關(guān)于多菌靈殘留量檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究

王俠文 楊澤川

摘 要：多菌靈應(yīng)用范圍廣，在農(nóng)作物中殘留量的檢測(cè)十分重要。基于此，試驗(yàn)建立了蘋果、梨、桃、橙四種多菌靈的

的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法。結(jié)果表明，多菌靈在四種水果中的平均回收率為93.2%～109.3%，RSD 為5.0%～9.6%，

其準(zhǔn)確度及其靈敏度均滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。

關(guān)鍵詞：多菌靈殘留量；液相色譜；基質(zhì)效應(yīng)

水果含有豐富的礦物質(zhì)、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，廣受歡迎。但是，在成長(zhǎng)過(guò)程中常使用農(nóng)藥多菌靈來(lái)抗菌防霉。多菌靈又稱苯駢咪唑44號(hào)，化學(xué)名稱為2-（甲氧基氨基甲酰）苯駢咪唑，是一種廣譜、高效、內(nèi)吸性殺真菌農(nóng)藥，目前，已廣泛用于水果種植生產(chǎn)。由于其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不易降解，而且有一定的毒性，能夠持久地殘留在果品蔬菜中，導(dǎo)致多菌靈殘留累積，可通過(guò)食物鏈，對(duì)人引起興奮、抽搐、精神恍惚、惡心嘔吐、頭昏頭疼、胸悶、上腹壓痛等中毒癥狀，影響人體健康。因而，對(duì)其殘留量進(jìn)行檢測(cè)具有必要性。

1.實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與設(shè)備

Acquity uplc H-Class和Xevo TQD液相/串聯(lián)質(zhì)譜儀

（ 美國(guó)Waters 公司）， Sigma3k15 型離心機(jī)（ 德國(guó)）；Acquity BHE C18色譜柱（ 100 mm×2.1 mm，內(nèi)徑1.7μm）；電子天平（精確到0.01g）；渦旋振蕩器；0.22μm有機(jī)系針孔濾膜過(guò)濾器；以及實(shí)驗(yàn)室常規(guī)實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

1.2試劑與材料

多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1000μg/mL（農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心）；超純水；乙腈和甲醇均為色譜純（ Fisher 公司）；樣品前處理試劑盒和凈化包（C18、PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）GCB）（美國(guó)Agilent公司）。

1.3實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

將多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000μg/mL）用甲醇以及4種水果的空白溶劑分別稀釋至0.2、0.1、0.05、0.02、0.01μg/mL工作溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.2試樣制備

樣品用組織搗碎機(jī)搗成勻漿，與4℃冷藏保存。

1.3.3樣品提取與凈化

準(zhǔn)確稱取樣品15g（精確至0.01g）于50mL離心管中，加入15mL0.1%的乙酸乙腈，渦旋振蕩30s，取出上清液加入萃取試劑盒（6gMgSO4，1.5g乙酸鈉）經(jīng)振蕩離心后取2mL上清液加入帶有50mgPSA，150mgMgSO4的離心管中。渦旋離心后過(guò)0.22μm有機(jī)系針孔濾膜后，上機(jī)。

1.4儀器條件

1.4.1液相色譜條件

流動(dòng)相：乙腈（A相），0.1%甲酸水溶液（B相）；淋洗梯度見(jiàn)表1所示，運(yùn)行時(shí)間：11min，進(jìn)樣量10μL，柱溫：40℃。

1.4.2質(zhì)譜條件

離子檢測(cè)方式為多反應(yīng)離子檢測(cè)（MRM）和子離子掃描，極性為正離子（positive），離子化方式為電噴霧離子化（ESI），毛細(xì)管電壓為：4000V，干燥氣溫度為：330℃，干燥氣流速為：8.0L/min，霧化氣壓力為：40psi，采用的離子對(duì)為m/z：192.2～160.2和192.2～132.2，碰撞能量分別為：15和20，用于定量的離子對(duì)為：192.2～132.2。

2.結(jié)果與分析

近年來(lái)，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析法在國(guó)際上已廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥多殘留分析，是一種快速、簡(jiǎn)單、有效的樣品前處理方法。步驟簡(jiǎn)便使得對(duì)農(nóng)藥的損失減小，試劑的消耗降低。一般水果采用PSA+MgSO4，含色素的水果采用GCB+PSA+MgSO4，GCB能去除水果中色素從而減少色素對(duì)樣品結(jié)果的影響。

2.1線性范圍和檢出限、定量限

取多菌靈溶液0.2、0.1、0.05、0.02、0.01mg/L的純?nèi)軇┘安煌瑯悠返幕|(zhì)空白溶劑上機(jī)檢測(cè)，以待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制線性方程如表2所見(jiàn)。結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)均大于0.9969，檢出限為0.10～0.15μg？kg-1，定量限為0.37～0.49μg？kg-1，均低于殘留限量。

2.2方法回收率和精密度

在四種水果中按40、100μg/kg兩種水平添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)水平重復(fù)5次，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)見(jiàn)表3，平均加標(biāo)回收率在（93.2%～109.3%），提取效果好，穩(wěn)定性高，方法的回收率及精密度均符合檢測(cè)要求。

2.4基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)就是樣品中的干擾物影響目標(biāo)化合物的離子化，使得目標(biāo)化合物在儀器上的響應(yīng)發(fā)生增強(qiáng)或抑制的現(xiàn)象，為提高目標(biāo)化合物測(cè)定的準(zhǔn)確性，需要對(duì)基質(zhì)效應(yīng)作出評(píng)價(jià)，并選擇合適方法消除或減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。本實(shí)驗(yàn)分別用甲醇溶液、四種不同水果空白基質(zhì)溶液配成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用高效液相質(zhì)譜儀檢測(cè)。結(jié)果表明四種不同水果的基質(zhì)標(biāo)樣峰面積均小于甲醇標(biāo)樣的峰面積，說(shuō)明這四種水果中基質(zhì)對(duì)多菌靈有抑制作用，本實(shí)驗(yàn)為了消除基質(zhì)效應(yīng)的抑制作用，采用不同水果對(duì)應(yīng)不同的基質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。

3.結(jié)論

綜上所述，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析法能有效減少基質(zhì)效應(yīng)， 省去了復(fù)雜的凈化濃縮的過(guò)程，并且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，適合于多種水果中多菌靈的殘留檢測(cè)，具有較好的應(yīng)用價(jià)值，可在日常的檢測(cè)工作中推廣。

參考文獻(xiàn)：

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