MRP 1蛋白表達情況與乳腺癌新輔助化療療效的關系

王文勝，馬志強，張冠男，張筱揚，李帥，吳海濱，師丙帥，趙愛國，何建鑫

河南大學第一附屬醫院乳腺甲狀腺腫瘤外科，河南開封4750000

乳腺癌是中國女性發病率最高的惡性腫瘤，全世界約12.2%的新發乳腺癌和9.6%的乳腺癌死亡病例出現在中國[1]。流行病學研究顯示，乳腺癌的發病率可達56～105/10萬，且近年來中國大陸地區發病率呈逐漸上升的趨勢[1-2]。新輔助化療是目前乳腺癌系統性化療方式之一，通過靜脈應用化療藥物，促進腫瘤病灶組織的萎縮，為改善乳腺癌的遠期生存預后提供基礎。但新輔助化療的治療敏感性存在明顯差異，部分化療不敏感的患者，治療后遠處轉移發生率或中位生存時間等主要指標均無明顯改善[3-4]。越來越多的研究顯示，分子生物學相關因子的改變，是影響乳腺癌新輔助化療效果的重要因素，其中之一是能夠干預耐藥相關蛋白1（multidrug resistance associated protein 1，MRP1）的表達，影響化療藥物的攝取及代謝，干預靜脈化療效果[5]。為了進一步揭示MRP1在乳腺癌新輔助化療過程中的作用，本次研究選取實施新輔助化療的150例患者進行回顧性分析，探討了MRP1的異常表達及其與化療效果的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月至2016年1月于河南大學第一附屬醫院實施新輔助化療的150例患者的臨床資料進行回顧性分析，根據化療效果分為有效組105例及無效組45例。納入標準：①乳腺癌的診斷、治療標準參考《中國抗癌協會乳腺癌診治指南與規范（2013版）》[6]；②所有患者均經空心針穿刺取活組織檢測確診；③新輔助化療前患者的血液學檢測正常；④具有影像學可測量的實體病灶；⑤美國東部腫瘤協作組織（ECOG）評分0～2分。排除標準：①轉移性乳腺癌；②既往伴有干燥綜合征、系統性紅斑狼瘡等免疫性疾病；③既往具有放化療史；④伴有精神疾病或認知功能障礙；⑤伴有明顯的甲狀腺功能亢進。有效組，年齡34～67歲，平均（52.4±10.5）歲；病灶大?。海? cm 65例，≤2 cm 40例；組織學分級：高分化30例，中分化49例，低分化26例；TNM分期：Ⅱ期72例，Ⅲ期33例。無效組，年齡36～65歲，平均（50.9±11.3）歲；病灶大小：＞2 cm 32例，≤2 cm 13例；組織學分級：高分化8例，中分化12例，低分化25例；TNM分期：Ⅱ期21例，Ⅲ期24例。

1.2 標本采集及免疫組化染色

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進行反復洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5 min，加入MRP1蛋白抗體（鼠來源，購自abcum公司），37℃孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標記的二抗抗體（購自abcum公司），37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖液進行洗滌，采用顯色劑（購自南京凱基生物制劑公司）顯色，封片，鏡下觀察。

免疫組化結果判定：MRP1蛋白的陽性著色表達于細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色表達。①根據著色強度：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；②根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。兩種積分相乘總分＜3分為“－”表達，3～5分為“+”表達，6～9分為“++”表達，＞9分為“+++”表達；總分＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.3 新輔助化療方案

多西紫杉醇+表柔比星（TA）方案：第1天給予75 mg/m2多西紫杉醇及75 mg/m2表柔比星靜脈滴注。多西紫杉醇+順鉑（TP）方案：第1天75 mg/m2多西紫杉醇及75 mg/m2順鉑靜脈滴注，21 d為一個療程。多西紫杉醇+環磷酰胺+曲妥珠單抗（TCH）方案：第1天多西紫杉醇75 mg/m2靜脈滴注，第1天環磷酰胺500 mg/m2靜脈滴注，21 d后重復，共6個療程；第1天曲妥珠單抗2 mg/kg靜脈滴注，21 d后重復，共6～8次。連續化療21 d為一個周期，化療的過程中同時給予對癥治療，化療療程結束21 d后行手術治療[6]。

新輔助化療方案同時包括紫杉醇類或蒽環類藥物，HER陽性的患者同時聯合抗HER治療，但避免與蒽環類藥物同時應用，必要時可以采用序貫方案化療：多柔比星或表柔比星+環磷酰胺4個療程后轉紫杉醇或多西他賽4個療程[6]。

1.4 療效判斷

采用日本Panasonic公司生產的IU-22系列超聲診斷儀器進行檢查，檢查時超聲頻率設置為5.0～6.5 MHz，選擇腫瘤最大直徑平面，檢測腫瘤病灶組織的直徑。依據中華醫學會制定的相關標準[3]，將新輔助化療后的患者根據病灶變化分為：完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、疾病穩定（SD）、疾病進展（PD）。CR：可見病灶完全消失，維持1個月以上；PR：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小達到50%及以上；SD：腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積縮小＜50%，增大＜25%；PD：患者出現1個或多個病灶的腫瘤最大直徑及最大垂直直徑的乘積≥25%。其中CR+PR定義為有效，SD+PD定義為無效。

1.5 統計學方法

采用SPSS 16.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）進行統計描述；計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；多因素分析采用非條件Logistic回歸分析法；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MRP 1蛋白表達程度

無效組患者的MRP1蛋白表達強度大于有效組，差異有統計學意義（χ2=3.504，P＜0.001）。（表1）

表1 兩組患者MRP 1蛋白表達情況[ n（%）]

2.2 臨床特征比較

有效組與無效組患者的年齡、月經狀態、病灶直徑、化療方案及淋巴結轉移情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；有效組Ⅱ期患者及高+中分化患者比例高于無效組，差異有統計學意義（P＜0.05）。（表 2）

2.3 療效影響因素的多因素分析

以患者臨床療效作為自變量，TNM分期、組織學分級、MRP1蛋白表達作為因變量進行非條件Logistic回歸分析，結果顯示TNM分期增高、組織學分級低分化、MRP1蛋白陽性表達是乳腺癌患者化療效果不佳的獨立危險因素（P＜0.05）。（表3）

表2 兩組患者臨床特征的比較

表3 多因素分析結果

3 討論

新輔助化療治療乳腺癌的臨床效果，主要體現為下列兩個方面：①新輔助化療能夠減輕乳腺癌病灶組織對乳腺周邊正常組織的浸潤程度，為手術提供根治性切除的條件；②新輔助化療能夠降低癌細胞的增殖速度，促進癌細胞的凋亡，在降低癌細胞的復發及轉移等方面發揮積極的臨床意義，改善患者的高腫瘤負荷癥狀，降低患者的病死率。

生物學因子的改變，能夠影響癌細胞DNA的轉錄調控和癌細胞的多種生物學特征，干預乳腺癌的病情進展[7-8]。MRP1在惡性腫瘤的發生發展過程中發揮了重要的作用，能夠調控ATP依賴性跨膜轉運蛋白的激活，加劇紫杉醇類或鉑類化療藥物的排泄，并能夠通過形成囊泡機制，加劇化療藥物的代謝[9-10]。同時MRP1能誘導惡性腫瘤細胞微環境的形成，增強其對于腫瘤細胞膜的保護作用，抑制腫瘤細胞的破壞和降解[11-12]。MRP1已經被證實在甲狀腺癌、卵巢癌、肝癌等惡性腫瘤的耐藥過程中發揮了一定的作用，其能夠降低靜脈化療的敏感性，提高腫瘤細胞對于靜脈化療藥物的耐藥程度。但迄今為止缺乏對于MRP1表達的研究及其對乳腺癌新輔助化療結局關系的研究。

本次研究發現，在乳腺癌新輔助化療有效的患者中，MRP1蛋白陰性或弱陽性表達率較高，而陽性或強陽性表達率較低，提示MRP1蛋白的表達與乳腺癌的化療結局具有密切的關系，從機制上考慮MRP1蛋白的表達與乳腺癌新輔助化療臨床結局的關系，可能與下列兩個方面的因素有關：①MRP1蛋白的陽性表達，能夠刺激乳腺癌細胞上游DNA調控因子或者轉錄因子的激活，增強癌細胞的增殖風險；②MRP1蛋白通過配體結合的信號通路機制，促進囊泡的釋放，并增強囊泡包裹癌細胞內化療藥物的能力，促進化療藥物的排出。張馨等[13]和姚宇鋒等[14]研究者在探討不同化療效果的乳腺癌血清學分子生物學因子譜后發現，MRP1蛋白的陽性表達率每下降10%，乳腺癌新輔助化療的臨床效果可上升5%左右，同時乳腺癌患者的5年生存率越高，病死率越低，MRP1蛋白的陽性表達率越低。在探討不同的臨床特征對乳腺癌化療結局的影響過程中發現，TNM分期、組織學分級是影響化療結局的危險因素，原因可能是化療難以完全殺滅這類患者的亞臨床腫瘤細胞，最終出現復發轉移，導致化療藥物作用的失敗。最后，本次研究發現MRP1蛋白陽性表達也是乳腺癌患者化療效果不佳的獨立危險因素，進一步提示了MRP1蛋白對于乳腺癌化療結局的影響。

綜上所述，本研究探討了乳腺癌患者臨床特征，尤其是MRP1蛋白表達與乳腺癌新輔助化療效果之間的關系。研究表明MRP1蛋白陽性表達是乳腺癌患者新輔助化療無效的獨立危險因素，二者是否存在直接或間接關聯，尚需進一步研究證實。但臨床上對于MRP1蛋白陽性表達的乳腺癌患者，系統性治療除化療外，還應考慮更多綜合性的治療措施，以期改善乳腺癌患者的預后。

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