口腔潰瘍系列制劑中冰片的定量檢測和揮發(fā)性成分分析

吳 芳，羅定強(qiáng)，樊寶娟，李 霞，劉海靜（陜西省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，陜西 西安 710061）

口腔潰瘍散（含片）由青黛、枯礬（白礬）、冰片3味中藥組方，具有清熱、消腫、止痛功效，常用于火熱內(nèi)蘊(yùn)所致的口舌生瘡、黏膜破潰、紅腫灼痛及復(fù)發(fā)性口瘡和急性口炎等。口腔潰瘍散標(biāo)準(zhǔn)收載于2015年版《中國藥典（一部）》，口腔潰瘍含片收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)(第80冊)》。口腔潰瘍散（含片）組方中的冰片，氣清香，味辛、涼，具揮發(fā)性。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，口腔潰瘍散有冰片的薄層色譜鑒別，口腔潰瘍含片有冰片的理化鑒別和薄層色譜鑒別，但均未控制冰片的含量。有文獻(xiàn)報道了散劑中冰片或其他藥材的含量測定和薄層色譜鑒別方法[1-3]，含片中其他組分的含量測定及薄層色譜鑒別方法[4-5]，但未見對2個劑型中冰片質(zhì)量進(jìn)行系統(tǒng)對比研究的報道。由于冰片具有易揮發(fā)性以及摻偽的現(xiàn)象，且質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)亟待統(tǒng)一和提高，故本研究中建立了該系列制劑中冰片的含量測定方法，同時為揭示揮發(fā)性物質(zhì)的化學(xué)成分組成，使用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用儀和頂空進(jìn)樣器對樣品進(jìn)行了分析。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

AE 240型電子分析天平（梅特勒公司）；AG ME 235S型電子分析天平（賽多利斯公司）；Agilent 7890A型氣相色譜儀(安捷倫公司)；QP2010型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津公司）。

1．2 試藥

龍腦對照品（批號為 110881-200504），異龍腦對照品（批號為1512-200201），水楊酸甲酯對照品（批號為110707-200710），均由中國食品藥品檢定研究院提供；無水乙醇為色譜純；試驗用樣品購自市場，分別來企業(yè)Ⅰ～Ⅳ），每家企業(yè)各3批樣品；陰性樣品(自制)。

2 方法與結(jié)果

2．1 冰片含量測定

2．1．1 色譜條件[6-7]

色譜柱：HP-FFAP毛細(xì)管氣相色譜柱（30 m×0．25 mm，0．25 μm）；柱溫：程序升溫，初始溫度為 65 ℃，保持1 min，以5℃ ／min升溫至230℃，保持5 min；柱溫：250 ℃；分流比：5 ∶1；載氣：氮氣；流速為 1．2 mL ／min。

2．1．2 溶液制備

內(nèi)標(biāo)溶液：取水楊酸甲酯對照品79．76 mg，精密稱定，加無水乙醇 100 mL，溶解，即得(質(zhì)量濃度為0．797 6 g ／L)。

對照品溶液：取龍腦對照品16．51 mg，異龍腦對照品10．64 mg，精密稱定，置同一錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液15 mL使溶解即得，質(zhì)量濃度分別為1．101 g／L，0．709 g ／L，0．466 g ／L。

供試品溶液：取口腔潰瘍含片適量，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液15 mL，振搖10 min，靜置，取上清液用微孔濾膜濾過，即得。取口腔潰瘍散適量，混勻，取約0．2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液15 mL，振搖10 min，靜置，取上清液用微孔濾膜濾過，即得。

2．1．3 方法學(xué)考察

干擾試驗：按處方的比例制備缺冰片的陰性樣品，按照2．1．2項下方法制備陰性對照品溶液。取陰性對照品溶液、對照品溶液和供試品溶液進(jìn)行測定，結(jié)果陰性樣品溶液對測定冰片的含量無干擾。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：取異龍腦、龍腦對照品適量，精密稱定，加內(nèi)標(biāo)溶液配置成異龍腦含量為 0．709 0，0．354 5，0．177 25，0．088 625，0．044 3，0．022 2，0．011 1，0．005 54 g ／L 的溶液，龍腦含量為 1．101 0，0．55 05，0．275 25，0．137 6，0．068 8，0．034 4，0．017 2，0．008 602 g ／L 的溶液，進(jìn)樣測定峰面積，以異龍腦和龍腦的質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝1．967 X+0．002（r＝1．000，n＝8）， Y＝1．992 X+0．004（r＝1．000， n＝8）。結(jié)果表明，異龍腦進(jìn)樣量在 0．011 1 ～ 1．418 0 μg范圍內(nèi)，龍腦進(jìn)樣量在 0．017 2 ～2．202 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系均良好。

精密度試驗：取線性關(guān)系考察項下第3份對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣7次，測定峰面積。結(jié)果異龍腦、龍腦與內(nèi)標(biāo)溶液峰面積比值的 RSD值分別為0．28%和0．25%（n＝7），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取口腔潰瘍散（批號為3100002），按照供試品溶液制備方法制備溶液，自制備后每隔3 h進(jìn)樣1次，測定24 h內(nèi)異龍腦和龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比 。結(jié) 果 的 平均 值 為 0．535（RSD＝1．7% ）和 0．980（RSD＝1．9%），表明供試品溶液制備后24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取口腔潰瘍散（批號為3100002），稱取6份，按照供試品溶液制備方法制備溶液。結(jié)果樣品中異龍腦和龍腦的含量平均值分別為15．272 mg／g和28．018 mg／g，RSD 分別為 0．96% 和 0．69% （n ＝ 6），表明方法重復(fù)性較好。

圖1 龍腦含量測定氣相色譜圖

加樣回收試驗：取異龍腦對照品13．78 mg和龍腦對照品23．06 mg，加無水乙醇溶解并定容至10 mL容量瓶中（質(zhì)量濃度分別為 1．378 g ／L，2．306 g ／L）。精密量取1 mL，置錐形瓶中，揮干溶劑。取口腔潰瘍散（批號為 3100002）0．1 g，稱取 6 份，精密稱定，分別置上述同一錐形瓶中，照供試品溶液處理方法制備供試液。結(jié)果見表1。

表1 龍腦含量測定加樣回收試驗結(jié)果（n＝6）

2．1．4 樣品含量測定

取水楊酸甲酯、龍腦對照品、異龍腦對照品及不同企業(yè)生產(chǎn)的3批樣品適量，按照2．1．2項下的方法制備供試品溶液，分別吸取2 μL注入氣相色譜儀，測定峰面積，按內(nèi)標(biāo)法計算。以龍腦和異龍腦含量之和作為冰片的含量。企業(yè)Ⅰ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍散冰片含量分別占處方量的96．0%，96．2%和97．5%，企業(yè)Ⅱ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍散冰片含量為82．8%，83．1%和86．8%，企業(yè)Ⅲ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍含片冰片含量為 75．9%，59．2%和49．8%，企業(yè)Ⅳ生產(chǎn)的3批口腔潰瘍散冰片含量為 42．0% ，33．5% 和 43．4% 。

2．2 揮發(fā)性成分分析

2．2．1 色譜條件[8]

MS條件：電子轟擊離子源（EI）離子源，離子源溫度230℃；掃描質(zhì)量范圍50～540 amu；接口溫度280℃；開始時間2．0 min。GC條件：HP-5MS毛細(xì)管氣相色譜柱（30 m × 0．25 mm，0．25 μm）；柱溫為程序升溫，初始溫度40℃，保持5 min后，以5℃ ／min升溫至220℃，保持 3 min；進(jìn)樣口溫度 210℃；柱流量為 1．0 mL／min；分流比為10∶1；頂空瓶加熱溫度85℃，定量環(huán)溫度90℃，傳輸線溫度105℃[9]。

2．2．2 溶液制備

取樣品適量，研勻，精密稱取1 g，置25 mL頂空進(jìn)樣瓶中，精密加水10 mL，搖勻，即得。

2．2．3 分析結(jié)果

對來自不同生產(chǎn)企業(yè)的4批供試品溶液進(jìn)行檢測。以面積歸一化法計算各化學(xué)成分的相對百分含量，通過NIST11譜庫進(jìn)行檢索。

企業(yè)Ⅰ：口腔潰瘍散離子流圖見圖2 A。通過鑒定，確定了6個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的99．1%。揮發(fā)性物質(zhì)化學(xué)成分及相對百分含量見表2。

企業(yè)Ⅱ：口腔潰瘍散離子流圖見圖2 B。通過鑒定，確定了7個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的97．8%。揮發(fā)性物質(zhì)化學(xué)成分及相對百分含量見表3。

企業(yè)Ⅲ：口腔潰瘍含片離子流圖見圖2 C。通過鑒定，確定了18個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的97．1%。揮發(fā)性物質(zhì)化學(xué)成分及相對百分含量見表4。

表2 企業(yè)Ⅰ的口腔潰瘍散化學(xué)成分相對含量

圖2 企業(yè)Ⅰ～Ⅳ生產(chǎn)的口腔潰瘍系列離子流圖

企業(yè)Ⅳ：口腔潰瘍含片離子流圖見圖2 D。通過鑒定，確定了5個色譜峰，相對百分含量占總揮發(fā)性成分的99．0%。揮發(fā)性物質(zhì)化學(xué)成分及相對百分含量見表5。

表3 企業(yè)Ⅱ的口腔潰瘍散化學(xué)成分相對含量

表4 企業(yè)Ⅲ的口腔潰瘍含片化學(xué)成分相對含量

3 討論

由表2至表5可見，散劑的冰片含量明顯高于含片的含量，不同企業(yè)生產(chǎn)樣品的冰片含量差異較大，故該系列制劑的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)增加冰片的含量測定項以進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的完善和提高。口腔潰瘍含片和口腔潰瘍散的處方量及工藝不同，規(guī)格及服用量不同，為進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一和對比研究，可規(guī)定樣品每1 g中冰片的含量不得少于處方量的 80．0% 。

分別鑒定了4家生產(chǎn)企業(yè)樣品中的了6，7，18，5個化學(xué)成分，其中龍腦和異龍腦的相對含量分別為97%，93%，53%和98%。異龍腦、龍腦、葑醇及樟腦為4批樣品的共有成分，除此之外，與其他3批樣品不同的是，企業(yè)Ⅲ生產(chǎn)的口腔潰瘍含片樣品鑒定出胡薄荷酮（相對含量為 6．22% ）、薄荷醇（相對含量 14．62%）、[1 R-(1α，2β，5α)]-乙酸 -5-甲基 -2-(1-甲基乙基)環(huán)己酯（相對含量為 2．96% ）、α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯等成分，這些化學(xué)成分在薄荷揮發(fā)油的相關(guān)研究中有報道[10-13]。但制劑處方中不含有薄荷揮發(fā)油或提取物，國家食品藥品監(jiān)督管理總局網(wǎng)站未查詢到該藥品注冊補(bǔ)充申請更改有關(guān)處方制法等的備案情況。

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