不同ELISA試劑檢測傳染病四項弱反應性結果的比較

鄧飛 韓惠云 來祝檁

[摘要] 目的 對比進口和國產幾種不同廠家品牌的試劑對HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、抗-TP傳染病四項的檢測結果，觀察分析不同試劑對傳染病四項檢測弱反應性結果的差異。方法 2017年1—12月無償獻血者血液標本47 586份，應用不同全自動酶免分析儀進行ELISA 2次檢測，并對除梅毒以外的167份弱反應性樣本利用NAT檢測技術進行確認。結果 47 586份樣本中HBsAg弱反應性120份（伯樂71份;萬泰49份）;抗-HCV弱反應性20份（麗珠5份;萬泰15份）;抗-HIV1/2弱反應性27份（麗珠5;伯樂22）;抗-TP弱反應性98份（麗珠41;萬泰57），167份弱反應性樣本NAT檢測結果HBV DNA有反應性5份（其中伯樂3;萬泰2）;HCV RNA有反應性0份;HIV-1 RNA有反應性0份;梅毒螺旋體離體存活時間短不進行核酸檢測。結論 不同試劑對傳染病四項檢測弱反應性結果存在差異，盡管存在假反應性結果的可能，但核酸檢測發現仍有輸血殘余風險，單獨使用都有可能存在漏檢。為了進一步提高臨床輸血安全水平，2次ELISA檢測在血液篩查中仍有實際應用價值。

[關鍵詞] ELISA;NAT;傳染病四項;弱反應性;血液篩查

[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）08（c）-0162-02

酶聯免疫吸附實驗（ELISA）是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術[1-2]。其方法簡單，方便訊速，特異性強，目前仍廣泛應用于醫療及采供血機構[3]。國內絕大部分采供血機構對獻血者篩查可經血傳播感染的檢測項目和方法的模式，仍主要以選擇2個不同生產廠家的ELISA試劑檢測為主，進行2次ELISA方法的血液篩查。目前我國采供血機構已普遍開展NAT檢測，血液篩查策略下一步可能有所改進。為此，選取2017年1—12月無償獻血者血液標本47586份將不同ELISA試劑對傳染病四項檢測弱反應性結果進行了統計分析和比較，并利用NAT檢測技術進行確認?，F報道如下。

1? 材料與方法

1.1? 標本來源

采集的無償獻血者血液標本475 86份，EDTA-K2和肝素鈉抗凝真空采血管（各1支，每管5 mL）用于ELISA檢測，帶分離膠EDTA-K2抗凝真空采血管（1支5 mL）用于核酸檢測。所有標本均嚴格按照《血站技術操作規程（2015版）》采集、保存。

1.2? 試劑

初檢試劑：法國伯樂乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、珠海麗珠丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、珠海麗珠人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒、珠海麗珠梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒。復檢試劑：北京萬泰乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、北京萬泰丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、法國伯樂人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒、北京萬泰梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒。HBV DNA、HCV RNA、HIV-1RNA核酸檢測試劑盒（PCR熒光法）（上海浩源生物科技有限公司）。經中國藥品生物制品檢定所批檢合格，在有效期內使用。

1.3? 主要儀器

Uranus AE 200全自動酶免分析儀2臺（深圳愛康公司），ChiTas BSS1200 全自動核酸純化儀（上海浩源生物科技有限公司），ABI 7500實時熒光定量PCR系統（美國ABI公司），TDL5B臺式大容量低溫離心機（長沙英泰公司）。

1.4? 方法

將采集的血液標本離心后，由不同的檢驗人員采用2種試劑使用不同的設備進行2遍ELISA項目（HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、抗-TP）平行檢測，均按試劑說明書進行操作，四項檢測s/co值<0.7為無反應性; 1>s/co≧0.7為灰區，判為弱反應性;s/co值≥1.0為有反應性。

1.5? NAT檢測

應用NAT 檢測方法將167份（HBsAg 120;抗-HCV 20;抗-HIV1/2 27）弱反應結果進行檢測。無反應性的判為NAT陰性，有反應性的判為NAT陽性。

2? 結果

無償獻血者血液標本弱反應性檢測結果（除去兩種試劑都弱反應性），見表1、2、3、4。

3? 討論

自從ELISA試驗建立以來，隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新，加之自動化程度極高的ELISA檢測儀的使用，使ELISA更為簡便實用和標準化，從而使其成為最廣泛應用的檢測方法之一[4-5]。該采供血機構采用部分為國產試劑和進口試劑聯合使用對血液標本進行檢測，實際應用中發現2次篩查的弱反應性結果不一致，從上述結果可以看出，每一相同項目不同試劑所檢測的弱反應性結果相差較大。其中存在假反應性結果的可能，因ELISA測定中影響因素較多，操作過程中每個環節都會對試驗結果產生影響，試劑、樣本以及操作因素都可能影響檢測結果。但從表5可以看出，167份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV弱反應性結果經NAT檢測后，有5份HBV DNA陽性（其中伯樂3;萬泰2），說明經過兩家試劑ELISA檢測后，仍存在輸血殘余風險，特別是HBV殘余風險，在兩家試劑ELISA檢測弱反應性結果中均存在HBV DNA陽性。另外，NAT檢測不進行梅毒螺旋體病毒檢測，所以從血液安全角度考慮，用ELISA方法實施2次HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的血液篩查更有利于保障血液安全。

ELISA國產試劑與進口試劑弱反應性檢測結果也存在較大差異，國產試劑的檢出率較進口試劑低。HBsAg弱反應性國產試劑檢出率49/47 586，進口試劑檢出率71/47 586;抗-HIV弱反應性國產試劑檢出率5/47 586，進口試劑檢出率22/47 586。檢測結果說明進口試劑靈敏度更高，在我國現有經濟條件下結合使用國產試劑和進口試劑，重復2次ELISA方法篩查對保障血液安全仍有意義。開展核酸檢測后是否減去一遍酶免檢測需經過更加充分深入的研究。

[參考文獻]

[1]? 白潔，何靈，周建，等.傳染病四項不同檢測方法的臨床應用價值對比分析[J].標記免疫分析與臨床，2016，3（6）：688-690.

[2]? 《血站技術操作規程》2015版.

[3]? 王良華，鄔旭群，鮑自謙，等.不同ELISA試劑HBsAg初復檢結果的比較[J].中國輸血雜志，2007，20（2）：124-125.

[4]? 劉玉強.FAME試劑槽對不同ELISA試劑檢測結果的影響分析[J].檢驗醫學與臨床，2017（14）：256-257.

[5]? 李榮.不同HIV—ELISA診斷試劑檢測結果比較[J].中國社區醫師：醫學專業，2011，13（22）：248-249.

（收稿日期：2018-05-23）