湖州市婦女感染人乳頭瘤病毒及基因亞型分析

楊勝 王莉麗 朱玉蓉 劉春玲 劉鵬 沈國松

313000湖州市婦幼保健院檢驗科(楊勝、朱玉蓉、劉春玲、劉鵬、沈國松)；313000湖州市大浙北專業體檢中心(王莉麗)

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一種主要存在于人皮膚、黏膜及女性宮頸上皮細胞交界區的微小共價雙股環狀DNA病毒,無包膜,至今已發現200余種,超過35種可感染人類生殖系統[1]。2012年,子宮頸癌居全球女性最常見惡性腫瘤第4位,新發病例為528 000例[2]。目前已公認,HPV長期和持續感染是宮頸癌的主要誘因,某些高危型HPV反復感染是宮頸癌發生的必要條件。HPV檢測已成為宮頸癌篩查和預防的關鍵問題之一,且HPV亞型分布有年齡、種族和地域性差異[3]。進行HPV流行病學研究,建立地區性HPV感染流行度及主要型別數據庫,對HPV疫苗開發研究及應用選擇有重要指導作用,對預防HPV感染和防治宮頸癌提供科學依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象選擇2016年12月份至2017年11月份在湖州婦幼保健院體檢中心參加婦科檢查且自愿參加HPV篩查的女性2 830例,平均年齡(41.8±10.4)歲。其中2 631例為單位體檢,199例為個人體檢。因本次研究對象≤25歲組僅45例,故不單獨分組。按年齡分成8組,并計算HPV感染率：≤30歲409例、＜30～≤35歲555例、＜35～≤40歲444例、＜40～≤45歲387例、＜45～≤50歲425例、＜50～≤55歲335例、＜55～≤60歲132例、＞60歲143例。

1.2 研究方法

1.2.1 標本處理及保存：無菌一次性宮頸采樣器由江蘇健友醫療科技有限公司提供；采用窺陰器或陰道擴張器充分暴露宮頸,用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去,將宮頸采樣器伸入宮頸鱗柱上皮交界處,單方向旋轉3～5圈采集宮頸脫落細胞,存入裝有細胞保存液的洗脫管,密閉,貼條碼送檢,檢驗科接受女性宮頸脫落細胞標本后存入-20℃冰箱保存待測。

1.2.2 人乳頭病毒分型檢測：HPV病毒DNA提取及分型檢測均由江蘇碩世生物科技有限公司提供,采用羅氏熒光定量PCR儀Cobas z480型進行PCR擴增及檢測分析。本試劑盒以人乳頭瘤病毒組L1區為靶區域,設計21個亞型特異性引物和探針用以檢測21 種 HPV 亞型(HPV16、18、31、59、66、53、33、58、45、56、52、35、68、51、39、82、26、73 及 6,11 和81)。所有操作按試劑及儀器說明書。

1.3 統計學方法數據分析采用SPSS17.0統計學軟件處理,感染率等計數資料數據采用百分率(%)表示,兩組間及多組間比較采用χ2檢驗,以P＜0.05作為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV感染率2830例體檢標本,HPV陽性269例,HPV總體感染率9.51%；以單一基因感染為主,感染率為8.27%(234/2 830),占所有HPV感染的86.99%(234/269)；雙重感染感染率為1.13%(32/2 830,),占 HPV感染的11.9%(32/269)；三重感染和四重感染分別發現2例和1例。具體數據見表1。單一感染高危型HPV亞型前5位依次為58、16、52、53、66；多重感染高危型亞型前五位依次為 52、16、66、39、58；單一感染與多重感染低危型HPV亞型均以81為主。其中在多重感染中未檢出HPV亞型33、37。詳細數據見圖1。

2.2 HPV不同基因亞型分布本次研究試劑盒檢測21種亞型中,檢測出19種基因亞型,未檢出HPV28和HPV82兩種亞型。因檢測標本存在單一基因和多重基因感染,故2 830例實際檢出HPV基因308例次,高危亞型感染率9.11%(258/2 830),占HPV基因總檢出數的83.77%(258/308),以58、16、52為主,陽性率分別為 1.48%(42/2 830),1.31%(37/2 830),1.10%(31/2 830)。低危亞型感染率1.77%(50/2 830),占HPV基因總檢出數的16.23%(50/308),以81型為主,陽性感染率為1.27%(36/2 830)。具體數據見表2。

表1 2 830例體檢女性HPV感染情況Tab.1 HPV infection in 2 830 women who underwent physical examination

2.3 各年齡組人群HPV感染分布情況本研究8年齡組中,以56～60歲組女性HPV感染率最高(13.64%,18/132),31～35歲組女性HPV感染率最低(7.75%,43/555),兩組比較差異有統計學意義(χ2=4.57,P=0.033)；單一基因感染率同樣以56～60歲組最高(12.12%,16/132),31～35歲組女性HPV感染率最低(6.31%,435/555),兩組間比較差異有統計學意義(χ2=5.25,P=0.022)。總感染率和單一基因感染率均以31～35歲年齡段最低,56～60歲年齡段最高；以31～35歲開始隨年齡增長而增高,在56～60歲達峰值,然后開始下降,見圖2。本研究還顯示HPV總感染率不同年齡組間差異無統計學意義(P＞0.05),但HPV高危亞型感染率不同年齡組間差異具有統計學意義(χ2=23.66,P=0.001),詳細數據見表3。

表2 269例體檢女性HPV亞型分布情況Tab.2 HPV subtypes’ distribution of 269 women who underwent physical examination

3 討論

圖1 單一感染及多重感染HPV亞型分布Fig.1 Distribution of HPV subtypes of single infection and multiple infection

圖2 各年齡組HPV感染率Fig.2 Infection rate of HPV in different age groups

德國醫學科學家、病毒學家Harald zur Hausen從1970年起致力于研究HPV與宮頸癌之間的關系,結果證明某些類型的HPV就是宮頸癌的病原體,并以此于2008年獲得諾貝爾生理及醫學獎。高危型HPV最早被發現與女性宮頸癌發病關系密切,是女性宮頸癌的獨立危險因素[4],華東地區宮頸鱗狀細胞癌組織HPV感染率為90.1%[5],HPV早期篩查、早期干預對宮頸癌的預防和治療有著積極的意義；近年來研究表明,HPV感染與女性乳腺癌發病同樣具有較強的關聯性[6],HPV感染致病性廣泛。

表3 HPV不同年齡組的感染情況Tab.3 Infection with HPV in different age groups

研究報道顯示,中國女性宮頸上皮脫落細胞HPV感染率為13.5% ～45.6%,不同地區感染率有差異[7]。湖州地區女性HPV總感染率為9.51%,以單一基因型感染為主,占86.99%,多重感染以二重感染為主。湖州地區HPV總感染率低于南京地區HPV的26.8%及溫州地區的18.66%[8-9],兩地均以單一基因型感染為主與本地區相同。可能原因為湖州地區過去數10年堅持1年兩次下鄉婦女病普查,提高全社會關注女性健康、防治女性疾病的意識提高女性健康水平和生活質量。不同地域HPV感染率差異與地域經濟條件、標本采集、人群分布、生活習慣及人口流動等因素密切相關。另一原因為本次研究對象≤25歲組人數較少,文獻報道≤25歲是女性HPV感染的高峰期。

湖州地區婦女常見HPV高危亞型為58、16、52型,單一基因感染由高到低依次為 52、16、66、39、58型；文獻報道上海市婦女常見的HPV高危亞型為52、58、16、53、51 和 55 型[10],廣州地區婦女常見的HPV亞型為52、16、58[11]。HPV亞型分布地域差異,因此HPV分型檢測的推廣意義重大,快速準確檢測HPV病毒及基因型聯合女性宮頸癌細胞學篩查的二級防御仍然是宮頸癌預防工作的主要策略。

HPV流行率具有年齡分布特點,Smith[12]報道≤25歲是女性HPV感染的高峰期,隨年齡增長感染率下降；35～50歲婦女感染率有地域性差異；60歲以上婦女感染率存在不同趨勢。適應性免疫應答缺乏以及性生活活躍對HPV感染敏感是導致30歲以下感染率較高的主要原因,但因年輕婦女機體免疫功能強,大多數感染呈一過性可自愈,35歲后隨年齡增長逐漸轉為持續性感染,導致感染率呈逐漸上升趨勢；56～60歲組感染率達最高峰可能原因為絕經期后女性內分泌激素水平變化較大引起的生理和免疫調節紊亂。高危型感染率不同年齡組差異有統計學意義,高危型HPV持續性感染與宮頸上皮瘤變(CIN)和宮頸癌的發生、發展關系密切,且有地域差異,因此,研究本地區高危型HPV亞型年齡分布特點對宮頸癌預防及治療有重要的臨床指導價值。

HPV疫苗的臨床應用是人類首次嘗試通過疫苗的接種消滅一種癌癥,具有時代意義。中國食品藥品監督管理總局(CFDA)2016、2017年分別批準2價和4價HPV疫苗上市,中國香港9價HPV疫苗也已上市,宮頸癌的一級預防成為事實,對預防、控制HPV感染,降低宮頸癌發病率及死亡率有著重大作用。建立地區HPV感染流行度及主要型別數據庫可指導臨床疫苗選擇應用,為研發適合本地區人群的HPV疫苗提供科學依據。

利益沖突無