血清鈣衛蛋白與類風濕關節炎活動度相關性的臨床研究

高彥青，周 蕾，侯 候，趙 冕，朱桂晉，靳永欣

（天津醫科大學總醫院風濕免疫科，天津300052）

鈣衛蛋白是由S100鈣結合蛋白家族中的S100A8和S100A9組成的異二聚體復合物，來源于嗜中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞。近年來研究發現鈣衛蛋白是可用于標志細胞和組織早期損傷的內源性分子，在對克羅恩病、潰瘍性結腸炎等炎性疾病的研究中已經證實血清中S100蛋白水平異常升高[1]。類風濕關節炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性炎癥性疾病，多種炎癥因子參與疾病的發生和發展。鈣衛蛋白是否參與了RA的疾病過程目前尚不清楚。本研究旨在通過檢測RA患者血清鈣衛蛋白水平，分析其與RA疾病活動的相關關系，初步探討RA患者檢測血清鈣衛蛋白的臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2016年7月-2017年4月于天津醫科大學總醫院風濕免疫科就診的類風濕關節炎患者共55例，其中男性8例，女性47例，年齡28～76歲，平均（55±10）歲，病程 1～360個月，平均（68±79）個月，中位數36個月。所有入選患者均符合美國風濕病學會（ACR）2010年修訂的RA分類標準。同時選取健康志愿者25例，其中女性18例，男性7例，年齡 24～47 歲,平均（35±7）歲。

1.2 方法 入選者晨起空腹采靜脈血3 mL，分離血清并于-20℃冰箱凍存。采用ELISA方法測定血清中鈣衛蛋白水平，試劑盒購自美國Alpco公司。其它實驗室檢測項目包括：血沉（ESR）、C反應蛋白（CRP）、血小板（PLT）、免疫球蛋白 G（IgG）等，檢驗數據均來自本院檢驗中心。根據歐洲風濕病聯盟推薦的RA疾病活動指數（DAS）28評分[2]將RA患者分組：≥2.6分為活動組，＜2.6分為緩解組。計數RA患者28個關節中腫脹與壓痛的關節。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件進行數據統計及分析。計量資料組間比較用獨立樣本t檢驗；正態分布的兩樣本間的相關性采用Pearson相關性分析。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 RA患者組及健康對照組相關臨床指標的比較 如表1所示，RA患者組血清鈣衛蛋白水平明顯高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.01），ESR、CRP、IgG、PLT水平RA患者組較健康對照組均明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01）。

2.2 鈣衛蛋白水平與臨床指標的相關性分析 RA患者鈣衛蛋白水平與血沉（r=0.401，P＜0.01）、CRP（r=0.318，P＜0.05）、PLT（r=0.355，P＜0.01）、IgG（r=0.269，P＜0.05）、DAS28 評分（r=0.544，P＜0.01）、關節腫脹計數（r=0.362，P＜0.05）、關節壓痛計數（r=0.273，P＜0.05）呈正相關。

表1 RA患者組及健康對照組相關臨床指標的比較（±s）Tab 1 Comparison of clinical indices between RA patients group and healthy control（±s）

表1 RA患者組及健康對照組相關臨床指標的比較（±s）Tab 1 Comparison of clinical indices between RA patients group and healthy control（±s）

組別例數鈣衛蛋白/（p g/m L）E S R/(m m/h)C R P/(m g/d L)I g G/(m g/d L)P L T(1 0 9/L)R A 組 5 5 2 5 1.3 8±4 8.7 2 4 1.9 6±1 3.2 4 2.4 2±2.6 5 1 6 4 8.0 0±4 4 4.7 8 2 7 6.6 2±1 0 7.6 8對照組 2 5 2 1 6.5 3±4 0.9 5 1 1.5 6±4.6 3 0.3 3±0.1 7 1 1 6 5.6 0±1 3 5.5 8 1 9 3.2 4±4 0.6 4 t 3.1 0 9 1 1.1 4 3 3.9 3 7 5.2 9 9 3.7 4 2 P＜0.0 1 ＜0.0 1 ＜0.0 1 ＜0.0 1 ＜0.0 1

表2 RA活動組、緩解組及對照組的血清鈣衛蛋白水平比較（±s）Tab 2 Comparison of serum calprotectin level among RA activity group,remission group and control group （±s）

表2 RA活動組、緩解組及對照組的血清鈣衛蛋白水平比較（±s）Tab 2 Comparison of serum calprotectin level among RA activity group,remission group and control group （±s）

對照組與緩解組之間血清鈣衛蛋白水平差異無統計學意義

組別n鈣衛蛋白/（p g/m L）t P R A組活動組（R 1） 3 4 2 7 8.7 5±3 7.8 0 7.5 8 2（R 1與R 2） ＜0.0 1緩解組（R 2） 2 1 2 0 7.0 7±2 6.7 7 6.0 3 0（R 1與N） ＜0.0 1對照組（N） 2 5 2 1 6.5 3±4 0.9 5 0.9 4 1（R 2與 N） ＞0.0 5

2.3 RA患者緩解期與活動期的鈣衛蛋白變化分析 RA患者緩解組的血清鈣衛蛋白水平低于健康對照組，但差異無統計學意義（P＞0.05）；RA患者活動組的血清鈣衛蛋白水平高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.01）；RA患者活動組的血清鈣衛蛋白水平高于緩解組，差異有統計學意義（P＜0.01），見表2。

3 討論

S100A8和S100A9是鈣結合蛋白，二者結合形成鈣衛蛋白。在健康成人血清中可以檢測到鈣衛蛋白，其水平在組織受損或炎癥狀態下會異常升高[3]。已有研究證實，細胞內鈣衛蛋白在髓細胞成熟、細胞運輸和花生四烯酸代謝中起重要作用，分泌到細胞外對嗜中性粒細胞、單核細胞/巨噬細胞等炎癥細胞具有趨化作用，可使其聚集到炎癥部位參與炎癥反應[4]。同時，鈣衛蛋白還可以增加一氧化氮合酶表達水平，激活JNK、ERK1/2、JAK/STAT以及NF-κB等多條信號傳導途徑，介導炎癥反應[5]。此外，鈣衛蛋白是Toll樣受體（TLR）和晚期糖基化終產物（RAGE）受體的配體，與其結合后可以激活抗原提呈樹突狀細胞，活化的樹突狀細胞直接參與調節自身免疫應答反應[6]。

有研究對發炎關節的滑液使用質譜法進行了分析，發現鈣衛蛋白是主要的蛋白質，并且在血漿和滑液中的水平之間發現顯著相關性。鈣衛蛋白分子量僅為36.5 kDa，炎癥部位激活的嗜中性粒細胞和單核細胞/巨噬細胞釋放的鈣衛蛋白可直接入血，因此檢測血液中的鈣衛蛋白水平可以反映局部炎癥程度[7]。本研究發現RA患者血清鈣衛蛋白水平高于健康對照組，且與血沉、CRP、PLT、IgG、DAS28 評分、腫脹關節計數、壓痛關節計數等疾病活動指標呈正相關。進一步分組比較發現，緩解期RA患者血清鈣衛蛋白水平顯著低于活動期患者。上述結果提示鈣衛蛋白水平與疾病活動度相關，可能參與了RA的慢性炎癥過程。血沉和CRP是常用的炎癥指標，其中CRP主要通過NF-κB和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路致炎，并且 IL-1、IL-6、TNF-α 等細胞因子可進一步刺激肝細胞分泌CRP。PLT、IgG可以反映免疫的活躍程度，PLT通過MAPK、磷脂酶A2（PLA2）花生四烯酸通路等激活和增殖，IgG是再次免疫應答的主要抗體；DAS28評分、腫脹關節計數和壓痛關節計數在RA中被用來評估疾病活動情況，均會隨著RA疾病的活躍而升高。鈣衛蛋白通過激活JNK、MAPK、NF-Κb等信號傳導通路釋放大量細胞因子如 IL-1、IL-6、IL-8、IL-12 和 TNF-α等，進而放大炎癥中的細胞因子級聯反應。鈣衛蛋白理化性質相對穩定，且不易被蛋白酶降解，是評價炎癥活動程度的良好標志物，有研究已經證明鈣衛蛋白可能是比CRP更敏感的炎癥標志物，其與超聲評估的滑膜炎有明顯相關性[8-9]。Choi等[10]對139例標準劑量腫瘤壞死因子拮抗劑（英夫利昔單抗、阿達木單抗和利妥昔單抗）治療2～8周的RA患者研究發現，治療后血清鈣衛蛋白水平較基線水平顯著降低。

綜上所述，血清鈣衛蛋白水平在RA患者顯著升高，且升高的血清鈣衛蛋白水平與RA的疾病活動程度相關，有望成為評價RA疾病活動的血清學指標之一。

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