關于雞精中糖精鈉假陽性判定的研究

朱麗君，曾慶真，邵淑娟，孟令軍

(山東省菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 菏澤 274000)

1 概述

俗話說“民以食為天”，可見飲食在居民生活中所占的重要地位。作為愛好美食的泱泱大國，改進食物的味道是下廚者的終極目標。雞精作為調味利器，其安全性備受關注。雞精是一種復合調味料，通常要加入多種食品添加劑，但過量添加食品添加劑對人體是有危害的，檢測添加劑的含量顯得至關重要。糖精鈉作為甜味劑，是一種有機化工合成產品，沒有營養價值，短時間內攝入過多的糖精鈉會減少血小板，抑制血液再生，對肝臟和腎臟產生不利的影響，嚴重時可以致癌[1]。按國家相關標準的規定[2]，在復合調味料中糖精鈉最大使用限量值為0.15 g/kg，一旦檢出假陽性樣品，容易導致誤判、錯判，增加檢測風險。現有食品安全國家標準通常采用高效液相色譜法(附紫外檢測器)來檢測糖精鈉，但難以檢出假陽性問題，需用液相色譜串聯質譜法進行二次定性。本文致力于探索一種操作簡便的檢測方法，以期能夠一次解決假陽性定性和定量的問題，提高檢測效率，降低檢測成本。

2 高效液相色譜紫外檢測法

2.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(HPLC) 島津LC-20A(配紫外檢測器)；高速冷凍離心機。

糖精鈉對照品溶液：GBW(E)10008，中國計量科學研究院，1 mg/mL。

甲醇(色譜純，Fisher公司)；氨水、乙酸胺(分析純)；實驗室用水(超純水)。

2.2 試驗方法

2.2.1 溶液配制

將標準對照品溶液配制成0，1.00，5.00，10.00，20.00，50.00，100.00，200.00 mg/L的標準系列工作溶液，供高效液相色譜測定，繪制標準曲線，用以定量，臨用現配。

2.2.2 樣品前處理

準確稱取約2 g(精確到0.001 g)試樣于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于50 ℃水浴超聲20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，于8000 r/min離心5 min，將水相轉移至50 mL容量瓶中，于殘渣中加水20 mL，渦旋混勻后超聲5 min，于8000 r/min離心5 min，將水相轉移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0.22 μm濾膜，待液相色譜測定。

2.2.3 液相色譜條件

安捷倫ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×100 mm，4.6 μm)；流動相：甲醇∶乙酸胺溶液(0.02 mol/L)為5∶95；流速：1.0 mL/min；進樣體積：10 μL；柱溫：30 ℃；紫外檢測器：230 nm。

2.3 結果與分析

本次實驗從市場上廣泛流通的太太樂、廚邦等幾十個不同廠家分別抽取56份樣品，通過分析樣品譜圖發現，大多數雞精樣品中都有疑似糖精鈉的成分干擾糖精鈉的出峰，標準譜圖、樣品的譜圖及樣品加標譜圖見圖1～圖3。

圖1 糖精鈉標準品液相色譜圖

圖2 雞精樣品液相色譜圖

圖3 雞精加標樣品液相色譜圖

通過大量試驗，我們發現規律： 所有雞精樣品均在糖精鈉的出峰時間位置出現1～2個干擾峰，無論如何調整色譜條件均無法使目標峰與干擾峰的出峰時間錯開(樣品空白無干擾)； 加標樣品在糖精鈉出峰的位置出現2個峰，無論如何調整色譜條件均無法分開這2個峰。

通過以上兩點規律，可以判定雞精中含有與糖精鈉結構相似的組分，影響糖精鈉的定性定量。為了判斷該成分是否為糖精鈉，我們決定采用其他方法進行定性。

目前國家標準中涉及的測定糖精鈉的方法有4種，高效液相色譜法、薄層色譜法、離子選擇電極測定法以及氣相色譜法[3，4]。除此之外，也有文獻報道用酶聯免疫法[5]、分光光度法[6]、非水滴定法[7]、流動注射-化學發光法[8]、毛細管電泳法等測定食品中的糖精鈉得到較理想的分析結果，其中，定性效果最好同時也是應用最為普遍的是液相色譜串聯四級桿質譜聯用儀法[9]。參考相關文獻對雞精樣品進行分析，通過對比一級和二級質譜圖，可以確定干擾峰并非糖精鈉，結果圖譜見圖4～圖6。

圖4 糖精鈉標準品一級質譜圖

圖5 糖精鈉標準品二級質譜圖

圖6 雞精樣品一級質譜圖

液相色譜串聯四級桿質譜聯用儀法具有靈敏度高、選擇性好的特點，可以有效避免假陽性，但檢測成本較高，對于假陽性樣品需要二次檢測，影響了檢測效率。為此，我們嘗試一種能直接使用高效液相色譜儀同時進行假陽性判定和定量測定的方法，即紫外檢測器-串聯熒光檢測器的檢驗方法。

3 高效液相色譜紫外串聯熒光檢測法

3.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(HPLC) 安捷倫(配紫外串聯熒光檢測器)；高速冷凍離心機。

糖精鈉對照品溶液：GBW(E)10008，中國計量科學研究院，1 mg/mL。

甲醇(色譜純，Fisher公司)；氨水、乙酸胺(分析純)；實驗室用水(超純水)。

3.2 試驗方法

3.2.1 溶液配制

將標準對照品溶液配制成0，1.00，5.00，10.00，20.00，50.00，100.00，200.00 mg/L的標準系列工作溶液，供高效液相色譜測定，繪制標準曲線，用以定量。

3.2.2 樣品前處理

準確稱取約2 g(精確到0.001 g)試樣于50 mL具塞離心管中，加水約25 mL，渦旋混勻，于50 ℃水浴超聲20 min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2 mL和乙酸鋅溶液2 mL，混勻，于8000 r/min離心5 min，將水相轉移至50 mL容量瓶中，于殘渣中加水20 mL，渦旋混勻后超聲5 min，于8000 r/min離心5 min，將水相轉移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0.22 μm濾膜，待液相色譜測定。

3.2.3 液相色譜條件

安捷倫ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×100 mm，4.6 μm)。

流動相：甲醇∶乙酸胺溶液(0.02 mol/L)為5∶95；流速：1.0 mL/min；進樣體積：10 μL；柱溫：30 ℃。

紫外檢測器：230 nm；熒光檢測器：Ex=277 nm，Em=411 nm。

3.3 結果與分析

3.3.1 保留時間定性

通過紫外和熒光色譜圖對比，發現糖精鈉標準品分別在7.004，6.938 min出峰，峰形對稱；而雞精樣品的紫外譜圖在7.613 min處有干擾峰，而熒光譜圖不出峰，說明該干擾物質在給定的熒光條件下不出峰，從而達到了辨別假陽性樣品的目的，見圖7和圖8。

圖7 糖精鈉標準品熒光+紫外色譜圖

圖8 雞精樣品熒光+紫外色譜圖

3.3.2 工作曲線和檢出限

使用標準系列工作溶液繪制標準曲線，依據信噪比S/N=3，得出HPLC熒光檢測方法檢出限為3.0 mg/kg，優于GB/T 5009.28-2016中規定的檢出限(S/N=3時，其方法檢出限為0.005 g/kg)，見表1。

表1 糖精鈉的工作曲線和檢出限

3.3.3 精密度和回收率試驗

使用標準系列工作溶液按工作曲線條件測定6次，測得相對標準偏差為0.84%。取合格雞精樣品6份，分別加入糖精鈉標準對照品30，60 μg按3.2.2處理，測定糖精鈉的含量，計算回收率，結果在93.1%～102.4%。

由以上結果可以看出，該HPLC紫外檢測器串聯熒光法可以同時進行雞精樣品假陽性的判定及定量，符合檢驗要求。

4 結論

針對雞精樣品中廣泛存在的疑似糖精鈉干擾物質，本文先是通過液相色譜串聯質譜儀法對其進行確證性定性，確定其不是糖精鈉；又通過HPLC紫外檢測器串聯熒光檢測器的方法，探討了一種成本相對較低、操作簡便的方法，在判定雞精假陽性的同時完成定量。該方法靈敏度較高，精密度與準確性均符合標準要求，可以推廣到日常檢測中，有效提高檢測效率。

參考文獻：

[1]姜學涯,苑婷婷,黃一平,等.大棗中糖精鈉檢測的技術探討[J].中國食品添加劑,2016(1):147-151.

[2]GB 2760-2011,食品添加劑使用標準[S].

[3]GB 5009.28-2016,食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定[S].

[4]GB 5009.28-2003,食品中糖精鈉的測定[S].

[5]Wang Yu,Xu Zhen-lin,Xie Yan-yun,et al.Development of polyclonal antibody-based indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay for sodium saccharin residue in food samples[J].Food Chemistry,2011,126(1):815-820.

[6]Ni Y N,Xiao W Q.A differential kinetic spectrophotometric method for determination of three sulphanilamide artificial sweeteners with the aid of chemometrics[J].Food Chemistry,2009,113(4):1339-1345.

[7]劉超,羅紅霞,黃廣學,等.非水滴定法測定瓜子中糖精鈉[J].中國食品添加劑,2015(4):199-202.

[8]高向陽,魏姜勉,王珊,等.流動注射-化學發光法快速測定糖精鈉[J].理化檢驗(化學分冊),2011,47(12):1446-1449.

[9]許秀敏,吳西梅,梁春穗,等.液相色譜-質譜聯用檢測食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉[J].中國衛生檢驗雜志,2005,15(9):7057-7059.