紅河州13種食用花卉的總黃酮、總多酚含量測定

嚴和平，洪亮，徐進諾，羅玉芹，陳雅順，許春，歐朝鳳，張舉成，*

（1.紅河學院理學院，云南蒙自661199；2.云南省天然藥物與化學生物學重點實驗室，云南蒙自661199；3.紅河學院生命科學與技術學院，云南蒙自661199；4.浙江環茂自控科技有限公司，浙江杭州310051）

云南擁有中國二分之一的植物資源，是植物資源極為豐富的“天然花園”。云南省東南部的紅河哈尼族彝族自治州居民多有食用花卉的習慣，劉怡濤[1]在2001年首次全面報道了云南經常食用的花卉種類有303種之多。事實上，作為植物精華的鮮花除了食用價值外，還具有觀賞和藥用價值。花卉中含有的豐富的黃酮[2-3]、多酚類物質[4]氨基酸、微量元素、維生素等物質[5]，受到保健食品開發者的青睞。其中的多酚類和黃酮類化合物在抗氧化、抗菌、抗病毒、抗微生物、抗腫瘤、調血脂和降血糖[6-13]等多方面具有良好的效果，從而對人的身體健康起到一定程度的保護作用。紅河州食用花卉種類繁多，由于缺乏現代科學試驗分析，得到開發利用的卻是鳳毛麟角。本文對云南省紅河州居民經常食用的13種花卉中的總黃酮和總多酚含量進行了測定，以期為云南省紅河州地區食用花卉的深度利用和新型天然功能食品的開發提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

金雀花（Caragana sinica）、苦刺花（學名：白刺花，Sophora davidii）、桂花 （學名：木犀，Osmanthus fragrans）、石榴花（Punica granatum）、芭蕉花（Musa sapientum）、菊花（Chrysanthemummorifolium）、馬桑花（學名：桑椹，Morus alba）、棠梨花（Pyrus pashia）、黃飯花（學名：密蒙花，Buddleja officinalis）、玉荷花（學名：羊蹄甲，Bauhinia purpurea）、雞屎臭藥花（學名：纈草，Valeriana officinalis）、簾子藤花（學名：威靈仙，Clematis chinensisOsbeck）、貓屎花（學名：鼠麴草，Gnaphalium affine）：所用花卉均由菜市場采購。

1.1.2 試劑

蘆丁標準品（純度≥98%）、一水合沒食子酸標準品（純度＞99%）：阿拉丁試劑有限公司；Folin-phenol試劑：國藥集團化學試劑有限公司；乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉均為分析純：國藥集團化學試劑有限公司；水為娃哈哈純凈水：浙江娃哈哈飲用水有限公司。

1.2 儀器與設備

TU-1950雙光束紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限責任公司；DHG-9145A電熱恒溫鼓風干燥箱、THZ-100恒溫培養搖床：上海一恒科學儀器有限公司；OSB-2100恒溫水浴鍋：上海安亭科學儀器廠；AR1140電子分析天平：梅特勒-托利多國際貿易（上海）有限公司；DY-300粉碎機：南陽東億機械設備有限公司；Brand移液槍：德國Brand公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品制備

13種花卉分別在60℃烘干至恒重，經粉碎過200目篩，低溫、避光、密封儲存備用。平行精密稱取3份1.000 g研磨好的各種花的粉末于150mL圓底燒瓶中，加入 80%的乙醇溶液，料液比 1∶20（g/mL），80℃恒溫水浴浸提160min，過濾，濾液用60%的乙醇溶液定容至50mL，待測。

1.3.2 含量測定

1.3.2.1 總黃酮含量測定

總黃酮含量采用雙波長分光光度法進行測定[14-15]。準確量取一定量樣液于10mL比色管中，分別加入質量分數5%亞硝酸鈉溶液和10%硝酸鋁溶液各0.2mL，搖勻，放置6min，再加入質量分數4%氫氧化鈉溶液2.0mL，加水定容至5mL，絡合反應15min，在510 nm和584 nm條件下測定。同時進行空白實驗。總黃酮提取率（以蘆丁計，%）的計算公式為（1）式。

式中：C為測試樣品液的黃酮質量濃度，μg/mL；V

式中：C為測試樣品液的多酚濃度，μg/mL；V為提取液總體積，mL；K為提取液稀釋倍數；m為樣品質量，g。

1.3.3 標準曲線繪制

1.3.3.1 蘆丁標準曲線繪制

精密稱取蘆丁標準品10mg，用60%乙醇溶解并定容至100mL容量瓶中，制成100μg/mL的儲備液。分別精密吸取 0、0.10、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60mL 的儲備液于比色管中，加60%乙醇至10 mL，按照“1.3.2.1”的方法，測定波長510、584 nm條件下的吸光度值，得到吸光度差值△A=A510nm-A584nm，以蘆丁濃度（x）為橫坐標，吸光度差值△A（y）為縱坐標，繪制蘆丁標準曲線，得到蘆丁的標準曲線回歸方程為y=16.149x+0.000 5（R2=0.999 2），表明蘆丁標準溶液在 0～32 μg/mL范圍內，濃度與吸光度差值呈良好的線性關系。

1.3.3.2 沒食子酸標準曲線繪制

精密稱取干燥的沒食子酸標準品2.5mg，蒸餾水溶解并定容至10mL，制成250μg/mL的儲備液，再準確移取1.00mL儲備液定容至10mL，制成25μg/mL的沒食子酸標準溶液。分別精密吸取25μg/mL沒食子酸標準溶液 0、0.10、0.20、0.40、0.80、1.20、2.00 mL，按照“1.3.2.2”的方法，測定波長765nm條件下的吸光度值。以沒食子酸標準溶液濃度為X軸，吸光度為Y軸，建立沒食子酸吸光度（Y）與標準品濃度（X）之間的線性回歸方程：y=128.48x+0.029 26（R2=0.998 2），表明沒食子酸標準溶液在0～10μg/mL范圍內，濃度與吸光度呈良好的線性關系。為提取液總體積，mL；K為提取液稀釋倍數；m為樣品質量；g。

1.3.2.2 總多酚含量測定

依據GB/T 8313-2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》中多酚的測定方法，在765 nm處有最大吸收波長，利用紫外分光光度法測定食用花卉提取液中總多酚含量。總多酚含量（以沒食子酸計，%）的計算公式為（2）式。

2 結果與討論

2.1 試驗條件優化結果

2.1.1 黃酮測定條件優化結果

2.1.1.1 5%亞硝酸鈉溶液的體積對黃酮含量的影響

分別取 5%亞硝酸鈉溶液 0.1、0.2、0.3、0.4mL 加入到體系中，按上述“1.3.2.1”的方法進行測定，結果見圖1。

圖1 5%亞硝酸鈉溶液的體積對黃酮含量的影響Fig.1 Effectof the volum eof 5%NaNO2 solution on the flavones content

圖1 表明：當5%亞硝酸鈉溶液的體積在0.1mL～0.4mL之間時，測量體系的相對標準偏差為0.915%，即5%亞硝酸鈉溶液的體積在0.1mL～0.4mL之間時，對試驗結果影響不大，結合參考文獻[14]，選擇測定時5%亞硝酸鈉溶液用量為0.2mL。

2.1.1.2 10%硝酸鋁溶液的體積對黃酮含量的影響

分別取 0.1、0.2、0.3、0.4mL 10%硝酸鋁溶液加入體系中，按上述“1.3.2.1”項的方法進行測量，結果見圖2。

圖2 10%硝酸鋁溶液的體積對黃酮含量的影響Fig.2 Effectof the volum eof 10%A l（NO3）3 solution on the flavones content

圖2 表明：體系中10%硝酸鋁溶液體積的加入量從0.1mL增加至0.2mL時，黃酮檢出量也逐漸增加；體積從0.2mL增加至0.4mL時，對黃酮的檢測影響不大，體系的相對標準偏差為0.943%，結合參考文獻[14]，選擇測定時10%硝酸鋁溶液用量為0.2mL。

2.1.1.3 4%氫氧化鈉溶液的體積對黃酮含量的影響

分別取1.0、1.5、2.0、2.5mL 4%氫氧化鈉溶液加入體系中，按上述“1.3.2.1”項的方法進行測量，結果見圖3。

圖3表明：體系中4%氫氧化鈉溶液體積的加入量從1.0mL增加至1.5mL時，黃酮檢出量也逐漸增加；體積從1.5mL增加至2.5mL時，對試驗結果影響不大，體系的相對標準偏差為0.469%，結合參考文獻[14]，選擇測定時4%氫氧化鈉溶液用量為2.0mL。

圖3 4%氫氧化鈉溶液的體積對黃酮含量的影響Fig.3 Effectof thevolumeof4%NaOH solution on the flavones content

2.1.2 多酚測定條件優化結果

2.1.2.1 15%碳酸鈉溶液的體積對多酚含量的影響

按“1.3.2.2”的方法，沒食子酸標準溶液0.4mL，顯色劑 Folin-phenol為 0.2mL，分別加入 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.8、1.0、1.2mL 15%碳酸鈉溶液，避光反應 1.5 h，在765 nm測定吸光度，結果見圖4。

圖4 15%碳酸鈉溶液的體積對多酚含量的影響Fig.4 Effectof the volum eof 15%Na2CO3 solution on the polyphenols content

由圖4可知：15%碳酸鈉溶液用量從0.1mL增加至0.4mL時，沒食子酸的檢出量逐漸增加，15%碳酸鈉溶液用量為0.4mL時濃度值最高，之后，15%碳酸鈉溶液用量從0.4mL增加至1.2mL時，沒食子酸的檢出量都比0.4mL用量時小，因此本試驗15%碳酸鈉溶液用量選用0.4mL。

2.1.2.2 Folin-phenol試劑的體積對多酚含量的影響

按“1.3.2.2”的方法，沒食子酸標準溶液0.4mL，15%碳酸鈉用量 0.8mL，分別加入 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mLFolin-phenol試劑，避光反應 1.5 h，在765 nm測定吸光度，結果見圖5。

圖5 Folin-phenol試劑的體積對多酚含量的影響Fig.5 Effectof thevolumeof Folin-phenolagenton the polyphenolscontent

由圖5可知：Folin-phenol試劑用量從0.1mL增加至0.4mL時，沒食子酸的檢出量增大，Folin-phenol試劑用量為0.4mL時達到最高，之后，Folin-phenol試劑用量從0.4mL增加至0.7mL時，沒食子酸檢出量逐漸減小，因此本實驗Folin-phenol試劑用量選用0.4mL。

以后的樣品均在0.4mL 15%碳酸鈉溶液、0.4mL Folin-phenol試劑的條件下進行測定。

2.2 穩定性試驗

2.2.1 總黃酮測定的穩定性試驗

按“1.3.2.1”的方法配制好待測體系后，在 5、10、15、20、25、30、35、40、45、60、90、120、150、180min 時測定，結果見圖6。

圖6 總黃酮的穩定性實驗結果Fig.6 The resultsof stability experim entof total flavonoids

從圖6得出，隨反應時間從5min增加到180min，體系在510 nm和584 nm處的吸光度差值逐漸下降，提示黃酮檢出量在下降，15min后測定結果的RSD值大于5%，說明總黃酮反應體系在15min內穩定，以后樣品均在反應15min的條件下進行測定。

2.2.2 總多酚測定的穩定性試驗

按“1.3.2.2”的方法配制好待測體系后，在10、20、30、40、50、60、90、120、150min 時測定，60min 內間隔10min測定一次，60min后間隔30min測定一次，結果如圖7。

圖7 總多酚的穩定性實驗結果Fig.7 The resultsof stability experimentof totalpolyphenols

從圖7得出，在0到60min以內，該反應體系的多酚檢出量一直上升，在90min后基本保持不變，在150min內測定結果的RSD為2.67%，表明該方法在1.5 h內穩定性較好，以后樣品均在反應1.5 h的條件下進行測定。

2.3 方法精密度試驗

分別取一定量的蘆丁和沒食子酸標準溶液，按試驗條件優化結果，各平行試驗5次，結果見表1。

表1 精密度試驗結果Table1 The precision experimental results

黃酮和多酚檢測結果的相對標準偏差（RSD）分別為3.76%和4.27%，表明該檢測方法的精密度良好。

2.4 樣品含量測定

2.4.1 食用花卉中總黃酮含量測定

每種花卉粉末樣品稱取1.000 g，平行3次，并按“1.3.1”的方法制備樣品液，取一定體積的樣液按“1.3.2.1”的方法測定，同時進行空白試驗，結果見表2。

表2 13種食用花卉的總黃酮和總多酚含量Table2 Total flavonesand totalpolyphenolscontents in 13 types edible flowers

續表2 13種食用花卉的總黃酮和總多酚含量Continue table2 Total flavonesand totalpolyphenols contents in 13 typesedible flowers

由表2可知：13種食用花卉總黃酮含量順序是：桂花＞黃飯花＞棠梨花＞貓屎花＞玉荷花＞雞屎臭藥花＞簾子藤花＞芭蕉花＞石榴花＞馬桑花＞菊花＞金雀花＞苦刺花。13種食用花卉的總黃酮含量差別較大，含量最高的是桂花，為23.93%；含量最低的是苦刺花，為0.22%，兩者總黃酮含量相差一百倍之多。

經大量文獻檢索表明，紅河州13種食用花卉中，苦刺花、馬桑花、棠梨花、雞屎臭藥花、貓屎花的總黃酮含量鮮見報道。在文獻[16]中，桂花的總黃酮含量為（233.01±7.42）mg/g，與本次試驗值相當。文獻[17-22]中金雀花、石榴花、芭蕉花、黃飯花、玉荷花、簾子藤花的總黃酮含量與本文測定值比均偏高，可能的原因是文獻中采用正交試驗設計、響應面法設計獲得針對該種花的最佳提取工藝。進行提取時，能使其黃酮類化合物得到充分、有效的提取。建議以后對食用花卉開發利用時，在最佳提取工藝條件下進行。

2.4.2 食用花卉中總多酚含量測定

每種花卉粉末樣品稱取1.000 g，平行3次，并按“1.3.1”的方法制備樣品液，取一定體積的樣液按“1.3.2.2”所述方法測定，同時進行空白試驗。結果見表2。由表2可知：13種食用花卉總多酚含量順序是：石榴花＞桂花＞棠梨花＞貓屎花＞黃飯花＞雞屎臭藥花＞玉荷花＞簾子藤花＞芭蕉花＞菊花＞金雀花＞馬桑花＞苦刺花。在考察的13種食用花卉中，除桂花和黃飯花外，其余花卉總多酚含量均高于總黃酮含量。總多酚含量以蒙自的石榴花最高，為13.16%，苦刺花最低僅為0.83%。

經大量文獻檢索表明，紅河州13種食用花卉中，金雀花、苦刺花、芭蕉花、馬桑花、棠梨花、黃飯花、玉荷花、雞屎臭藥花、簾子藤花、貓屎花的總多酚含量鮮見報道。在文獻[16]中，桂花的總多酚含量為（90.60±6.88）mg/g，與本次實驗值相當。石榴花中多酚的研究報道不多，很多研究者都把目光集中在石榴皮和石榴籽中多酚研究上。

2.5 回收率試驗

分別各取3份已知黃酮和多酚含量的金雀花樣品，準確加入1.00mg蘆丁或沒食子酸標準溶液后，按照“1.3.2.1”和“1.3.2.2”進行試驗，分別計算得到黃酮和多酚的回收率，結果見表3。

表3 回收率試驗結果（n=3）Table3 The recovery experim ental results（n=3）

黃酮的平均回收率為98.8%，多酚的平均回收率為97.5%；黃酮和多酚回收率3次測定的RSD值分別為1.08%和2.86%，小于3%，表明回收率結果良好。

3 結論

對紅河州13種食用花卉中的總黃酮和總多酚進行了提取和測定，并對各種花中的總黃酮和總多酚含量進行了比較，結果表明總黃酮含量順序是：桂花＞黃飯花＞棠梨花＞貓屎花＞玉荷花＞雞屎臭藥花＞簾子藤花＞芭蕉花＞石榴花＞馬桑花＞菊花＞金雀花＞苦刺花。總多酚含量順序是：石榴花＞桂花＞棠梨花＞貓屎花＞黃飯花＞雞屎臭藥花＞玉荷花＞簾子藤花＞芭蕉花＞菊花＞金雀花＞馬桑花＞苦刺花。桂花的黃酮含量高于其他測試花卉，并且其多酚含量也僅次于石榴花位居第二；石榴花的多酚含量最高。無論是總黃酮和總多酚的含量均是苦刺花最低。

13種紅河州食用花卉中馬桑花、棠梨花、雞屎臭藥花、貓屎花的總黃酮含量鮮見報道；金雀花、苦刺花、芭蕉花、馬桑花、棠梨花、黃飯花、玉荷花、雞屎臭藥花、簾子藤花、貓屎花的總多酚含量鮮見報道。對紅河州經常食用的13種花卉中的總黃酮和總多酚含量的測定，為這些食用花卉的深度開發利用提供了理論依據。

13種紅河州食用花卉中石榴花中的多酚含量最高，并且紅河州有大面積種植的石榴資源，可以為進一步開發石榴花提供原料支持，同時能為當地種植業創收。棠梨花中黃酮和多酚含量均較高，可以進一步研究開發為功能型保健食品，從而提高附加值。

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