心10 min后取上清液，進行備用。在每個ELISA檢測孔中添加50μl結合液和經過處理的50μl上清液，在37℃環境下放置60 min。各孔加入350μl清洗液后，將其吸干，每孔再次加入200μL顯色液，常溫下避光放置半小時，每孔加入100μl終止液；在450 nm波長下，在酶標儀上讀取吸光度值。

1.4 統計學方法 本研究數據均用SPSS11.5統計軟件處理。計量資料用“x±s”表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者BALF GM、G實驗檢測結果的比較 肺侵襲性真菌感染組患者的血清GM、BALF GM和血清G試驗實驗結果高于對照組（t=-7.390、-16.462、-84.653，P＜0.001），見表1。

表1 兩組患者BALF GM、G實驗檢測結果的比較（x±s）Table 1 Comparison of BALFGM,Gtest results in two groups of patients(x±s)

2.2 不同檢測方法對肺侵襲性真菌病的診斷特異性和靈敏度比較 血清GM、BALF GM和血清G試驗聯合檢測的特異性和靈敏度明顯高于單項檢測，見表2。

表2 不同檢測方法對肺侵襲性真菌病的診斷特異性和靈敏度比較Table2 Diagnostic specificity and sensitivity of different detection methods for pulmonary invasive mycosis

2.3 肺侵襲性真菌病患者血實驗室指標與BALF GM、G實驗檢測結果的相關性 肺侵襲性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平與血清GM、BALF GM和血清G試驗單相和聯合檢測的準確性正相關，見表3。

3 討論

真菌通過感染氣管、支氣管和肺部組織等途徑，在氣道黏膜和肺部引發炎癥，進而造成肺部組織出現病理性損害的現象，稱之為肺侵襲型真菌病[4-6]。在該疾病中較為常見的病原菌為念珠菌為主的酵母樣真菌和以曲霉為主的絲狀真菌，常見于重癥監護室的患者、器官移植者及血液系統腫瘤患者[7]。隨著近年來廣譜抗生素和糖皮質激素應用的增加，導致侵襲性真菌的發病率逐年增高[8-11]。傳統的診斷方法如針吸或病理組織活檢，由于其操作有創傷性、敏感度低、檢出率低等因素，給臨床早期診斷帶來了一定困難。

表3 肺侵襲性真菌病患者血實驗室指標與BALF GM、G實驗檢測準確性的相關分析Table3 Correlation Analysis of blood laboratory indicators of patients with pulmonary invasive fungal disease and the accuracy of BALFGM and Gtest

肺部經受真菌感染時，（1,3-β）-葡聚糖通過釋放作用，出現在體液中，常通過G試驗進行侵襲性真菌（念珠菌屬、曲霉屬、毛孢子菌等）感染的早期診斷，但只能提示有無真菌侵襲性感染，并不能確定為何種真菌。而且抗生素的應用和輸注白蛋白會使患者體內葡聚糖含量增高，造成G試驗假陽性率增高。GM檢測的原理為：曲霉菌的菌絲在生長過程中，GM抗原從最薄弱的菌絲頂端釋放，是一類最早釋放的抗原，其釋放的多少與菌量呈正相關。GM試驗對診斷侵襲性曲霉感染特異性高，常可在患者臨床癥狀出現前幾天就獲得陽性結果，也可以作為治療效果的參考指標之一。但是免疫功能正常的患者，白細胞會吞噬半乳甘露聚糖抗原，造成GM試驗假陰性率增高。血清GM、BALF GM和血清G試驗聯合檢測特異性和靈敏度明顯高于單項檢測，差異有統計學意義（P＜0.05），降低了假陽性和假陰性率，彌補了各自的缺點。本實驗中G試驗的敏感度高于GM試驗，GM試驗的特異度高于G試驗。若兩者聯合檢測均陰性，可以排除侵襲性真菌感染。若兩者聯合檢測均陽性，則侵襲性真菌感染的可能性很大，尤其是曲霉菌感染。此外實驗室檢測WBC、NEU%和CRP三項指標的水平越高，代表其遭受病原菌侵襲的可能性越大，因此肺侵襲性真菌病患者的WBC、NEU%和CRP水平與血清GM、BALF GM和血清G試驗單相和聯合檢測的準確性呈正相關。

通過以上討論分析，G試驗和GM試驗聯合檢測在對肺侵襲性真菌病的診斷中具有較高敏感性和特異性，可作為臨床重要的輔助診斷指標。

參考文獻

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