紫白膏對大鼠創(chuàng)面組織修復及bFGF表達的影響

許圳鵬 趙誠 倪虹

紫白膏是我院院內(nèi)制劑，在治療肛腸疾病術后出血、疼痛等相關并發(fā)癥上有較顯著的療效。本實驗將利用動物實驗來觀察紫白膏是否能通過提高bFGF因子的表達并促進創(chuàng)面愈合的作用。為進一步開發(fā)紫白膏的臨床價值、拓展其臨床應用并更好的應用于肛腸疾病患者提供可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

雄性SD大鼠40只，8～10周齡，體質(zhì)量270～310 g，購自福建醫(yī)科大學實驗動物中心。動物生產(chǎn)許可證號碼為SCXK（閩）2012-0001，動物自由飲食，飼養(yǎng)于標準動物房內(nèi)。適應性喂養(yǎng)2周后進行試驗。金黃色葡萄球菌（10億個菌）,（上海魯微科技有限公司，批號：ATCC6538）。紫白膏來源于福建中醫(yī)藥大學附屬人民醫(yī)院制劑科提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 創(chuàng)面模型的制作 大鼠背部硫化鈉脫毛，常規(guī)消毒后在脊柱兩側(cè)對稱部位做皮膚全層切口，深達筋膜，制成直徑約2.5 cm、中心相隔約3 cm創(chuàng)面，紗布壓迫止血。創(chuàng)面內(nèi)點狀注入0.6 ml金黃色葡萄球菌（10億個菌），連續(xù)2天，至傷口出現(xiàn)紅腫為止，并局部取材做病理組織學檢驗證實感染形成。

1.2.2 分組處理 造模成功后將40只SD大鼠隨機分為2組（紫白膏組20只。凡士林組20只）。紫白膏處理組分別給予紫白膏外用；對照組給予凡士林；所有創(chuàng)面均清潔包扎防污染，分籠飼養(yǎng)，每日換藥至傷后14 d或創(chuàng)面完全愈合為止

1.3 觀察與監(jiān)測

觀察和比較2組大鼠創(chuàng)面色澤、質(zhì)地，統(tǒng)計愈合時間、創(chuàng)面愈合率。第3、7、14天取大鼠創(chuàng)面組織做Western-blot檢測，觀察bFGF因子表達情況。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用表示，進行正態(tài)檢驗，符合正態(tài)分布后采用t檢驗，計數(shù)資料用非參數(shù)秩和或χ2檢驗，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠創(chuàng)面bFGF蛋白表達結(jié)果

分別提取第3、7、14天肉芽組織總蛋白進行Western blotting分析，研究結(jié)果顯示，2組均能提高bFGF表達水平，第14天紫白膏組與凡士林組比較，高于凡士林組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示中藥紫白膏能有效提高bFGF含量，有效促進創(chuàng)面新生血管生成（見圖1、表1）。

圖1 大鼠創(chuàng)面bFGF蛋白表達結(jié)果

2.2 大鼠創(chuàng)面愈合時間及愈合率比較

結(jié)果如表1所示，紫白膏組與凡士林組比較，愈合時間短于凡士林組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示中藥紫白膏能有效促進創(chuàng)面修復，縮短愈合時間。見表1。

3 討論

肛腸疾病是發(fā)生在肛門與直腸上各種疾病，常見有混合痔、肛裂，肛瘺、肛周膿腫、直腸潰瘍、直腸脫垂、直腸黏膜內(nèi)脫垂等。有相關流行病學報道，肛腸疾病發(fā)病率為67%[1]。目前肛腸疾病上網(wǎng)治療方法有手術療法，非手術療法。其中，手術療法是治療肛門直腸疾病的主要臨床手段。但術后局部組織由于受到不同程度的手術刺激和損傷，肛管局部的靜脈、淋巴回流障礙，所以常常出現(xiàn)肛門疼痛、出血、肛緣水腫、創(chuàng)面愈合慢等并發(fā)癥，對傷口愈合時間也產(chǎn)生了一定的影響[2]。

創(chuàng)面愈合是一個復雜的生理過程，包括了細胞的遷移增殖分化、炎癥反應、細胞生長因子分泌，基質(zhì)沉積和血管形成等，其中多種細胞因子如bFGF、血管內(nèi)皮生長因子VFGF等對創(chuàng)面愈合起到重要調(diào)控作用[3]。近年來，人們通過體內(nèi)外模型，比較系統(tǒng)地研究了多種生長因子與創(chuàng)傷修復的關系，發(fā)現(xiàn)在創(chuàng)傷修復的不同階段均有生長因子的參與。新生血管化細胞增殖與合成在創(chuàng)面愈合過程中有著重要的作用，是組織修復賴以生存的物質(zhì)基礎，也是創(chuàng)面修復的重要組成部分[4-5]。

生長因子是一類多肽類物質(zhì)，能通過與特異的、高親和的細胞膜受體結(jié)合，調(diào)節(jié)細胞生長與其他細胞功能。生長因子表達水平的高低直接影響到細胞的增殖、遷移、細胞外基質(zhì)的合成和釋放等。與創(chuàng)面修復有關的生長因子主要包括轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor-β，F(xiàn)GF-β）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、成纖維細胞生長因子（fibroblast growth factors，F(xiàn)GF）、表皮生 長 因 子（epidermalgrowth factor，EGF） 等[6]。Hu M 等[7]在bFGF對肺癌預后價值的Meta分析中提出：bFGF能刺激血管新生，從而影響腫瘤細胞的增殖、遷移和生存。Zhang X等[8]在OSM增強血管和改善心肌梗死后心功能的研究中也提出了上述類似觀點，bFGF能促進創(chuàng)面微血管形成，改善供血、供氧，從而對創(chuàng)面組織的修復和生長有明顯的促進作用。

本課題研究中，兩組均能提高bFGF表達水平，第14天紫白膏組與凡士林組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示中藥紫白膏能有效提高bFGF含量，有效促進創(chuàng)面新生血管生成。同時在創(chuàng)面愈合時間對比上，紫白膏組優(yōu)于凡士林，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。說明紫白膏能有效提高bFGF生物學含量及活性，促進創(chuàng)面修復，縮短愈合時間。

綜上所述，通過紫白膏外用能上調(diào)bFGF含量，促進創(chuàng)面新生血管生成，促進創(chuàng)面的愈合。從而為紫白膏治療肛腸術后方面提供了理論依據(jù)。

表1 大鼠創(chuàng)面愈合時間及愈合率比較

表1 大鼠創(chuàng)面愈合時間及愈合率比較

注：與凡士林組比較，*P＜0．05

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