雙氫青蒿素聯合紫杉醇對乳腺癌細胞增殖的抑制作用研究

黃導 李凌晨 納鑫（通訊作者）

（1龍川縣婦幼保健院 廣東 河源 517300）

（2昆明醫科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室 云南 昆明 650500）

我國的乳腺癌發病率呈逐年上升的趨勢[1]。紫杉醇（taxinol，TAX）具有顯著的抗腫瘤活性，由于紫杉醇會產生耐藥，降低了其對乳腺癌細胞增殖的抑制作用，地限制了其在臨床乳腺癌治療中的療效。青蒿素類化合物對腫瘤抑制也有較好的效果,并且可增強某些化療藥物的敏感性，尤其以雙氫青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）抗腫瘤活性最強，有研究發現雙氫青蒿素能顯著抑制人乳腺癌細胞MCF-7的增殖[2]。為提高紫杉醇對乳腺癌細胞增殖的抑制作用，增強化療藥物的抗腫瘤效果，本研究通過聯合用藥，將紫杉醇和雙氫青蒿素兩種藥物同時應用于人乳腺癌細胞，對兩種藥物聯合使用是否可以起到更好的抑制腫瘤細胞增殖的作用進行檢測。

1.材料與方法

1.1 主要藥品和試劑

藥品 雙氫青蒿素：昆明制藥廠；紫杉醇注射液（紫素）：北京協和藥廠，批號：141203；主要試劑二甲基亞砜：Amresco產品，批號：0718A01；二甲基四氮唑藍：Amresco公司生產，批號：0793。

1.2 實驗方法

MTT對抑制率的檢測,分為五個組：選用紫杉醇做陽性對照藥物，分為空白組、溶媒對照組、單獨DHA組、單獨紫杉醇組、DHA+紫杉醇組。濃度梯度相同，5,10,20,40,80μmol/L，每組樣本設3個復孔，24小時、48小時后，每孔加入MTT溶液（5mg/ml）20μL,于37℃繼續孵育4h終止培養，記錄結果。抑制率=（溶媒組OD-實驗組OD/溶媒組OD）×100%IC50值由IC50值計算軟件得出。

1.3 統計學處理

2.實驗結果

實驗通過設置5種不同濃度的藥物作用于體外培養的人乳腺癌細胞MCF-7，分為空白組（沒有任何處理過的MCF-7細胞）、溶媒對照組、單獨DHA組、單獨紫杉醇組、DHA+TAX組。作用時間設置為兩組(24小時，48小時)采用四甲基偶氮唑鹽比色法檢測細胞增殖抑制率。結果顯示DHA對人乳腺癌細胞MCF-7有抑制作用，其中抑制率隨濃度和作用時間的增加而增加。紫杉醇對人乳腺癌細胞MCF-7的抑制作用較為明顯，作用24小時,48小時后，藥物的抑制作用隨著作用時間和給藥濃度的增加而增強。雙氫青蒿素、紫杉醇以及二者聯合用藥對MCF-7細胞的抑制率見圖1與圖2。

通過計算IC50值發現藥物作用24h或48h后，DHA+TAX聯合用藥組的IC50值比DHA組單獨給藥的IC50值分別要低35%，24小時DHA IC50為84.20mg/L DHA+PTX為54.40mg/L。

4.討論

紫杉醇是臨床治療乳腺癌的一線藥物。但腫瘤細胞耐藥性導致紫杉醇的臨床療效不斷降低依舊是一個有待解決的問題[3]。青蒿素是目前最有效且不易產生抗藥性的一線抗瘧藥，現發現其作用廣泛，對腫瘤生長的抑制作用亦是近年來研究的新熱點之一[4]。為提高紫杉醇對腫瘤細胞增殖的抑制作用，增強化療藥物的抗腫瘤效果，將雙氫青蒿素與紫杉醇同時作用于人乳腺癌細胞MCF-7，計算IC50值發現藥物作用24h或48h后，DHA+TAX聯合用藥組的IC50值比DHA組單獨給藥的IC50值分別要低35%，并且雙氫青蒿素和紫杉醇聯合用藥對人乳腺癌細胞MCF-7的抑制率要明顯高于兩藥單獨作用，且藥物抑制作用隨著作用時間和給藥濃度的增加而增強。

圖1 雙氫青蒿素、紫杉醇聯合用藥24h對MCF-7細胞的抑制率

圖2 雙氫青蒿素和紫杉醇聯合用藥48h對MCF-7細胞的抑制率

【參考文獻】

[1]林芳，錢之玉，薛紅衛，等。青蒿素和青蒿琥酯對人體乳腺癌MCF-7細胞的體外抑制作用比較研究[J].中草藥，2003，34（4）：347-349.

[2]陳堯堯。二氫青蒿素的抗腫瘤活性研究進展[J].廣西中醫藥大學學報，2012，3：72-74.

[3]LEE J P，HAHN H S，HWANG S J，et al.Selective cyclooxygenase inhibitors increase paclitaxel sensitivity in taxane-resistant ovarian cancer by suppressing P-glycoprotein expression [J].J Gynecol Oncol，2013，24(3)：273-279.

[4]劉玉翠，楊陽，金嵩，等.雙氫青蒿素抗腫瘤機制的研究進展[J].吉林醫藥學院學報，2014，3：216-218.