齊墩果酸糖苷衍生物的合成及抗腫瘤活性的研究

湯 義， 鹿學(xué)宇， 孟艷秋

(沈陽化工大學(xué) 制藥與生物工程學(xué)院， 遼寧 沈陽 110142)

齊墩果酸(Oleanic acid,OA)又名慶四素，化學(xué)名3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-28-酸，屬于五環(huán)三萜類化合物，多以皂苷形式存在,具有廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，如保肝、抗炎、抗腫瘤、抗艾滋病毒等藥理作用[1-5].研究表明，C-28位羧基成酯或酰胺的齊墩果酸衍生物具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性[6-7]，且已有大量研究表明，糖鏈對(duì)三萜類化合物的生物活性關(guān)系密切，糖鏈的改變可能對(duì)皂苷的活性產(chǎn)生較大影響，MATSUDA[8]等在研究齊墩果酸皂苷對(duì)口服葡萄糖大鼠的血糖水平影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)齊墩果酸3-糖鏈和28-羧基糖鏈兩個(gè)結(jié)構(gòu)對(duì)降血糖活性極其重要，并且C-3位連接葡萄糖和葡萄糖醛酸對(duì)活性影響顯著不同，為了深入研究齊墩果酸結(jié)構(gòu)與其抗腫瘤活性的關(guān)系，本文以O(shè)A為先導(dǎo)化合物，保留五環(huán)三萜骨架，對(duì)C-3、C-28位進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，合成4個(gè)新型齊墩果酸衍生物.以天然皂苷中常見的單糖為原料，經(jīng)苯甲?；Ｗo(hù)，異頭碳溴代，水解，與三氯乙腈成酯等反應(yīng)合成4個(gè)糖苷供體A1～A4[9-10].同時(shí)以齊墩果酸為原料，與溴芐反應(yīng)生成28位芐酯衍生物OA0，在TMSOTf催化下OA0和A1～A4反應(yīng)生成齊墩果酸糖苷化合物，最后在堿性條件下脫除保護(hù)基團(tuán)得到4個(gè)目標(biāo)產(chǎn)物Ⅰa～Ⅰd.

合成路線如下：

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要試劑與儀器

D-葡萄糖，D-木糖，D-半乳糖，L-鼠李糖，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；吡啶，上海實(shí)意化學(xué)試劑有限公司；苯甲酰氯，上海同方精細(xì)化工有限公司；氮雜二環(huán)(DBU)，Acros；三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTf)；薄層色譜硅膠GF254，柱色譜硅膠(100～200目，青島海洋化工廠)；齊墩果酸購(gòu)于陜西森弗生物技術(shù)有限公司；Büchi B-540熔點(diǎn)測(cè)定儀(未校正)；BrukerARX-600型核磁共振分析儀，CDCl3為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo)，其他試劑均為分析純.

1.2 中間體的合成

1.2.1 2,3,4,6-四-O-苯甲?；咸烟侨纫阴啺孵?/p>

1.2.1.1 全苯甲?；咸烟堑闹苽?/p>

稱取1.0 g(5.6 mmol)葡萄糖溶于20 mL無水吡啶，冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯5 mL(43.6 mmol)，滴加時(shí)溶液變渾濁，10 min內(nèi)滴加完畢.升至室溫，反應(yīng)8 h，向反應(yīng)液中加甲醇2 mL淬滅反應(yīng).減壓蒸除溶劑，以二氯甲烷溶解剩余物，分別以稀鹽酸30 mL，碳酸氫鈉30 mL，飽和食鹽水30 mL洗滌3次，分離有機(jī)相，無水MgSO4干燥，無需純化直接進(jìn)行下一步.收率95 %.mp：178～180 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ：8.18～7.30(25H,m,Ar—H)；6.36(1H,d,7.8 Hz,H-1)；6.10(1H,t,J=7.8 Hz,H-3)；5.87(2H,m,H-4,2)；4.68,4.52,4.46(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):700.21[M+H]+.

1.2.1.2 端基的溴代反應(yīng)

取3.5 g(5.0 mmol)1.2.1.1的反應(yīng)產(chǎn)物，溶于20 mL無水二氯甲烷中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)33 %氫溴酸醋酸溶液1.5 mL，溶液變成淺黃色，室溫?cái)嚢? h后在冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL，分離有機(jī)相，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，無需純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng).收率87 %.mp:128～130 ℃.1H-NMR(600 MHz，CDCl3)，δ:8.10～7.35(20H,m,Ar—H)；6.55(1H,d,J=5.6 Hz,H-1)；6.25(1H,dd,J=7.9 Hz,5.6 Hz,H-2)；5.85(1H,dd,J=7.9 Hz,4.9 Hz,H-4)；5.35(1H,t,J=7.9 Hz,H-3)；4.85,5.05,5.25(3H,m,6′,6,5).ESI-MS(m/z):659.50[M+H]+.

1.2.1.3 異頭碳水解

取2.5 g(4.1 mmol)干燥的溴代苯甲?；咸烟侨苡?0 mL丙酮中，再加入0.5 mL蒸餾水，加入0.8 g Ag2CO3室溫?cái)嚢? h.加硅藻土抽濾，減壓蒸出溶劑丙酮，滴加幾滴甲苯將水蒸出，紅外燈下干燥.收率80 %.mp:58～63 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:8.05～7.30(20H,m,Ar—H)；6.05(1H,d,J=7.7 Hz,H-1)；5.64(1H,dd,J=10.2 Hz,7.7 Hz,H-2)；5.53(1H,t,J=7.8 Hz,H-3)；5.20(1H,dd,J=10.3 Hz,7.2 Hz,H-4)；4.62,4.48,4.42(3H,m,5,6,6′).ESI-MS(m/z):596.23[M+H]+.

1.2.1.4 2,3,4,6-四-O-苯甲?；咸烟侨纫阴啺孵?/p>

取2.0 g(3.3 mmol)1.2.1.3產(chǎn)物1-羥基苯甲酰葡萄糖溶于30 mL無水二氯甲烷，加入DBU 0.48 mL，攪拌10 min，加入0.6 mL三氯乙腈，攪拌5 h，蒸干溶劑，剩余物溶解于適量二氯甲烷中，以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣，自然揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱.洗脫劑為V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1，得終產(chǎn)物2.86 g，產(chǎn)率70 %.mp:71～74 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.63(1H,s,NH)；8.08～7.30(20H,m,Ar—H)；6.82(1H,d,J=3.6 Hz,H-1);6.26(1H,t,J=10.2 Hz,H-3);5.82(1H,t,J=10.2 Hz,H-4)；4.69(1H,dd,J=3.6 Hz,10.2 Hz,H-2)；4.65,4.64,4.49(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):619.11[M+H]+.

1.2.2 2,3,4,6-四-O-苯甲?；肴樘侨纫阴啺孵?/p>

1.2.2.1 全苯甲?；肴樘堑暮铣?/p>

稱取1.0 g(5.6 mmol)葡萄糖溶于20 mL無水吡啶，冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯5 mL(43.6 mmol),滴加時(shí)溶液變渾濁，10 min內(nèi)滴加完畢.自然升至室溫?cái)嚢璺磻?yīng)8 h，向反應(yīng)液中加甲醇2 mL淬滅反應(yīng)，減壓蒸除溶劑，以二氯甲烷溶解剩余物，分別以稀鹽酸30 mL，碳酸氫鈉30 mL，飽和食鹽水30 mL洗滌3次，分離有機(jī)相，無水MgSO4干燥，無需純化直接進(jìn)行下一步.收率97 %.mp:135～138 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ：8.23～7.30(25H,m,Ar—H)；6.79(1H,d,J=2.8 Hz,H-1)；6.28(1H,t,J=3.6 Hz,H-4)；5.75(1H,dd,J=9.6 Hz,3.6 Hz,H-3)；4.69(1H,dd,J=2.8 Hz,9.6 Hz,H-2)；4.68,4.52,4.46(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):700.21[M+H]+.

1.2.2.2 端基的溴代反應(yīng)

取3.5 g(5.0 mmol)1.2.2.1反應(yīng)產(chǎn)物，溶于20 mL無水二氯甲烷中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)33 % HBr-CH3COOH溶液1.5 mL,溶液變成淺黃色，室溫?cái)嚢? h后在冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL，分離有機(jī)相，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，硫酸鎂干燥,無需純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng).收率86 %.mp:111～114 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:8.14～7.35(20H,m,Ar—H)；6.85(1H,d,J=2.9 Hz,H-1)；6.15(1H,dd,J=9.6 Hz,2.9 Hz,H-2)；6.28(1H,t,J=3.2 Hz,H-4)；5.35(1H,dd,J=9.6 Hz,3.2 Hz,H-3)；4.75,5.0,5.15(3H,m,6′,6,5).ESI-MS(m/z):659.50[M+H]+.

1.2.2.3 異頭碳水解

取2.5 g(4.1 mmol)干燥的溴代苯甲?；肴樘侨苡?0 mL丙酮中，再加入0.5 mL蒸餾水，加入0.8 g Ag2CO3室溫?cái)嚢? h.加硅藻土抽濾，減壓蒸出溶劑丙酮，滴加幾滴甲苯將水蒸出，紅外燈下干燥.收率82.5 %.mp:85～87 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:8.25～7.30(20H,m,Ar—H)；6.05(1H,d,J=3.0 Hz,H-1)；5.64(1H,t,J=3.8 Hz,H-4)；5.20(1H,dd,J=10.2 Hz,3.0 Hz,H-2)；5.33(1H,t,J=10.2 Hz,3.8 Hz,H-3)；4.71,4.58,4.42(3H,m,5,6,6′).ESI-MS(m/z):596.23[M+H]+.

1.2.2.4 2,3,4,6-四-O-苯甲?；肴樘侨纫阴啺孵?/p>

取2.0 g(3.3 mmol)1.2.2.3產(chǎn)物1-羥基苯甲酰半乳糖溶于30 mL無水二氯甲烷，加入DBU 0.48 L,攪拌10 min，加入0.6 mL三氯乙腈,攪拌5 h,蒸干溶劑,剩余物溶解于適量二氯甲烷中,以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣,自然揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱,以石油醚-乙酸乙酯[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1]淋洗,減壓回收溶劑減壓蒸干溶劑得目標(biāo)產(chǎn)物.產(chǎn)率74 %.mp:68～73 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:10.03(1H,s,NH);8.08～7.30(20H,m,Ar—H)；6.79(1H,d,J=2.8 Hz,H-1)；6.28(1H,t,J=3.6 Hz,H-4)；5.82(1H,dd,J=9.6 Hz,3.6 Hz,H-3)；4.69(1H,dd,J=2.8 Hz,9.6 Hz,H-2)；4.65,4.64,4.49(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):619.0[M+H]+.

1.2.3 1,2,3,4,5-五-O-苯甲酰基木糖的合成

1.2.3.1 全苯甲酰木糖的合成

稱取0.5 g(2.8 mmol)木糖溶于10 mL無水吡啶，冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯3 mL(22.8 mmol).滴加完畢，升至室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5 h，向反應(yīng)液中加甲醇1 mL淬滅反應(yīng)，減壓蒸除溶劑，以二氯甲烷溶解剩余物，分別以稀鹽酸15 mL，碳酸氫鈉15 mL，飽和食鹽水15 mL洗滌3次，分離有機(jī)相，無水MgSO4干燥，無需純化直接進(jìn)行下一步.收率95 %.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.31～7.45(20H,m,Ar—H)；6.50(1H,d,J=2.8 Hz,H-1)；5.98(1H,t,J=3.2 Hz,H-2)；5.85(1H,m,H-3)；5.59(1H,m,H-4)；4.50(1H,d,J=13.2 Hz,H-5)；4.23(1H,dd,J=2.0 Hz,13.2 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):566.1[M+H]+.

1.2.3.2 異頭碳的溴代

取1.5 g(2.6 mmol)1.2.3.1反應(yīng)產(chǎn)物，溶于20 mL無水二氯甲烷中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)33 %HBr-CH3COOH溶液1.0 mL,溶液變成淺黃色，室溫?cái)嚢? h后冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL，分離有機(jī)相，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，無需純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng).收率87 %.mp:121～123 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.14～7.45(15H,m,Ar—H)；6.42(1H,d,J=2.8 Hz,H-1)；5.86(1H,t,J=3.2 Hz,H-2)；5.62(1H,m,H-3)；5.39(1H,m,H-4)；4.31(1H,d,J=13.2 Hz,H-5)；4.05(1H,dd,J=2.0 Hz,13.2 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):525.3[M+H]+.

1.2.3.3 異頭碳水解

取1.2 g(2.2 mmol)干燥的溴代苯甲?；咎侨苡?0 mL丙酮中，再加入0.5 mL蒸餾水，加入0.35 g Ag2CO3室溫?cái)嚢? h.硅藻土抽濾，減壓蒸出溶劑，滴加幾滴甲苯將水蒸出，紅外燈下干燥.收率83 %.mp:135～137 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.22～7.45(15H,m,Ar—H)；6.22(1H,d,J=3.0 Hz,H-1)；5.66(1H,t,J=3.2 Hz,H-2)；5.58(1H,m,H-3)；5.39(1H,m,H-4)；4.11(1H,d,J=11.5 Hz,H-5)；3.95(1H,d,J=2.0 Hz,11.5 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):462.6[M+H]+.

1.2.3.4 2,3,4-三-O-苯甲?；咎侨纫阴啺孵サ暮铣?/p>

取0.8 g(1.7 mmol)1.2.3.3產(chǎn)物1-羥基苯甲酰葡萄糖溶于30 mL無水二氯甲烷，加入DBU 0.48 mL,攪拌10 min，加入0.6 mL三氯乙腈,攪拌5 h,蒸干溶劑,剩余物溶解于適量二氯甲烷中,以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣,揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱.以石油醚-乙酸乙酯[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1]淋洗,減壓回收溶劑蒸干溶劑得目標(biāo)產(chǎn)物.產(chǎn)率69 %.mp：65～67 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:10.03(1H,s,NH)；8.14～7.35(15H,m,Ar—H)；6.42(1H,d,J=2.8 Hz,H-1)；5.86(1H,t,J=3.2 Hz,H-2)；5.62(1H,m,H-3)；5.39(1H,m,H-4)；4.31(1H,d,J=13.5 Hz,H-5)；4.05(1H,d,J=2.0 Hz,13.5 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):605.5[M+H]+.

1.2.4 1,2,3,4-四-O-苯甲酰基吡喃鼠李糖的合成

1.2.4.1 全苯甲酰鼠李糖的合成

稱取0.5 g(3.0 mmol)鼠李糖溶于20 mL無水吡啶和無水二氯甲烷混合溶劑中[V(無水吡啶)/V(無水二氯甲烷)=1]，冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯3 mL(43.6 mmol).滴加完畢，升至室溫?cái)嚢璺磻?yīng)5 h，向反應(yīng)液中加甲醇2 mL淬滅反應(yīng)，減壓蒸除溶劑，以二氯甲烷溶解剩余物，分別以稀鹽酸20 mL，碳酸氫鈉20 mL，飽和食鹽水20 mL洗滌3次，分離有機(jī)相，無水MgSO4干燥，無需純化直接進(jìn)行下一步.收率95 %.mp:153～155 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.25～7.30(20H,m,Ar—H)；6.58(1H,d,J=2.8 Hz,H-1)；5.85(1H,t,J=3.1 Hz,H-4)；5.65(1H,dd,J=2.8 Hz,9.5 Hz,H-2)；5.58(1H,t,J=9.5 Hz,3.1 Hz,H-3)；4.39(1H,q,J=6.2 Hz,H-5)；1.16(3H,d,J=6.2 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):580.5[M+H]+.

1.2.4.2 異頭碳溴代

取1.2 g(2.5 mmol)1.2.4.1反應(yīng)產(chǎn)物,溶于20 mL無水二氯甲烷中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)33 %HBr-CH3COOH溶液1.5 mL,溶液變成淺黃色，室溫?cái)嚢? h后在冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL，分離有機(jī)相，有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，無需純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng).收率87 %.mp:132～134 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.05～7.30(15H,m,Ar—H)；6.44(1H,d,J=3.0 Hz,H-1)；5.81(1H,t,J=2.5 Hz,H-4)；5.73(1H,dd,J=3.0 Hz,10.4 Hz,H-2)；5.62(1H,dd,J=10.4 Hz,2.5 Hz,H-3)；4.43(1H,q,J=5.6 Hz,H-5)；1.22(3H,d,J=5.6 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):539.5[M+H]+.

1.2.4.3 異頭碳水解

取1.1 g(2.0 mmol)干燥的溴代苯甲酰基鼠李糖溶于20 mL丙酮中，再加入0.5 mL蒸餾水，加入0.3 g Ag2CO3室溫?cái)嚢? h.加硅藻土抽濾，減壓蒸出溶劑丙酮，滴加幾滴甲苯將水蒸出，紅外燈下干燥.收率86 %.mp:99～103 ℃,1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:8.10～7.34(15H,m,Ar—H)；6.44(1H,s,H-1)；5.81(1H,s,H-4)；5.73(1H,dd,J=3.0 Hz,10.0 Hz,H-2)；5.62(1H,t,J=8.9 Hz,2.5 Hz,H-3)；4.39(1H,q,J=6.2 Hz,H-5)；1.22(3H,d,J=6.2 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):476.5[M+H]+.

1.2.4.4 2,3,4-三-O-苯甲酰基鼠李糖三氯乙酰亞胺酯的合成

取0.8 g(1.6 mmol)1.2.4.3上一步產(chǎn)物1-羥基苯甲酰鼠李糖溶于30 mL無水二氯甲烷，加入DBU 0.48 mL,攪拌10 min，加入0.6 mL三氯乙腈,攪拌5 h,蒸干溶劑,剩余物溶解于適量二氯甲烷中,以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣,自然揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱.以石油醚-乙酸乙酯[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1]淋洗,減壓回收溶劑減壓蒸干溶劑得目標(biāo)產(chǎn)物.產(chǎn)率79 %.mp:83～91 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),mp:85～86 ℃,δ:10.15(1H,s,NH)；8.00～7.34(15H,m,Ar—H)；6.44(1H,s,H-1)；5.81(1H,s,H-4)；5.73(1H,dd,J=3.0 Hz,10.0 Hz,H-2)；5.62(1H,dd,J=10.0 Hz,2.6 Hz,H-3)；4.39(1H,q,J=6.2 Hz,H-5)；1.32(3H,d,J=6.2 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):619.4[M+H]+.

1.3 齊墩果酸芐酯的合成

稱量0.20 g(0.44 mmol)齊墩果酸，溶于DMF中，加入溴芐0.5 mL，無水碳酸鉀0.06 g，室溫反應(yīng).TLC檢測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)，展開劑[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1]，10 h反應(yīng)結(jié)束.以飽和食鹽水打漿，過濾后得白色產(chǎn)物0.18 g，產(chǎn)率為75 %.mp:254.5～256.3 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:7.3～7.89(m,5H,Ar—H)；5.21(s,1H,H-12)；2.74(t,J=7.5 Hz,1H,H-18)；5.34(s,2H,PhCH2)；2.96(m,1H,H-3)；2.01～1.21(m,25H)；1.02(s,3H,CH3)；0.97(s,3H,CH3)；1.20(s,3H,CH3)；1.10(s,3H,CH3)；0.99(s,3H,CH3)；0.89(s,3H,CH3)；0.87(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):546.5[M+H]+.

1.4 齊墩果酸葡萄糖皂苷Ⅰa的合成

1.4.1 糖苷化反應(yīng)

取0.1 g(1.8 mmol)糖苷受體，0.15 g苷元，溶于無水二氯甲烷中，加0.3 g 4A分子篩，冰鹽浴下攪拌0.5 h，加5滴TMSOTf，冰浴下反應(yīng)4 h，加幾滴三乙胺淬滅反應(yīng)，過濾，減壓蒸除溶劑，無需純化直接進(jìn)行下一步反應(yīng).收率75 %.mp：201.5～205.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ：8.16～7.30(25H,m,Ar—H)；5.20(1H,s,H-12)；5.54(1H,s,H-1′)；5.25(1H,t,J=10.2 Hz,H-3′)；4.65(1H,t,J=10.2 Hz,H-4′)；4.98(1H,dd,J=3.6 Hz,10.2 Hz,H-2′)；4.65，4.64，4.49(3H,m,H-5′,6′,6′)；2.79～3.01(m,1H,H-3)；1.98～1.21(m,25H，1.10(s,3H,CH3)；0.97(s,3H,CH3)；1.05(s,3H,CH3)；1.16(s,3H,CH3)；0.99(s,3H,CH3)；0.89(s,3H,CH3)；0.87(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):1125.5[M+H]+.

1.4.2 水解反應(yīng)

取1.4.1的反應(yīng)產(chǎn)物3-O-(β-D-2,3,4,6-四-O-苯甲?；拎咸烟?齊墩果烷型-11烯-28-芐酯，溶于已配好的甲醇鈉/甲醇溶液[13](pH≈10)中.TLC檢測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)，展開劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=6/1，4 h反應(yīng)結(jié)束.反應(yīng)液中再加入適量陽離子交換樹脂攪拌，調(diào)節(jié)pH值使溶液呈中性.過濾，減壓蒸除溶劑.粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離純化，洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1～10/1，得產(chǎn)物0.62 g.產(chǎn)率67.25 %.mp：221.5～226.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:7.28～7.93(m,5H,Ar—H)；5.30(s,1H,H-12)；5.04(d,J=7.7 Hz,1H,H-1′)；2.28(t,J=7.6 Hz,1H,H-18)；2.96(m,1H,H-3)；3.51～3.47(m,H-2′,3′,5′,3H)；3.65(m,1H,H-4′)；3.32～3.18(m,H-6′)；2.15～1.25(m,25H)；1.01(s,3H,CH3)；1.10(s,3H,CH3)；0.97(s,3H,CH3)；0.89(s,3H,CH3)；1.03(s,3H,CH3)；0.97(s,3H,CH3)；1.05(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):708.5[M+H]+.

1.5 3-O-(β-D-吡喃半乳糖)-齊墩果烷型-12-烯-28芐酯Ⅰb的合成

參照Ⅰa合成方法，合成化合物Ⅰb.粗品經(jīng)硅膠柱色譜純化，洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1～10/1，得白色固體，收率為65.12 %.mp:213.1～217.0 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3)，δ:7.85～7.46(m,5H,Ar—H)；5.26(s,1H,H-12)；4.95(d,J=7.5 Hz,1H,H-1′)；2.18(t,J=6.7 Hz,1H,H-18)；2.88(m,1H,H-3)；3.51(m,1H,H-4′)；3.40～3.23(m,H-2′,3′,5′,3H)；2.01～1.36(m,25H)；1.09(s,6H,2CH3)；1.16(s,6H,2CH3)；0.98(s,3H,CH3)；0.90(s,3H,CH3)；1.15(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):708.5[M+H]+.

1.6 3-O-(α-D-吡喃木糖)-齊墩果烷型-12-烯-28-芐酯Ⅰc的合成

參照Ⅰa合成方法，合成化合物Ⅰc.粗品經(jīng)硅膠柱色譜純化，洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1～10/1，得白色固體，收率58.25 %.mp：194.7～197.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:7.84～7.43(m,5H,Ar—H);5.27(s,1H,H-12);4.89(d,J=2.8 Hz,1H,H-1′);2.26(t,J=7.5 Hz,1H,H-18);2.78(m,1H,H-3);3.55～3.33(m,H-2′,3′,4′,3H);3.26～3.11(m,2H,H-5,5′);1.08(s,6H,2CH3);1.02(s,3H,CH3);0.98(s,3H,CH3);0.87(s,3H,CH3);1.15(s,6H,2CH3);1.98～1.29(m,25H).ESI-MS(m/z):678.4[M+H]+.

1.7 3-O-(α-L-吡喃鼠李糖)-齊墩果烷型-12-烯-28芐酯Ⅰd的合成

參照Ⅰa的合成方法，合成化合物Ⅰd.粗品經(jīng)硅膠柱色譜純化，洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1～10/1，得白色固體，收率62.35 %.mp：197.5～203.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:7.99～7.33(m,5H,Ar—H);5.27(s,1H,H-12);4.79(d,J=3.2 Hz,1H,H-1′);2.30(t,J=7.6 Hz,1H,H-18);2.90(m,1H,H-3);3.55～3.33(m,H-2′,3′,4′,3H);1.18(d,J=6.1,3H,CH3);1.11(s,6H,2CH3);1.01(s,3H,CH3);0.96(s,3H,CH3);0.89(s,3H,CH3);1.25(s,6H,2CH3);1.95～1.30(m,25H).ESI-MS(m/z):692.4[M+H]+.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

2.1 化學(xué)部分

以齊墩果酸為先導(dǎo)化合物，將C-28位羧基與溴芐反應(yīng)成酯，A環(huán)C-3位羥基進(jìn)行糖苷化反應(yīng)，設(shè)計(jì)并合成了4個(gè)齊墩果酸糖苷衍生物.以上目標(biāo)產(chǎn)物在反應(yīng)過程中采用TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)終點(diǎn)，柱層析純化，其結(jié)構(gòu)通過1H-NMR，MS等得以確證.

糖基三氯乙酰亞胺酯是寡糖及糖綴合物合成中的重要糖苷化試劑[11]，然而因?yàn)檫€原性單糖有很多活性羥基，制備糖苷供體過程中主要問題在于異頭碳區(qū)域選擇性反應(yīng)反應(yīng)試劑的選擇，有文獻(xiàn)報(bào)道用芐胺[12]，乙二胺等弱堿催化異頭碳苯甲酰酯的水解，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這些條件會(huì)導(dǎo)致其他位置酯基的水解，副產(chǎn)物多，實(shí)驗(yàn)條件不易控制.采用氫溴酸-乙酸試劑先溴代后水解，主要是利用異頭碳在陽離子引發(fā)劑作用下酯鍵斷裂形成能量不是很高的氧鎓離子中間體，從而使反應(yīng)更有選擇性，其次，溴代反應(yīng)需控制體系無水，因?yàn)樵陉栯x子引發(fā)劑作用下，若體系有水，根據(jù)軟硬酸堿理論，水分子會(huì)先與羰基碳正離子作用成鍵，而酯鍵斷裂是速控步，反應(yīng)慢，因此若體系有水，該歩產(chǎn)率將會(huì)很低.

苯甲?；摫Ｗo(hù)[13]步由于產(chǎn)物中有氧苷鍵，酸催化脫保護(hù)容易使苷鍵斷裂，利用氧苷鍵周圍的大位阻環(huán)境，在堿性條件下不易進(jìn)攻苷鍵使其斷裂，故選用甲醇鈉/甲醇催化脫保護(hù)，并控制pH值在10左右，獲得很好的收率.且C-28位芐酯也在此條件下也因?yàn)榭臻g位阻的影響不易水解從而得以保存.

2.2 生物活性部分

以吉菲替尼和阿霉素為陽性對(duì)照藥，采用MTT法對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行初步的體外活性測(cè)試，活性數(shù)據(jù)見表1.

表1 目標(biāo)化合物對(duì)Hela、BGC-823細(xì)胞的抑制率Table 1 Inhibitory activity of the target compounds on the Hela and BGC-823 cells

3 結(jié)果與討論

從表1所測(cè)結(jié)果分析：在OA的C-3位聯(lián)接單糖，C-28位成芐酯得到的衍生物對(duì)Hela、BGC-823細(xì)胞都具有一定的抗腫瘤活性；Ⅰc、Ⅰd對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的抑制率高于Ⅰa、Ⅰb，可能是因?yàn)镃-3位連接的脫氧單糖使目標(biāo)化合物具有更好的活性.由表1可知：本文合成的齊墩果酸糖苷衍生物對(duì)Hela和BGC-823細(xì)胞均有一定程度的抑制作用，但對(duì)BGC-823細(xì)胞的抑制作用更加明顯.

相對(duì)于OA，Ⅰa～Ⅰd對(duì)子宮頸癌細(xì)胞Hela細(xì)胞系和人胃腺癌細(xì)胞BGC-823細(xì)胞系抑制率更高.在齊墩果酸C-3位連接單糖基增加了齊墩果酸衍生物的親水性基團(tuán)，C-28位連接溴芐成酯提高熊果酸衍生物的脂溶性，使其具有良好的脂水分配系數(shù)可能是這些衍生物具有較高抑制活性的原因.

這一研究結(jié)果為齊墩果酸的進(jìn)一步結(jié)構(gòu)優(yōu)化，尋找更高活性的目標(biāo)分子提供了一定的參考依據(jù).

：

[1] 張明發(fā),沈雅琴.齊墩果酸和熊果酸保肝藥理作用的研究進(jìn)展[J].抗感染藥學(xué),2012,9(1):13-19.

[2] 趙龍鉉,沈平,鄭昌吉,等.齊墩果酸衍生物的合成與表征及其抑菌活性的研究[J].遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2012,35(1):63-68.

[3] 吳悠,張秋,王瑤.齊墩果酸的藥理作用機(jī)制及其在齲病治療中的研究進(jìn)展[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,37(5)：544-546.

[4] 趙龍鉉,賀興隆,金禮吉,等.齊墩果酸和甘草次酸衍生物的合成與表征及抗癌活性研究[J].遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2010,33(4):474-479.

[5] 曲正義,劉宏群,鄭培和,等.齊墩果酸型皂苷藥理活性研究[J].中成藥,2012,34(6):1143-1147.

[6] 蘇春華,程克光,初相伍,等.齊墩果酸-α-氨基膦酸酯衍生物的合成與抗腫瘤活性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(8):123-128.

[7] MALLAVADHANI U V,MAHAPATRA A,PATTNAIK B,et al.Synthesis and Anti-Cancer Activity of Some Novel C-17 Analogs of Ursolic and Oleanolic Acids[J].Medicinal Chemistry Research,2013,22(3):1263-1269.

[8] MATSUDA H,LI Y,MURAKAMI T,et al.Antidiabetic Principles of Natural Medicines.Ⅲ.Structure-Related Inhibitory Activity and Action Mode of Oleanolic Acid Glycosides on Hypoglycemic Activity[J].Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1998,46(9):1399-1403.

[9] CATENI F,BONIVENTO P,PROCIDA G,et al.Chemoenzymatic Synthesis and Antimicrobial Activity Evaluation of Monoglactosyl Diglycerides[J].Eur.J.Med.Chem.,2008,43(1):210-221.

[10] 李曉東,康帥濤,許環(huán)軍,等.糖苷化試劑-糖基三氯乙酰亞胺酯的高效制備[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,28(9):707-711.

[11] SCHMIDT R R,KINZY W.Anomeric-Oxygen Activation for Glycoside Synthesis:the Trichloroacetimidate Method[J].Advances in Carbohydrate Chemistry&Biochemistry,1994,50:21-123.

[12] KELLER-JUSLéN C,KUHN M,STHELIN H,et al.Synthesis and Antimitotic Activity of Glycosidic Lignan Derivatives Related to Podophyllotoxin[J].Journal of Medicinal Chemistry,1971,14(10):936-940.

[13] 龐思平,于永忠.苯甲?；拿撊J].合成化學(xué),2001，9(5)：407-412.