PDCD4和凋亡抑制因子Livin在TNBC組織中的表達及與預后的相關性研究

戴小麗，張 清，邱 靜，劉一飛，馬林偉，張慧麗△

(1.江蘇醫藥職業學院，江蘇鹽城 224005；2.鹽城市第三人民醫院病理科，江蘇鹽城 224001；3.南通大學附屬醫院病理科，江蘇南通 226001)

乳腺癌是中國女性人群中最常見的惡性腫瘤，中國每年新發乳腺癌病例約占全世界新診斷乳腺癌病例的12.0%，死亡病例約占全世界癌癥死亡病例的9.6%。20世紀90年代至今，中國女性人群的乳腺癌發病率已增長近兩倍，而且很多乳腺癌患者確診時已進展到中、晚期，預后較差，乳腺癌已成為威脅中國女性人群身心健康的主要疾病之一[1]。乳腺癌是一種高度異質性的惡性腫瘤，包括多種生物學行為、臨床病理特點和分子生物學特征各不相同的類型，這些種類的乳腺癌對治療的反應和預后也存在顯著的差異[2]。三陰性乳腺癌(TNBC)是一種特殊類型的乳腺癌類型，是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長因子受體2(HER-2)均為陰性的乳腺癌，惡性度較高，預后較差，與TNBC預后相關的分子生物標記研究已成為學術界的焦點問題[3]。本研究針對程序性細胞死亡基因4(PDCD4)和凋亡抑制因子Livin在TNBC組織中的表達及與預后的相關性進行了研究和分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2008年1月至2013年12月醫院收治的臨床資料完整的TNBC患者100例作為研究對象，患者均為女性，年齡為24～68歲，中位年齡為42歲，所有納入患者術前均未經放化療治療，均經術后病理及免疫組織化學檢查證實為TNBC。臨床分期：23例為Ⅰ期，47例為Ⅱ期，30例為Ⅲ期。腋下淋巴結轉移患者72例，乳腺癌家庭史患者37例，脈管癌栓患者43例。

1.2方法 選取上述患者腫瘤組織標本100例，癌旁組織標本50例及正常乳腺組織標本50例，均為石蠟包埋標本，經切片、脫蠟、脫水后應用免疫組織化學法(S-P法)進行染色，對標本組織中的PDCD4、Livin蛋白的表達陽性率進行檢測和比較，PDCIM多克隆抗體和Livin蛋白單克隆抗體均購自美國UCL公司，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照，操作步驟嚴格按照試劑盒使用說明進行。隨機選取10個400倍視野，每個視野計數100個細胞，利用染色強度等級和陽性細胞得分率進行綜合分析，得分在3分及以上者為陽性表達。對納入患者進行隨訪，對其總生存期(OS)和無病生存期(DFS)進行觀察和比較。

2 結 果

2.1PDCD4、Livin蛋白表達陽性率的比較 3種組織標本中PDCD4和Livin蛋白表達陽性率比較差異均有統計學意義(χ2=48.033、60.442，P<0.05)。其中，腫瘤組織中PDCD4表達陽性率顯著低于癌旁組織或正常乳腺組織，比較差異均有統計學意義(χ2=26.613、32.000，P<0.05)，而癌旁組織與正常乳腺組織中的PDCD4表達陽性率比較差異無統計學意義(χ2=0.444，P>0.05)；腫瘤組織中Livin蛋白表達陽性率顯著高于癌旁組織或正常乳腺組織，癌旁組織中的Livin蛋白表達陽性率顯著高于正常乳腺組織，比較差異均有統計學意義(χ2=14.614、57.353、19.048，P<0.05)。

2.2TNBC組織中PDCD4、Livin蛋白表達與臨床病理特征的相關性 TNBC組織中PDCD4表達情況與腫瘤直徑、淋巴結轉移數量、臨床分期、腋下淋巴結轉移、脈管癌栓等臨床病理特征有關(χ2=26.936、13.210、22.774、27.463、5.803，P<0.05)，TNBC組織中Livin蛋白表達情況與淋巴結轉移數量、臨床分期、腋下淋巴結轉移、脈管癌栓等臨床病理特征有關(χ2=10.788、6.160、27.350、8.914，P<0.05)。

表1 本組患者OS和DFS的比較

圖1 Kaplan-Meier生存分析曲線

表2 不同PDCD4表達情況患者的OS、DFS的比較(月)

表3 不同Livin表達情況患者的OS、DFS的比較(月)

2.3TNBC組織中PDCD4、Livin蛋白表達與預后的相關性 本組100例病例的OS、DFS及其95%CI見表1、圖1。不同PDCD4、Livin蛋白表達情況患者的OS、DFS比較：PDCD4表達陰性患者的OS、DFS顯著低于PDCD4表達陽性患者，Livin蛋白表達陽性患者的OS、DFS顯著低于Livin表達陰性患者，以上差異均有統計學意義(χ2=23.931、19.163、22.649、17.213，P<0.05)，見表2、3，圖2、3。

圖2 不同PDCD4表達情況患者DFS的Kaplan-Meier生存分析曲線

圖3 不同Livin蛋白表達情況患者DFS的Kaplan-Meier生存分析曲線

2.4TNBC患者預后的相關因素分析 Cox風險模型分析結果顯示，TNBC患者的OS與年齡(RR=1.405)、臨床分期(RR=2.897)、腫瘤直徑(RR=2.722)、腋下淋巴結轉移(RR=2.516)、脈管癌栓(RR=3.020)、PDCD4表達(RR=1.752)、Livin表達(RR=2.051)等因素均具有相關性(P<0.05)，患者的DFS與臨床分期(RR=2.756)、腋下淋巴結轉移(RR=2.437)、PDCD4表達(RR=1.649)、Livin表達(RR=1.804)等因素均具有相關性(P<0.05)。

3 討 論

本研究結果說明TNBC組織中存在PDCD4的低表達和Livin蛋白的過表達，且它們的表達情況與腫瘤的臨床病理特征具有一定的相關性。PDCD4的低表達和Livin蛋白的過表達可導致患者生存期的縮短和預后的惡化，PDCD4和Livin蛋白有望成為預測TNBC預后的新型分子標志物。

PDCD4基因定位于人類染色體10q24，在許多腫瘤組織及細胞中均表達下調甚至喪失，低表達的PDCD4能夠促使腫瘤細胞增殖、侵襲和轉移[4]。在一般情況下，低表達的PDCD4提示腫瘤患者的不良預后，上調PDCD4表達會增加細胞對某些抗腫瘤藥物的敏感性，因此，PDCD4有望作為潛在靶點廣泛應用于腫瘤的診斷和靶向治療[5]。相關研究結果顯示，PDCD4表達缺失可能通過增加賴氨酰氧化酶的活性而促進乳腺癌細胞的浸潤，PDCD4表達缺失可能導致TNBC的高侵襲性[6]；也有研究顯示，PDCD4可作為抑癌基因P53 mRNA翻譯的調節因子，其低表達可直接導致P53 mRNA的翻譯水平和表達量的下調，是導致PDCD4表達缺失的TNBC預后較差的重要原因[7]；同時，有研究者發現，PDCD4表達的缺失可導致缺乏特異性治療靶點的TNBC對多柔比星及紫杉醇等常規化療藥物的耐藥[8]。

Livin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)最新的成員之一，特異性表達于人的胚胎組織及大多數人類實體瘤細胞和組織，在正常成人終末分化組織中低或無表達[9]。Livin主要通過抑制胱天蛋白酶23/27/29(Caspase-23/27/29)的活性來阻斷細胞凋亡過程，Livin可通過死亡受體、線粒體等途徑參與細胞凋亡的調節，參與腫瘤的發生、發展[10]。近年發現誘導產生特異性地識別Livin的抗體可抑制、殺死腫瘤細胞，可作為一個新型的靶點應用于腫瘤研究[11]。相關研究結果顯示，乳腺癌中Livin表達上調與乳腺癌的發生、發展及轉移、浸潤密切相關，并與患者的術后生存率具有相關性[12]。與非TNBC相比，Livin在TNBC異常表達更為顯著，這提示了分析Livin的表達水平對于評估TNBC的進展程度及預后更有意義[13]。針對Livin設計并合成的反義核酸序列轉染細胞株阻止Livin mRNA表達，以促進腫瘤細胞的凋亡，發揮抗腫瘤作用，這可能成為TNBC靶向治療的新方向[14]。

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