青海地區乳腺癌患者外周血液MTDH基因表達水平的初步研

張雙元 梅士娟 劉震 張晨如 措羊 米曉琳 董顯花 孔令達

（1青海大學附屬醫院腫瘤外科二科 青海 西寧 810001）

（2青海大學醫學院基礎部 青海 西寧 810001）

乳腺癌是嚴重影響中國女性健康的疾病之一，出現復發、轉移是最主要的死亡原因，因此，控制復發和轉移對降低乳腺癌患者的死亡率具有決定性作用[1]。異黏蛋白(metadherin，MTDH)最早是在感染了人免疫缺陷病毒(HIV-1)的人原始胚胎星形細胞中被克隆出來的，在多種腫瘤組織中高度表達。體內外研究也發現，MTDH 基因的表達可以調控腫瘤細胞的生長、增殖等，進而影響腫瘤的進展與轉移[2]。為了明確青海地區乳腺癌患者外周靜脈血液中MTDH的表達狀況，本文采用聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reactio,PCR ）法進行了初步研究。

1.實驗材料

1.1 材料來源

收集2015年1月至2016年12月，青海大學附屬醫院腫瘤外科二科收治的41例乳腺癌患者和47例健康對照組人群的新鮮外周靜脈血液各1.5ml，提取RNA。

1.2 試劑

外周靜脈血檢測MTDH的表達用PCR法檢測。TRI Reagent?BD試劑、紅細胞裂解液、TIANScript RT Kit cDNA第一鏈合成試劑盒、2×PCR MasterMix、D2000 Marker、DNase/RNase-Free 去離子水及其它分子生物學試劑均購自北京天根生物化學試劑公司。

1.3 試驗方法

外周靜脈血檢測MTDH的表達用PCR法檢測。

1.3.1 總RNA完整度的檢測 采用Trizol一步法提取的血液總RNA經電泳檢測可見清晰的28S和18S兩條rRNA條帶，其中28S條帶亮度兩倍于18S帶（圖1），表明組織總RNA完整性良好。

1.3.2 檢測基因循環數確定

（1）GAPDH內參基因

GAPDH內參基因擴增循環數從20次增至29次，每個循環取出1管，進行電泳分析發現，當循環數進入24時，已經達到指數擴增的初中期，因此，確定24為后期實驗檢測循環數。

圖1 血液總RNA提取電泳圖

圖2 GAPDH內參基因循環數電泳圖與光密度分析

（2）MTDH基因

MTDH基因擴增循環數從26次增至35次，每個循環取出1管，進行電泳分析發現，當循環數進入29時，已經達到指數擴增的初中期，因此，確定29為后期實驗檢測循環數。

1.4 統計方法

全部實驗數據均采用均數±標準差表示，采用SPSS17.0統計軟件分析處理。使用秩和檢驗進行統計分析，以P＜0.05為有統計學意義。

圖3 MTDH基因循環數電泳圖與光密度分析

2.結果

（1）組間MTDH基因表達變化檢測

用凝膠分析系統分析實驗結果，測出目的基因及內參照的灰度值，并計算二者的比值，為mRNA相對表達量。結果顯示，乳腺癌患者和正常健康對照組間MTDH基因mRNA表達差異有統計學意義（P＜0.05）。

圖4 部分MTDH和GAPDH內參基因擴增電泳圖

（2）乳腺癌組和對照組血液MTDH基因mRNA表達

乳腺癌組外周血MTDH基因mRNA表達(0.81±0.66)，健康組外周血MTDH基因mRNA表達(0.64±0.55)，P=0.019，統計學具有差異。見表。

表 乳腺癌組和對照組血液MTDH基因mRNA表達

3.討論

近年來，乳腺癌已成為威脅女性健康的主要原因之一。乳腺癌是全身性疾病，早期就有可能發生全身微轉移，因此，即使一開始就對患者實行手術、放療、化療的綜合性治療，仍有一部分患者會發生復發和轉移。分子生物學研究表明，抑癌基因的滅活、細胞信號轉導通路的異常、癌基因的激活等因素，對乳腺癌發生和發展起關鍵作用。因此迫切需要繼續在分子水平研究乳腺癌的發生、發展，尋找其他的治療途徑，進一步提高乳腺癌的治療效果[3]。

異黏蛋白(metadherin，MTDH)，又被命名為星狀細胞上調基因-1（astroycyte elevated gen-1，AEG-1）。MDTH是原癌基因，定位于染色體8q22.1，是存在于核膜、內質網及核仁內的跨膜蛋白，其功能是調節與腫瘤發生、發展相關的分子信號途徑。MDTH參與惡性腫瘤的進展的主要過程，包括腫瘤侵襲和轉移、抑制細胞轉化、促進腫瘤血管生成、抵抗化療藥物、促進腫瘤細胞增殖和生長。MTDH在多種腫瘤細胞中過表達，且與惡性程度的增高呈正相關，如肝癌、黑色素瘤、前列腺癌等，而在良性組織或正常組織中則不表達或低表達。有研究認為，敲除MTDH基因可以提高乳腺癌細胞對多種化療藥物的敏感性，如順鉑、阿霉素和紫杉醇。因此我們可以初步判斷MTDH有可能為龐大的、繁雜的腫瘤信號網絡通路中的一個關鍵位點，是調節惡性腫瘤發生、發展的重要分子。

有關青海地區乳腺癌患者外周靜脈血MTDH基因的表達狀況尚未見報道。本研究采用PCR技術發現，在青海地區乳腺癌患者外周血中MTDHmRNA為0.81±0.66，健康組外周血MTDH基因mRNA表達為0.64±0.55，提示MTDH基因在青海乳腺癌患者中處于高表達狀態。

綜上所述，我們初步斷定，MTDH在青海地區對乳腺癌的發生和疾病進展或有著重要的作用，需要進一步進行深入研究。

【參考文獻】

[1]張思維，陳萬青，孔靈芝，等.中國部分市縣2003年惡性腫瘤發病年度報告[J].中國腫瘤，2007，16(7)：503.

[2]Emdad L，Sarkar D, Su ZZ，et a1.Astrocyte elevated gene-1：recent insights into a novel gene involved in tumor progression,metastasis and neurodegeneration[J].Pharmacol Ther.2007.114：155-170.

[3]Yoo BK, Emdad L, Su ZZ, et al.Astrocyte elevated gene-1 regulates hepatocellular carcinoma developmenl and progression[J].J Clin In.vest 2009.119：465-469.