SAA聯合外周血T淋巴細胞、DNT細胞在肺癌診斷中的應用

周國芹

肺癌對人群健康和生命威脅最大，是當今世界范圍內發病率和死亡率增長最快的惡性腫瘤之一[1]，2/3的肺癌患者喪失了治療機會，因此早發現，早診斷，早治療是關鍵[2]。血清淀粉樣蛋白A（serum amyloid A，SAA）常被認為是炎性反應蛋白之一[3]。人SAA家族4個成員均能促進腫瘤細胞的遷移。運用流式細胞技術聯合檢測外周血T 淋巴細胞及雙陰性T淋巴細胞（doublenegative T-cell，DNT）在惡性腫瘤早期診斷中的應用[4]。DNT細胞已經被證實是一種免疫調節性T細胞，雙陰性T淋巴細胞（double-negative T-cell，DNT）的抗腫瘤作用是目前研究熱點課題[5]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1—10月入住我院呼吸科和胸外科，經胸部CT、X線或肺纖維支氣管鏡等各種檢查存在肺部陰影（片狀、結節狀、團塊狀等），伴或不伴臨床癥狀（咳嗽、痰中帶血、體重下降、發燒），經影像醫師、病理脫落細胞學診斷高度懷疑為肺癌患者158例，并且所有患者均為沒有進行手術、放化療、糖尿病、其他部位存在嚴重感染及其他惡性病史者；最終采用回顧性分析法，按經病理確診為肺癌患者98例，作為A組，年齡34～79歲，平均(48.9±9.3)歲。其中，男性56例，女性42例；另外60例肺部良性病變患者作為B組，其中，男34例，女26例，年齡27～83歲，平均(47.8.±9.1)歲，其中，肺部感染炎41例、肺膿腫14例、肺結核4例、其它1例；100例健康體檢人員作為正常對照組，即C組，男52例，女48例，年齡31～75歲，平均(50.4±8.3)歲，性別構成、平均年齡無統計學差異（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 要求各組人員正常生活飲食，空腹12 h，早晨靜脈采血，放入含乙二胺四乙酸二鉀抗凝管，血量約3ml。標本到實驗室后分為兩管，一管標本約1.0ml，在1小時內2000轉/min離心1 min，用血漿進行血清淀粉樣蛋白A檢測；另一管標本約2.0ml，用于外周血T淋巴細胞亞群及DNT細胞的檢測。

1.2.2 血清淀粉樣蛋白A的檢測 采用免疫熒光層析法檢測血漿血清淀粉樣蛋白A（SAA）的含量，儀器購自廣東市微米生物科技有限公司，AFS2000A干式熒光免疫分析儀及配套試劑盒，嚴格按系統標準操作規程和試劑盒說明書進行 。

1.2.3 外周血T淋巴細胞亞群及DNT細胞的檢測 （1）儀器與試劑：FC500流式細胞儀和熒光標記單克隆抗體均購自庫爾特-貝克曼公司。（2）方法：按照檢測要求，標本采集后6 h內檢測完畢，流式試管編號，每管加入20 μl相應單克隆抗體后，加入混勻的100 μl抗凝血，混勻，避光，室溫孵育15 min，再分別加入溶血劑，溶解未標記細胞及紅細胞，按標準操作程序上機檢測。SAA≥14.48 mg/L為陽性標準，T淋巴細胞亞群以臨床常用的CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值≤1.2為陽性標準，DNT細胞≥8.3為陽性標準。

1.3 統計學方法

SAA血漿濃度以中位數和范圍分別表示數據的集中和離散程度，計量資料以表示，采用SPSS 19.0統計軟件，以P＞0.05為有意義。

2 結果

2.1 各組SAA的檢測

各組SAA檢測結果。由表1可見，A組：肺癌組98例患者中，血漿SAA陽性率（即敏感性）為73.5%；B組：肺良性病變組60例患者中，血漿SAA陽性率68.3%；C組：健康對照組100例中，血漿SAA陽性率為5%；A組患者SAA水平和B組患者SAA水平均明顯升高，均高于C組，且A組和B組分別與C組比較具有明顯差異，差異有統計學意義（P＜0.05），但A組和B組兩組間無明顯差異（P＞0.05）。

2.2 各組外周血T淋巴細胞亞群檢測

見表2。

2.3 各組外周血DNT細胞檢測

各組外周血DNT細胞檢測結果，見表3。

2.4 各指標聯合檢測在肺癌診斷中的效果

見表4。

3 討論

目前，已發現數十種與肺癌相關的腫瘤標志物，但是尚未發現一種靈敏度及特異性均很高的腫瘤標志物[6，7]，有許多研究人員選擇腫瘤標志物進行聯合檢測不失為一種新方法的探討[4，6-9]。近年來，SAA 成為在惡性腫瘤診斷方面研究熱門[2，3，10，11，12]，本研究發現，肺癌組患者SAA水平和肺良性病變組患者SAA水平均明顯升高，均高于健康對照組，且肺癌組和肺良性病變組分別與健康對照組比較，具有明顯差異，差異有統計學意義（P＜0.05），但肺癌組和肺良性病變組兩組間無明顯差異（P＞0.05），并且表4表明其特異性和準確度在70.0%和71.3%，說明其在區分肺癌組和肺良性病變意義不大，但若其在健康體檢者中增高，尤其影像學檢查肺部有陰影、結節、斑塊的體檢者，就很有必要進行其他檢查，以排除肺部良性病變，做到對肺癌的早發現、早治療。

表1 肺癌組、肺良性病變組、健康對照組血漿SAA檢測結果

表2 各組外周血T淋巴細胞亞群檢測結果

表2 各組外周血T淋巴細胞亞群檢測結果

注：與A組比較：*P＜0.05

表3 肺癌組、肺良性病變組、對照組外周血DNT細胞檢測結果

表3 肺癌組、肺良性病變組、對照組外周血DNT細胞檢測結果

注：與A組比較：*P＜0.05

表4 SAA和T淋巴細胞亞群及DNT細胞聯合檢測與單獨檢測效果[n（%）]

綜上所述，雖然，本研究每個指標單獨檢測時，靈敏度、特異性、準確度均在75%以下，但聯合檢測時，明顯提高了其靈敏度、特異性、準確度：91.8%、96.9%、95.0%，表明有較大的臨床應用價值，而且做此三項指標檢測，只需抽一管血，在現在疾病診斷，需化驗項目日益增多的情況下，極大地方便了患者。另外SAA水平在肺癌、肺部良性疾病與健康體檢中有明顯差異，具有統計學意義，可將SAA作為一個日常體檢指標。

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