北京市售食用植物油植物甾醇構成及含量分析

屠瑞瑩 吳國華 羅仁才 趙榕 李兵 范賽 劉偉 趙海燕

植物甾醇是一大類結構和生化特性與膽固醇相似的甾醇類物質[1]，廣泛存在于植物的根、莖、葉和果實中[2]。研究表明，植物甾醇具有預防動脈粥樣硬化、促進膽固醇的降解代謝等諸多生理活性[3-4]。已被廣泛了解并用于食品、藥品等領域[5]。絕大多數植物油都含有植物甾醇，其中的植物甾醇主要以谷甾醇為主，其次為豆甾醇和菜油甾醇。我國主要的幾種食用植物油如大豆、葵花籽、菜籽、米糠等，植物甾醇含量一般為3～10 mg/g[6]。食用植物油是植物甾醇含量較為豐富的食品之一，也是人體攝取植物甾醇極其重要的途徑[7]。2017年3-9月,對56份市售單一組分食用植物油進行測定，采用趙海燕等[8]建立的方法測定4種主要植物甾醇，得到各類食用植物油植物甾醇分布特征，同時測定7份食用調和油中甾醇含量。

1 實驗材料與方法

1.1原料與試劑

1.1.1樣本來源： 包括大豆、葵花籽、橄欖、玉米、花生、菜籽油的56份食用植物油樣品和7份調和油樣品分別購于北京市超市、農貿市場、專賣店。

1.1.2試劑： 甲醇(色譜純，Feshir公司)，乙醇(色譜純，Dikma公司)，冰醋酸(分析純，國藥集團化學試劑有限公司)；實驗用水均為超純水(美國Millipore公司超純水器制備)。

1.1.3標準品: 豆甾醇標準品(美國Chromadex公司，#ASB-00019357-100)，菜籽甾醇標準品(美國Chromadex公司，#ASB-00002359-025)，菜油甾醇標準品(美國Chromadex公司，#ASB-00003072-025)，β-谷甾醇標準品(美國Chromadex公司，#ASB-00019285-025)。

1.1.4標準儲備液： 準確稱量菜籽甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇標準品各0.010 0 g，菜油甾醇0.0050 g，分別置于10.0 mL的容量瓶中，乙醇溶解定容。菜籽甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇濃度為1.0 mg/mL，菜油甾醇濃度為0.5 mg/mL，-20 ℃保存。使用前用甲醇稀釋成混合標準中間液，其中菜籽甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇濃度為0.2 mg/mL，菜油甾醇濃度為0.1 mg/mL。

1.1.5標準系列： 分別準確取混合標準中間液100、250、500、750和1 000 μL于10.0 mL容量瓶中乙醇定容。得到菜籽甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇的標準系列濃度為2.0、5.0、10.0、15.0和20.0 μg/mL，菜油甾醇濃度為1.0、2.5、5.0、7.5和10.0 μg/mL。

1.2儀器 Waters超高效液相色譜儀(ACQUITY UPLC)，配有PDA檢測器；離心機(MIKRO-22，Hetticr 公司)；IncuShaker臺式恒溫振蕩器。

1.3測定步驟

1.3.1樣品預處理： 樣品混合均勻后備用。

1.3.2樣品處理： 稱量1.000 g 左右食用植物油樣品于50 mL塑料離心管中，加入15.0 mL乙醇混勻，再加入5.0 mL 50%氫氧化鉀溶液，置于恒溫振蕩器中60 ℃振蕩1 h，取出后放至室溫，加入5.0 mL無水乙酸，待其冷卻后乙醇定容至50.0 mL。-20 ℃冷藏2 h后取出，10 000 r/min離心10 min，得到樣品處理液。

1.3.3儀器測定： (1)液相色譜條件：色譜柱：Endoavorsil C18色譜柱(100×2.1 mm，1.8 μm)；流動相：甲醇；檢測波長：205 nm；流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣量：2 μL。(2)標準溶液測定：將1.1.5得到的標準溶液上機測定。(3)樣品溶液測定：將1.3.2得到的樣品處理液上機測定。

1.3.4方法適用性實驗： (1)標準曲線及檢出限：將1.1.5配制的標準系列上機測定，以4種植物甾醇的濃度為橫坐標，響應值為縱坐標繪制標準曲線。(2)精密度實驗：從六類植物油中選取1份大豆油樣品和1份菜籽油樣品進行精密度實驗，平行測定六次，計算4種甾醇的相對標準偏差。(3)準確度實驗：以大豆油為基質樣品進行了回收率的測定，其中菜籽甾醇、豆甾醇、菜油甾醇的加標量為0.500 mg/g，β-谷甾醇的加標量為1.000 mg/g，實驗重復6次，計算每種植物甾醇的回收率和相對標準偏差。

1.3.5結果計算： 線性回歸方程由Waters ACQUITY自帶軟件擬合計算。每類單一組分食用植物油分別測定各樣品的甾醇含量，結果取平均值，計算公式如下：

式中，xi為某份樣品的植物甾醇含量，n為某類單一組分食用植物油的所有樣品數量。

2 結果與討論

2.1質量控制

2.1.1方法適用性實驗

2.1.1.1標準曲線及檢出限結果： 4種植物甾醇在濃度范圍內的標準曲線線性關系良好(表1)。

表1 方法的回歸方程及檢出限

2.1.1.2精密度實驗結果： 實驗表明大豆油樣品的β-谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇的相對標準偏差分別為0.5%、2.8%和1.4%，菜籽油樣品的β-谷甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇的相對標準偏差分別為1.1%、0.8%和2.0%。

2.1.1.3準確度實驗結果： 實驗表明β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇回收率分別為87.3%、98.3%、89.8%和96.1%，相對標準偏差(RSD)分別為0.9%、0.8%、3.2%和3.5%。

2.1.1.4方法適用性實驗結果： 結果表明標準曲線的線性關系良好，精密度、準確度結果滿意，此方法適用于植物油中4種植物甾醇的測定。

2.1.2樣品檢測的質量控制： 為確保檢測結果的準確性，采用加標回收實驗。以大豆油樣品為基質，菜籽甾醇、豆甾醇、菜油甾醇的加標量為0.250 mg/g，β-谷甾醇的加標量為0.500 mg/g，重復實驗6次。實驗結果β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇回收率分別為85.3%、95.5%、91.2%和95.0%，相對標準偏差(RSD)分別為1.2%、0.7%、2.4%和3.3%。

2.2六類單一組分植物油中4種植物甾醇含量 甾醇總量以玉米油和菜籽油含量最高，平均甾醇總量為8 916.6和8 811.1μg/g，橄欖油中的甾醇總量最低，平均甾醇總量為2 415.2 μg/g(表2)。

表2 食用植物油中各類植物甾醇含量/μg·g-1

注：“Tr”表示低于方法的檢出限或未檢出。

2.3六類單一組分植物油中4種植物甾醇的構成比 不同類食用植物油中植物甾醇的構成比例各不相同。六類植物油均為β-谷甾醇的構成比例最高，菜油甾醇次之。大豆油相比其他幾種油含有更高比例的豆甾醇，文獻研究中也常以大豆油為原料提取豆甾醇[9]。菜籽甾醇只在菜籽油中檢出，其構成約為10%，但菜籽油未檢出豆甾醇。橄欖油只含有菜油甾醇和β-谷甾醇。六類植物油均含有β-谷甾醇和菜油甾醇，并且均不能全部檢出所有4種甾醇(表3和圖1～6)。除玉米油中的豆甾醇之外，各組分構成比例的RSD值均在10%以內(表3)，表明不同品牌的同類植物油中各植物甾醇的構成比例基本一致。

表3 食用植物油中各類植物甾醇的構成比例/%

圖1 大豆油色譜圖

圖2 葵花籽油色譜圖

圖3 橄欖油色譜圖

圖4 玉米油色譜圖

圖5 花生油色譜圖

圖6 菜籽油色譜圖

2.4食用調和油中植物甾醇的含量 7份調和油樣品中總植物甾醇含量范圍是4 212.0～6 781.0 μg/g，高于橄欖油、花生油總植物甾醇水平。7份調和油樣品均檢測出菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇，菜油甾醇的含量范圍是1 319.7～2 137.2 μg/g，豆甾醇的含量范圍是641.7～1 081.3 μg/g，β-谷甾醇的含量范圍是1 811.0～3 684.0 μg/g。此外，調和油2和調和油7檢測出四種植物甾醇，相比單一組分植物油含有更多種類的植物甾醇(表4)。

表4 市售調和油中植物甾醇的含量/μg·g-1

注：“Tr”表示低于方法的檢出限或未檢出。

3 結論

采用超高效液相色譜法測定北京市售食用植物油中的4種植物甾醇，得到了56份單一組分食用植物油所含甾醇的含量和構成比例，同時，檢測了7份食用調和油中的植物甾醇含量。測定結果對于各類食用植物油中植物甾醇成分的深入發掘和食用油的營養配比，為開展精細化膳食指導具有積極意義。

參考文獻

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[2] MOGHADASIAN M H, FROHLICH J J. Effects of dietary phytosterolson cholesterol metabolism and atherosclerosis: clinical andexperimental evidence [J]. Ame J Med, 1999, 107(6): 588-594.

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[8] 趙海燕, 詹未, 李兵, 等. 超高效液相色譜法同時測定食用植物油中的4種植物甾醇[J]. 中國食品衛生雜志, 2016, 28(2): 223-226.

[9] 李萬林, 鐘姣姣, 馮鞏, 等. 大豆油中植物甾醇提取工藝及抗氧化活性研究[J]. 大豆科學, 2014, 33(5): 731-734.