多種植物活性物質混配劑對瓜類白粉病病菌毒力測定和藥效試驗

吾建祥，周小軍，凌士鵬，楊德毅，萬梨芳

（1.金華市農產品質量綜合監督檢測中心，浙江 金華 321000；2.金華市農業科學研究院，浙江 金華 321017；3.浙江華京生物科技有限公司，浙江 金華 321000）

目前人們已經在野生植物資源中發現了很多具有殺蟲、殺菌、抗病毒和除草作用的天然活性物質，其有效成分是植物體中的次生代謝產物，如生物堿類、黃酮類、萜烯類、酚類等。因其具有不破壞生態環境、靶標有害生物不易對其產生抗藥性、對非靶標生物安全、活性成分的作用方式特異等特點，在綠色農業領域得到廣泛應用[1]。我國植物資源極為豐富，也是研究和應用植物源農藥較早的國家。據不完全統計，全世界已報道的抗細菌植物有11種，抗真菌的有94種，抗病毒的有17種，主要集中于楝科、菊科、豆科、衛矛科、大戟科植物。已有研究表明，厚樸葉粗提物對10種植物病原真菌有很強的抑制作用，在盆栽和大田試驗中也表現出較好的防治效果；從黃連提取物中分離到的生物堿可抑制5種病原真菌，包括番茄灰霉病原和油菜菌核病原，其菌絲生長和孢子萌發的抑制率達到100%、91.22%[1]。

白粉病是瓜類種植中較為普遍的真菌性病害之一[2-3]。白粉病在露地和設施栽培的瓜類中均有發生，潛伏期短、再侵染速度快、流行性強，可導致瓜類減產20%～40%。目前生產上對瓜類病害的防治以化學防治為主[4]，但使用化學藥劑后，瓜類產品質量存在安全隱患。很多植物提取液對白粉病有很好的抑制作用。張珍等[5]研究表明0.5%小檗堿水劑是從多種植物中提取制成的植物源殺菌劑，能有效防治多種病害，并且對人畜極為安全，是綠色農業的理想藥劑。郭志剛[6]采用0.3%苦參堿水劑可以有效地防治小麥白粉病，防效相當或優于對照藥劑15%三唑酮可濕性粉劑。唐蕊等[7]用80%乙醇作溶劑對9 種中草藥進行提取，9種提取液對黃瓜白粉病防效差異很大，有的表現出單方面的作用，其中Ts-37、Ts-24 兩種提取液則表現出良好的保護和治療雙重作用，與化學藥劑防效相當。周小軍等[8]研究了植物源殺菌劑0.5%小檗堿水劑對南瓜白粉病的防治效果，發現0.5%小檗堿水劑400倍液對南瓜白粉病的防效達到76.7%，極顯著優于對照藥劑20%三唑酮乳油1 500倍的效果，并且對南瓜安全。

本研究將多種植物中提取的活性物質進行混配，加工成混配水劑，對黃瓜白粉病病菌進行毒力測定，并研究了其對黃瓜、南瓜、西瓜白粉病的田間藥效試驗及安全性評價。

1 材料和方法

1.1 混配藥劑工藝流程

對各提取液進行相關有效成分含量分析后，按照一定比例在調制釜內利用凈化水進行混配。

基本工藝流程為：原料—提取—過濾—含量分析—混配—調整pH—靜置—成品。

混配劑經浙江省經濟和信息委員會醫藥石化行業辦公室提供檢測結果，生物總堿含量為0.82%，小檗堿質量分數為0.52%，水不溶物質質量分數小于1%，pH為8.0。混配水劑稀釋20倍后其低溫、熱貯穩定性好。黃柏皮、大黃、松脂、蘆薈、皂角、苦楝根為常見中草藥，經浙江省醫學科學研究院、浙江大學農藥與毒理研究所等單位進行毒性測定及環境生物毒性試驗，混配水劑對人畜微毒、對環境為中等毒性或低毒。

1.2 試驗方法

1.2.1 混配劑對黃瓜白粉病病菌毒力測試

試驗設6個處理，以混配劑中小檗堿的不同含量為濃度梯度配制藥液（分別為100、50、25、12.5、6.25 mg/L），以清水為對照。測試方法采用黃瓜葉片（離體）法：將未染病的黃瓜幼苗真葉摘下，每3片（大小一致）為1組，浸漬于系列濃度梯度的供試藥液中數十秒鐘，撈出后瀝去多余藥液，晾干，24 h后將新采集的黃瓜白粉病葉上的白粉病分生孢子充分抖撒接種，接種后葉片置于培養皿中（保濕），放入25 ℃人工智能箱中培養，保持葉片處于新鮮不腐狀態，以觀察各處理葉片的被侵染狀態（侵染斑點）。1周后，根據葉片上侵染病斑（點）數求出抑制侵染率，經查機率值換算表得出抑制侵染率的機率值，得到毒力回歸方程，并計算出EC50值[4-5]。抑制侵染率的計算公式為：

1.2.2 混配劑防治黃瓜白粉病田間藥效試驗

實驗地點：浙江金華蘭溪市蘭江街道辦事處春黃瓜大棚內。

職業教育是我國教育領域的主要構成部分，對推動經濟增長有著十分重要的作用。學校基層行政工作者是管理教育的主要構成部分，在培育人才的過程中承擔著十分關鍵的責任。不過，在職業教育發展中，高校始終傾向于教師文化素養與教育能力的提升，普遍忽略了行政工作者的職業特征與心理活動，進而導致學校的行政管理者出現普遍性的職業倦怠現象。

試驗共設5個不同濃度的混配水劑，分別為：混配劑稀釋400、600、800倍液，3%多氧清稀釋600倍液及清水空白對照，每處理重復4次，小區面積8 m2，區組隨機排列，四周不設保護行，施藥采用圍膜保護。噴霧量以植株全葉濕潤，不致滴液為準。

試驗期間正值黃瓜旺果末期，全田并未發生白粉病，于6月2日施藥1次，施藥后7 d，每小區隨機取樣4點，每點調查相鄰2株，共8株，分級調查每株全部葉片，計算病情指數和防效，分級標準和計算方法按照GB/T17980.30—2000規定執行，防治效果=（空白對照區病情指數-藥劑處理區病情指數）/空白對照區病情指數×100%，并對防效進行鄧肯氏新復極差（DMRT）顯著性分析。

施藥后1、3、7 d目測施藥對黃瓜生長的影響情況，對安全性進行考察。

1.2.3 混配劑防治南瓜白粉病田間藥效試驗

實驗地點：浙江省金華市農科院試驗場。

試驗共設5個不同濃度的混配水劑，分別為：混配劑稀釋400、600、800倍液，20%三唑酮乳油稀釋1 500倍液及清水空白對照，每處理重復3次，小區面積30 m2，區組隨機排列，試驗期間施藥3次（5月22日、25日、28日）。噴霧量以植株全葉濕潤，不致滴液為準。

第1次施藥前及第3次施藥后7 d，調查藥效。每小區隨機取樣3點，每點調查1株，分級調查每株全部葉片，計算病情指數和防效，并進行鄧肯氏新復極差（DMRT）顯著性分析，分級標準和計算方法按照GB/T17980.30 —2000規定執行，防治效果=1-{[（藥劑處理區藥后病情指數-藥劑處理區藥前病情指數）/藥劑處理區藥前病情指數）]/[空白對照區藥后病情指數-空白對照區藥前病情指數）/空白對照區藥前病情指數）]}。

施藥后1、3、5 d觀察施藥對南瓜生長的影響情況，對安全性進行考察。

1.2.4 混配劑防治大棚西瓜白粉病田間藥效試驗

試驗地點：浙江金華市農科院試驗場。

試驗共設5個不同濃度的混配水劑，分別為：混配劑稀釋400、600、800倍液，10%世高（苯醚甲環唑）稀釋1 500倍液及清水空白對照，每處理重復3次，小區面積15 m2，區組隨機排列，試驗期間施藥2次（5月28日、6月4日）。噴霧量以植株全葉濕潤，不致滴液為準。

第1次施藥前及第2次施藥后7 d，調查藥效。采用5點取樣法，每小區調查1 m2，調查病葉數，計算病情指數和防效，并進行鄧肯氏新復極差（DMRT）顯著性分析，分級標準和計算方法按照GB/T17980.30—2000規定執行，防治效果計算公式同1.2.3。施藥后1、3、5 d觀察施藥對西瓜生長的影響情況，對安全性進行考察。

2 結果與分析

2.1 混配劑對黃瓜白粉病病菌的毒力測試

表1 混配劑對黃瓜白粉病病菌侵染抑制作用測定結果

表1可以看出，混配制劑的濃度越高，抑制侵染效果越好，當混配液中小檗堿的有效含量為100 mg/L時，對白粉病的抑制侵染率最高，達88%。

根據混配劑對瓜類白粉病病菌侵染抑制作用測定結果（表1）求出其毒力回歸方程為：Y=4.2035+1.0253X，相關系數r=0.99，EC50=5.981 7。方程中Y為抑制侵染率機率值，X為濃度對數值。結果表明：混配劑對瓜類白粉病的侵染有較強的抑制作用，藥劑處理較空白對照侵染病斑（點）數明顯減少。抑制或殺死50%瓜類白粉病菌所需要的混配劑濃度為5.981 7 mg/L。

2.2 混配劑對黃瓜白粉病的防效和安全性

從混配劑對黃瓜白粉病的防效結果（表2）可知，混配劑稀釋400、600、800倍液，藥后7 d對黃瓜白粉病的平均防效分別為75.8%、69.2%、63.7%，防治效果隨著使用濃度的增加而增強。對照藥劑3%多氧清600倍液的防效為76.9%，經鄧肯氏新復極差（DMRT）顯著性分析，混配劑稀釋400倍液的防效與3%多氧清600倍液無顯著性差異；混配劑稀釋600、800倍液防效極顯著差于3%多氧清的防效。

表2 混配劑對黃瓜白粉病的防效

在施藥過程中，混配劑各濃度處理對黃瓜植株生長無不良影響，施藥后植株生長正常。

2.3 混配劑對南瓜白粉病的防效和安全性

從混配劑對南瓜白粉病的防效（表3）可以看出，混配劑稀釋400、600、800倍液，第3次藥后7 d對南瓜白粉病的平均防效分別為76.7%、64.5%、45.9%，防治效果隨著使用濃度的增加而增強。對照藥劑20%三唑酮1 500倍液防效為50.0%，經鄧肯氏新復極差（DMRT）顯著性分析，混配劑稀釋400倍液的防效極顯著優于20%三唑酮1 500倍液；混配劑600倍液處理防效顯著優于20%三唑酮1 500倍液；混配劑800倍液處理防效與20%三唑酮1 500倍液差異不顯著。

在施藥過程中，混配劑各濃度處理對南瓜植株生長無不良影響，施藥后植株生長正常、葉色正常，表明對南瓜生長是安全的。

表3 混配劑對南瓜白粉病的防效

2.4 混配劑對西瓜白粉病的防效和安全性

表4 混配劑對西瓜白粉病的防效

通過混配劑對西瓜白粉病的防效（表4）結果分析可知，混配劑稀釋400、600、800倍液第2次藥后7 d對大棚西瓜白粉病的平均防效分別為78.1%、74.8%、58.5%，防治效果隨著使用濃度的增加而增強。對照藥劑10%世高1 500倍液防效為78.2%，經鄧肯氏新復極差（DMRT）顯著性分析，混配劑400倍液的防效與10%世高1 500倍液差異不顯著，防效相當；混配劑600倍液處理防效與10%世高1 500倍液差異極顯著；混配劑800倍液處理防效極顯著差于混配劑稀釋400倍液、600倍液和10%世高1 500倍液的防效。

在施藥過程中，混配劑各濃度處理對西瓜植株生長和葉色無不良影響，施藥后無藥害發生，表明對西瓜生長是安全的。

3 結論與討論

試驗結果表明：多種植物活性物質混配劑對黃瓜白粉病的侵染有較強抑制作用。混配劑對黃瓜、南瓜、西瓜白粉病的防效隨著使用濃度的增加而增強。實驗表明在黃瓜上使用混配劑400倍液的防效與3%多氧清600倍液相當；在南瓜上使用混配劑400倍液的防效極顯著優于20%三唑酮1 500倍液；在西瓜上使用混配劑400倍液的防效與10%世高1 500倍液相當。經觀察，施用植物混配劑后對黃瓜、南瓜、西瓜生長無不良影響，對以上瓜類生長安全。

因此，多種植物活性物質混配劑稀釋400倍液對黃瓜、南瓜、西瓜白粉病有效好的防效，在農業生產上推廣使用，可減少化學農藥的使用；對降低農產品化學農藥殘留，提高農產品質量安全水平有現實意義。

黃柏皮、大黃、松脂、蘆薈、皂角、苦楝根等中藥材具有殺菌的功效，為常見的殺菌祛濕中藥，研究成果為利用多種植物活性物質防治植物病害提供了一定的思路，為進一步研究植物源殺菌劑提供了科學依據。對植物源農藥的研究、開發及在農業生產實踐中的綜合利用是一項涉及生態環境友好和食品安全的系統工作，必將有力地推動我國綠色農業的發展。

[1]劉雙清,張亞,廖曉蘭,等.我國植物源農藥的研究現狀與應用前景[J]. 湖南農業科學,2016（2）:115-119.

[2]吳燕君,洪文英,黃凱美,等.長瓜白粉病藥劑篩選及應用[J]. 浙江農業科學,2014（10）:1572-1573,1576.

[3]王國迪,滕玲.大棚長瓜白粉病的藥劑篩選試驗[J].杭州科技,2002（5）:41.

[4]王美英.西葫蘆白粉病生防放線菌篩選及其防治研究[D].楊凌:西北農林科技大學,2007.

[5]張珍,周小軍,陳禮威,等.0.5%小檗堿水劑對大棚西瓜白粉病的防治效果[J].長江蔬菜,2011（1）:47-48.

[6]郭志剛.0.3%苦參堿水劑防治小麥白粉病大田藥效試驗[J].農業科技通訊,2012（7）:87.

[7]唐蕊,張雪輝,曹克強.防治黃瓜白粉病中草藥提取液的篩選[J].北方園藝,2004（4）:84-85.