脂肪干細胞輔助自體顆粒脂肪移植用于隆乳的臨床對照研究

葉飛輪 徐楊 鄧萌 盧婭 余紅 林威

[摘要]目的：對比脂肪干細胞聯合自體脂肪移植與單純脂肪移植對治療小乳癥的療效差異。方法：納入小乳癥患者20例，共計40側乳房，隨機分為治療組和對照組，治療組進行脂肪干細胞聯合自體脂肪移植隆乳，對照組接受單純自體脂肪移植隆乳。患者分別于術后1周、1個月、3個月進行隨訪，進行乳房基本數據采集記錄及MRI檢查，對比兩組患者乳房體積改善效果及乳房形態滿意率情況。結果：治療組患者無論是乳房體積改善效果還是乳房形態滿意率均顯著高于對照組（P<0.05）。結論：脂肪干細胞聯合自體脂肪移植治療小乳癥的療效明顯優于單純脂肪移植，是一種值得推廣和進一步研究的小乳癥治療方法。

[關鍵詞]小乳癥；脂肪移植；脂肪干細胞；隆乳

[中圖分類號]R622 [文獻標志碼]A [文章編號]1008-6455（2018）03-0032-04

Clinical Comparative Study on Adipose-derived Stem Cell Assisted Autologous Granular Fat Transplantation for Augmentation Mammoplasty

YE Fei-lun，XU Yang，DENG Meng，LU Ya，YU Hong，LIN Wei

（Department of Medical Cosmetology，the Third Pelples Hospital of Chengdu，Chengdu 610031，Sichuan，China）

Abstract： Objective To compare the effects of adipose-derived stem cell assisted autologous granular fat transplantation and simple fat transplantation in the treatment of micromastia. Methods A total of 20 cases（40 breasts） with small milky disease， were randomly divided into the treatment group and the control group. The treatment group was treated with adipose-derived stem cell combined with autologous fat transplantation for augmentation mammoplasty， while the control group with autologous fat transplantation. Basic data of the breast was recorded and magnetic resonance imaging（MRI） was performed at 1 week， 1 and 3 months postoperatively. Then the breast volume variation and the breast shape satisfaction rate of the two groups were compared. Results Both the retention rate of the breast volume increment and the satisfaction rate of breast shape were significantly higher in the treatment group than those of in the control group （P<0.05）. Conclusion Adipose-derived stem cell combined with autologous fat transplantation has a significantly better effect on the treatment of micromastia than simple fat transplantation， and worth being popularized and further studied.

Key words： micromastia； fat transplantation； adipose-derived stem cell（ADSCs）； augmentation mammoplasty

小乳癥是臨床上常見的一種先天性乳房發育異常性疾病，在東方人中發病率較高。小乳癥的女性常常在日常生活及異性交往中遭受挫折，嚴重影響患者的生活質量和身心健康[1]。目前針對小乳癥的治療方法主要包括人工假體置入、自體脂肪填充等。假體置入是目前較為安全、效果確切的一種治療小乳癥的方法，但因其需要使用人工材料，安全性風險較高，多數患者常常無法接受。自體脂肪移植技術的出現和發展同時解決了以上兩種問題，但由于移植脂肪在植入區域的吸收率較高（30%～70%）[1-2]，常常需要多次手術才能獲得較為滿意的效果，患者承受的痛苦也相對較大。

有關研究發現[3]，將純化后的脂肪干細胞重新注射到脂肪移植部位可以明顯改善移植脂肪的長期存活率。因此，脂肪干細胞聯合自體脂肪移植極有可能成為一種安全性及可操作性較高的新型小乳癥矯正手段。為了驗證脂肪干細胞的加入是否真能提高移植脂肪存活率，進行了本項研究，對比自體脂肪干細胞聯合顆粒脂肪隆乳與單純自體顆粒脂肪移植隆乳的療效。

1 資料和方法

1.1 一般資料：納入2014年4月-2017年6月來本院就診的符合條件的小乳癥患者20例（共計40側乳房），均為女性，隨機分為治療組和對照組，每組10例（20側乳房）。治療組患者行脂肪干細胞輔助的脂肪移植隆乳，對照組行單純脂肪移植隆乳。所有患者均為第一次接受治療，均簽署知情同意書。對照組：年齡23～41歲，平均（33.6±6.1）歲；體重46.5～63.0kg，平均（53.5±5.9）kg；術前乳房體積169.4～231.7cm3，平均（190.4±20.3）cm3。治療組：年齡25～39歲，平均（34.2±4.9）歲；體重43.0～60.5kg，平均（48.6±6.4）kg；術前乳房體積169.4～231.7cm3，平均體積（176.7±28.3）cm3。兩組患者年齡、體重及術前乳房平均體積比較，差異均無統計學意義（P<0.05）。

1.2 納入標準：需同時滿足以下5點方能入組：①18～50歲健康成年女性；②有足夠時間，自愿接受長期隨訪觀察者；③心理準備充分者；④先天性乳房體積過小或產后乳房萎縮者；⑤供區有足夠脂肪分布者。

1.3 排除標準：符合以下任意一點者均不可入組：①精神疾患、嚴重系統性疾病（如高血壓、心臟病、糖尿病等）者；②乳腺彩超發現疑似腫瘤性包塊者；③個人有乳腺癌病史或家族史（直系親屬）者；④家屬強烈反對者。

1.4 方法

1.4.1 術前數據采集：所有患者術前均需拍攝乳腺MRI，并按照正位、左右側位、左右45°側位在相同背景下進行乳房外形照相，同時測量記錄胸圍、胸骨切跡-乳頭距離（SN-N）、鎖骨-乳頭距離（C-N）、乳頭-下皺襞距離（N-IMF）等乳房數據。

1.4.2 脂肪干細胞的獲取、分離與擴增：一期手術僅治療組患者進行。局部腫脹麻醉下，于患者大腿部內側抽取脂肪與腫脹液混合物80～130ml（包含脂肪約50～90ml），放置于無菌試劑瓶中使用低溫保溫箱運送至合作單位（成都美進生物科技有限公司）進行脂肪干細胞分離培養及擴增。經過約45d的周期，脂肪干細胞傳代至P3代并且獲得了足夠的細胞數量，經流式細胞檢測確認為脂肪干細胞后制備成富含脂肪干細胞的懸液備用。

1.4.3 自體顆粒脂肪移植隆乳：二期手術治療組與對照組患者均進行。①消毒鋪巾：全身麻醉后常規消毒脂肪供區及乳房受區，鋪巾；②脂肪采集：根據受試者術前乳房測量結果預估脂肪移植量，優先選用大腿內外側作為脂肪供區，對于大腿脂肪量不足者可選擇腰腹部脂肪作為補充，采用自體脂肪移植一體機（北京燕山，KYZ-2）進行脂肪采集（3mm吸脂針，0.5atm）；③脂肪處理：將獲得的脂肪轉移入離心管中并于離心機中離心（1 000rpm，3min），去除下層液體及表面油滴、保留中層顆粒脂肪，按1ml脂肪組織添加2～7×105個脂肪干細胞的比例充分混勻（對照組不添加脂肪干細胞，只添加等體積生理鹽水）；④脂肪填充：于乳房下皺襞作約1mm寬小切口，使用10ml注射器搭配2mm螺口脂肪移植針從切口處進針按照科爾曼脂肪移植法進行脂肪扇形、多層次、多隧道、多點小量注射（注射層次包括皮下、乳腺后間隙、胸大肌內、胸大肌后），注射過程中低速、低壓，乳房形態及大小滿意后結束注射；⑤測量術后即刻測量乳房數據并記錄。

1.4.4 評價指標：所有患者均在術后1周、1個月、3個月進行隨訪，復診時再次測量記錄胸圍、胸骨切跡-乳頭距離（SN-N）、鎖骨-乳頭距離（C-N）、乳頭-下皺襞距離（N-IMF）等乳房數據，拍攝照片。術后3個月時，患者填寫滿意度調查問卷并根據患者乳房形態進行形態學評分（形態學評分5～10分為滿意，<5分為不滿意）。同時行乳腺MRI檢查（判斷乳房有無病變、脂肪存活情況，并計算乳房體積）。

乳房體積改善效果評價：利用MRI數據進行術前、術后乳房體積計算并分別得出術后1周、1個月、3個月的乳房體積增加值D1、D2、D3，術后1個月乳房體積增量留存率V1%= D2/ D1，術后3個月乳房體積增量留存率V3%= D3/D1。留存率<30%為無效，30%≤留存率<60%為有效，留存率≥60%為顯效。

1.4.5 統計學分析：采用SPSS 18.0軟件進行統計學分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 P3代脂肪干細胞檢測結果：所有治療組患者的脂肪干細胞均獲得了成功分離并傳代至P3代，流式細胞檢測結果如下，脂肪干細胞（Adipose-derived stem cells， ASCs） P3細胞高表達（陽性率>95%）：CD29、CD44、CD105、CD73、HLA-ABC；不表達（陽性率<3%）：CD31、CD14、CD34、CD45、HLA-DR。結果表明，分離培養獲得的細胞確為脂肪干細胞。

2.2 兩組患者一般情況：本研究共納入患者20例（40側乳房），所有患者均按照要求完成了隨訪，對照組患者平均脂肪填充量為220ml（185～295ml），治療組患者平均脂肪填充量為230ml（190～285ml），兩組脂肪填充量比較，差異無統計學意義（t=0.565，P>0.05）。治療組患者乳房形態術后獲得了明顯改善，乳房各象限均較術前更加飽滿（見圖1～2）。

2.3 兩組患者療效比較

2.3.1 MRI比較結果：通過術前、術后MRI結果比較可知，治療組患者術后3個月移植脂肪存活狀況良好、未出現明顯鈣化、液化、囊腫等（圖3），而對照組移植脂肪出現了很大程度的吸收（圖4）。

2.3.2 兩組患者乳房三維數據比較結果：兩組患者術后1個月及3個月乳房測量三維數據均較術前有一定提高，治療組乳房三維數據增加值明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），具體見表1。

2.3.3 兩組患者乳房體積改善效果比較結果：治療組術后1周、1個月、3個月乳房體積平均增加量分別為（231.5±21.4）cm3、

（180.1±29.8）cm3、（158.8±24.7）cm3；對照組術后1周、1個月、3個月乳房體積平均增加量分別為（242.4±19.7）cm3、（113.6±33.4）cm3、（89.3±34.1）cm3。兩組乳房體積增量留存率結果見表2～3。

2.3.4 兩組患者乳房形態滿意率比較：術后3個月治療組滿意形態學評分滿意14側，不滿意6側，滿意率為70.0%；對照組形態學評分結果滿意2側，不滿意18側，滿意率10%，兩組滿意率比較，差異有統計學意義（χ2=15.000，P=0.000）

2.4 兩組患者不良反應情況：所有患者均未出現感染、劇烈疼痛、上肢活動受限等嚴重不良反應。治療組5例、對照組4例患者術后出現局部瘀斑，均在術后1～2周內完全消退；治療組1例、對照組2例患者在術后1個月時發現脂肪鈣化，其余對照組及治療組患者均未出現脂肪鈣化、液化、囊腫等脂肪變性。

3 討論

自Coleman等[4]公布了關于顆粒脂肪移植臨床應用的研究結果后，脂肪作為一種自體軟組織填充材料受到了廣泛關注。經過數十年的發展，目前脂肪移植技術被廣泛用于面部凹陷、軟組織缺損、面部輪廓調整等領域。但由于目前技術的限制，脂肪移植后存活率不穩定（30%～70%）[1-2]，尤其是在進行脂肪移植隆乳等較大劑量脂肪移植時，可能會出現大幅度吸收、不對稱吸收、局部脂肪液化鈣化等并發癥[5-6]。

干細胞是一種具有自我更新和分化成多種細胞的特殊細胞。全能或多能干細胞大量存在于胚胎或胎兒組織中，但通過胚胎獲取這些細胞面臨著較大的倫理問題。脂肪干細胞是存在于脂肪組織中的一種多能干細胞，它具有分化為軟骨細胞、肌細胞、血管內皮細胞、脂肪細胞等多種細胞的潛能[7]。其具有來源豐富、取材容易、增殖迅速、多項分化潛能、低免疫原性和免疫調節作用，在再生醫學領域展現了廣闊的應用前景。有關研究發現[7-8]，脂肪干細胞可促進脂肪生成及組織血供的建立，將純化后的脂肪干細胞重新注射到脂肪移植部位可以明顯改善移植脂肪的長期存活率，其原因可能與脂肪干細胞可以表達和分泌多種造血細胞因子（如巨噬細胞集落刺激因子，粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子）及抗凋亡和促血管生成因子（如血管內皮生長因子，肝細胞生長因子HGF，TGF-β等）有關。

以往的臨床研究大都采用添加富含基質血管成分（Stromal vascular fraction， SVF）的脂肪提取物來提升移植脂肪存活率[8-13]，盡管取得了一定的療效，但由于血管基質成分復雜，很難說明干細胞對促進移植脂肪存活率的作用[14-15]。本研究將脂肪干細胞進行分離培養傳代后再添加到自體脂肪中進行移植，非常直觀可信地驗證了脂肪干細胞對移植脂肪存活率的提升作用。后期仍然需要更多大樣本的研究以及長期隨訪來進一步觀察脂肪干細胞聯合自體脂肪隆乳的遠期有效性和安全性。

目前脂肪干細胞已經成為國內外的研究熱點，針對多種疾病（如肝硬化、脊柱損傷、軟組織缺損等）的基于脂肪干細胞的研究正在國內外廣泛開展。未來隨著脂肪干細胞研究的不斷深入，其應用范圍必將越來越廣泛，其在組織再生和重建方面的應用潛力非常巨大。

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[收稿日期]2017-11-09 [修回日期]2017-12-04

編輯/朱婉蓉